全国甘薯区试甘薯抗病鉴定方法

1、全国甘暮区试甘暮抗病鉴定方法甘黑斑病抗性鉴定：采用针刺接种法鉴定块根对甘薯黑斑病(ceratocystis fimbriata ellis et halsted )的 抗性强弱。对照品种：以中度感病品种冲绳100号(胜利百号)作参照。鉴定方法：1、鉴定材料的繁殖：采用常规甘薯种植方法繁殖所有的鉴定材料。在收获时每个 供试品种选取3块中等大小、表面光滑、无伤烂的薯块，仔细洗净，晾干，编号后待用。2. 接种器具的准备：(1 )接种针的准备：取8号医用针头，将学生用橡皮切0.5s.5见方的小块，再 将针头从小块橡皮中心插入，用尺子量取针尖至橡皮的距离，确定为0.5cm。(2)其它物品的准备：消毒一批

2、培养皿、手术刀、剪刀、解剖针、蹑子和无菌水 备用。3 病菌分离与保存：可按常规方法分离致病力强的病菌株系，接种于pda培养 基上，置于冰箱保存。当年分离的病菌当年用，不宜保存时间过长，否则病菌的致病力 会下降。或用当年收挖薯块时田间采集的带病薯块作为室内黑斑病菌分离标样。病标 样分离时洗去薯块表面泥土，并用75%酒精进行表面消毒，在超净工作台上将病斑表 皮去除，再切取病斑部放入容器内捣碎。加适量水兑成黑斑病抱子悬浮溶液。按上述两种方法获得黑斑病电子悬浮溶液后，再选择无病斑薯块洗净切成厚约lcm 的薯片，大小以薯块大小定，把切好的薯片放入配好的砲子悬浮液内浸一下，取出薯片 晾干表面水分，再放入准

3、备好的经消毒过的10cm直径的培养皿内(培养皿内垫有保湿 纸，再在保湿纸上垫细玻璃管架），盖上培养皿，在25°c恒温培养箱内保持相对湿度95% 以上培养至薯片表面长满浅灰色的分生电子，约56d。待薯片长满灰白色的分生电子后，用无菌水冲洗，配成浓鞄子悬浮液备用。将浓翘子悬浮液稀释为1x10?个抱子/ml （或显微镜160倍下每视野40-60个抱子）的悬浮液备用。3接种方法与抗性鉴定:用医用注射针头蘸取配好的菌液，穿刺测试的薯块进行接种，每个薯块接种15个点（注意：每针剌1次，针头需蕪取菌液）,深度0.5cm。接种后的薯块装入消毒的塑 料箱中，加盖消毒纱布，置于25-28°c的

4、恒温室中，每天上午、下午各用温水浇湿覆盖 纱布一次进行保湿。培养10d后，切开薯块测量病斑直径和深度，计算平均病斑直径和 平均深度，与对照品种胜利百号相比判定抗性（注意：与本箱对照相比抗病表现百 分率按以下公式计算。抗病表现百分率供试品种病斑平均直径供试品种病斑平均深度x100=对照品种病斑平均直径对照品种病斑平均深度抗病表现百分率单位为 ,精确到0.1%。根据抗病表现百分率将甘薯黑斑病抗性分为五级。高抗（抗病表现百分率s40 ）抗病（40 抗病表现百分率三80 ）中抗（80 v抗病表现百分率勺20 ）感病（120 v抗病表现百分率勺60 ）高感（160v抗病表现百分率）抗性至少为两年一致的鉴

5、定结果，若不一致以抗性差的为准。甘薯根腐病抗性鉴定：采用田间自然诱发的方法鉴定甘薯品种对甘薯根腐病（ fusarium solani（mart.）sacc.f.sp.batatas mcclure ）的抗性强弱。对照品种：抗病品种：徐薯18、感病品种：胜利百号鉴定方法：在重病地进行自然诱发鉴定，参试品种于每年6月初栽插于自然诱发鉴定病中。每个品种栽5株，三次重复。栽插后40天调查地上部发病情况，并按分级标准分级，计算地上部病情指数。在10月下旬收获并根据分级标准调查地下部发病的平均值确定品种抗性。情况。计算地下部病情指数。根据地上、地下部病情指: 地上部分级标准：0级：看不到病症；1级：叶色稍

6、发黄，其它正常；2级：分枝少而短，叶色显著发黄，有的品种现蕾或开花；3级：植株生长停滞，显著矮化，不分枝，老叶自下向上脱落；4级：全株死亡。薯块病级按以下标准确定：0级：薯块正常无病症1级：个别根变黑（病根数占总根数的10%以下），地下茎无病斑，对结薯无明显 影响o2级：少数根变黑（病根数占总根数的10-25% ）,地下茎及薯块有个别病斑，对结 薯有轻度影响。3级：近半数根变黑（病根数占总根数的25.1-50.0% ）,地下茎和薯块病斑较多，对结薯有显著影响，有柴根。4级：多数根变黑（病根数占总根数的50以上 ）,地下茎病斑多而大，不结薯， 甚至死亡。病情指数按以下公式计算。卜十旧热 工（各级

7、感病株数x相应级数）inn炳情指数=扭盂呂址務 曰立痣刃谿“、x 100调查总株数x取廿病级数（4）病情指数单位为 ,确定到0.1%o根据病情指数确定种质甘薯根腐病抗性。高抗（病情指数s20）抗病（20 v病情指数40 ）中抗（40病情指数）感病（60 v病情指数三80 ）高感（80 v病情指数）抗性至少为两年一致的鉴定结果，若不一致以抗性差的为准。甘薯茎线虫病抗侵入性鉴定:采用甘薯茎线虫发生重病地进行病地自然诱发鉴定，鉴定参试品种的甘薯块根对 甘薯茎线虫病(ditylenchus destructor thorne )的抗抗侵入性强弱。感病对照品种：栗子香接种体制备：在3月上旬用甘薯薯块打孔

8、进行甘薯茎线虫的繁殖，栽种时切块放 入每穴中。接种方法与抗性鉴定：在专用病圃地，接种体充足时，穴施，然后栽苗。必须栽 春薯，每个品种小垄单行栽5株，三次重复。植株生长期140-150d收获，每个薯块横 切两刀，调查茎线虫病的危害程度。薯块病害级别按以下标准分级0级：无病1级：为害面积占薯块横切面积1/4以下。2级：为害面积占薯块横切面积1/4至1/2。3级：为害面积占薯块横切面积1/2至3/4o4级：为害面积占薯块横切面积3/4以上。病情指数按以下公式计算。xloo汁严一工(各级感病薯块数相应级数)调查薯块数x 4式中：4一最高病级数。病情指数单位为 ,精确到0.1%。计算防治效果按以下公式计

9、算。)x100防治效果=(1_某品种病情指数感病对照品种病情指数防治效果单位为 ,精确到0.1%0根据防治效果，将鉴定品种抗甘薯茎线虫病性分为五级。高抗：（防治效果80）擄：（60 v防治效果80 ）扳：（40 v防治效果60 ）騎：（20 v防治效果40 ）高感：（防治效果冬20）抗性至少为两年一致的鉴定结果，若不一致以抗性差的为准。甘薯茎线虫病抗扩展性鉴定：采用室内接种鉴定，鉴定参试品种的甘薯块根对甘薯茎线虫病（ditylenchus destructor thorne ）的抗扩展性强弱。感病对照品种：栗子香具体步骤：1 .线虫分离：从病地取带虫薯块，用浅盘法将线虫分离出来备用。2参试品种

10、准备：将需进行鉴定的品种，每品种准备三块中等大小的号块，清洗后用75%的酒精进行表面消毒，消毒后置于消毒过的塑料箱中备用，用高感品种栗子 香做对照。3线虫消毒：将分离出的线虫用400目筛网过滤，用无菌水清洗三次，放入预先 配好的青霉素+链霉素的消毒液中，消毒5min ,再用无菌水清洗三次，配成200条/lml 线虫的悬浮液备用。4 接种鉴定：用直径5mm的打孔器在每薯块中部打孔，用消毒过的移液器将200 条线虫打入孔中，再切下一小段薯条放置于孔口，用石蜡将孔口密封，放入消毒过的塑 料箱中，置于25°c室温下培养45天，进行调查评价。5调查评价：45天时将鉴定薯块取出，从打孔处切开，量

11、取薯块横切面上薯块的直径和线虫扩展大小，计算薯块横切面的面积与病斑面积的比值。再将薯块沿中心点纵 切，量取薯块纵切面上薯块的长度和线虫扩展的长度，计算薯块纵切面的长度与病斑长 度的比值。分别计算横切面和纵切面的防效，以横切和纵切面平均防效进行分级，评价 品种的抗感特性。防效计算：对照横切面比-品种横切面比品种横切防治效果=x100%对照横切面比对照纵切面比品种纵切面比品种纵切防治效果=xloo%对照纵切面比品种横切防效+品种纵切防效品种平均防治效果=2分级标准：高抗：平均防效n80% ；抗病：平均防效在60.1%-80% ；中抗:平均防效40.1 %-60% ；感病：平均防效20.1%-40%

12、 ;高感：平均防效冬20% ；甘薯品种（系）抗瘟鉴定方法:目的要求：甘薯品种（系）与薯瘟不同系互作中对i型菌抗性主要表现为质的差异。多数情况下不是表现高抗就是高感，且对温度要求不严；对ii型菌抗性表现为量的差异，属高 温型菌系，应当分菌系作抗性鉴定，才能客观反映同一抗病品种在不同薯瘟区种植抗性 表现不一。1、供试菌种：甘薯瘟2个菌系分别保存在一层室温的无菌水里，维持时间约1年。使用时划线到tzc平板上，于289下培养3d后出现典型致病菌落，移到psa斜面上，培养约36h 长满菌苔。每支管加无菌水5ml ,振摇成悬液，倒入含有150ml液体培养基的300ml三角瓶，瓶口包扎4层纱布，置于150r

13、/min下振荡2436h。发酵正常的摇培液为乳白 色、气泡多，用针筒吸取lml浸注接种到烟株叶片上，12h后出现褐色坏死斑，证明该 菌具侵染性。2、接种试验：在隔离条件下分别设置1、11型菌病圃，1型菌可在每年69月份接种，11型菌宜在7 8月份高温季节接种，将参试品种苗茎新鲜剪口浸入菌液里约20min ,取出栽入畦土， 每重复栽苗79株，每品种重复23次，以新种花，金山57和湘薯75-55为抗感对 照品种；栽后152（m经常浇水保湿，栽后23个月份逐株检查地下部病情及剖茎检 查维管束变褐程度和计数枯死株。此外，对i型菌抗性鉴定设盆苗剪叶接种作参考。3、病情分级与抗性评价：病情分级：0级：植株

14、正常无病。i级：拐头维管束变褐，薯块受害不明。ii级：茎维管束褐变扩展及地上部，薯块受害1/4内。iii级：拐头腐烂少结iv级：植株枯死。感染指数二1 xm + 2xnii+3xnm+4xnivx1004xnn为各级病株数；n为参试总株数抗性评价：咼抗（hr ）:病情指数0抗（r ）：病情指数0.6-20.5中抗（mr ）:病情指数20.640.5中感（ms ）：病情指数40.660.5感（s）:病情指60.6 80.5高感（hs ）：病情指数80.6100甘薯品种(系)抗蔓割病鉴定方法:目的要求：病菌侵染方式及表现症状与自然田间发病近似，人工接种达充分发病对照感病品种 病情指数90以上。1、

15、供试菌种：菌株经单鞄纯化后保存在49冰箱里，每4个月定期转管1次，使用时划线到含链 霉素平板上，挑取具镰刀菌特征的菌落，移入psa斜面上。置于30°c下培养45d长 满菌苔。将麦粒加水煮沸5min后，装入300ml的三角瓶，经高压灭菌。在无菌条件下 将斜面上菌苔移入麦粒培养基扩繁，然后配成浓度为3*107m子数/ml悬液。菌株培养 过程要经常检查及时淘汰被细菌、黄曲霉、青霉菌等污染的培养物。2、接种试验：选择沙壤土为病，将参试品种苗茎新鲜剪口浸入菌液里20min左右。取出载入病，每重复栽苗79株，每品种重复23次，分别以新种花和金山57为抗感对照品种， 栽后710d保持土壤湿润但不积

16、水。3、病情调查：接种4周后，逐株挖根剖茎检查维管束变褐程度及计数枯死株。如遇多雨季节常与 细菌性黑腐病，茎皮褐腐病等混合发生，调查尽可能将其它病害区分。3.1、病情分级标准：以株为单位。0 ( 0.0 )级：无病i ( 0)级：地上部生长正常，茎基部维管束变褐在3cm左右。ii ( 0.2 )级：地上部基本正常，茎基部维管束变褐在1/4左右。iii (0.5 )级：茎基部叶片变黄，维管束变褐在1/2以上。iv （ 0.8 ）级：植株叶片多数变黄枯死，茎部维管束变褐扩展及顶芽。v （ 1.0 ）级：全株枯死。感染指数二0.1 xm + 0.2xnii+0.5xnm+0.8xniv+ loxnv

17、xloon为各级病株数；n为参试总株:3.2、抗性评价标准：高抗（hr ）:病情指数0.020.5抗（r ）：病情指数20.6-40.5中抗（mr ）:病情指40.6-60.5中感（ms ）：病情指数60.680.5感（s ）：病情指数80.690.5高感（hs ）:病情指数90.6100甘薯疮痂病抗性鉴定方法:采用病圃接种法鉴定甘薯植株对甘薯疮痂病(£7$加"加jenkine et viegas和 sphaceloma batatas sawada )的抗性强弱。对照品种：抗病品种为广薯88-70.广薯111 ；感病品种为新种花、广薯79-15o接种体制备与接种方法：从病

18、圃中取带病斑的茎蔓，剪为l1.5cm长的节段。每瓶称取25g ,装入300ml的三角瓶中，加无菌水150ml。振荡2hr后取滤液用血球计数器测定鞄子数。将悬液调节为3xl04个抱子/ ml的接种液，于傍晚或雨后对薯苗喷雾接种。每小区栽苗12株，每品种重复3次，接种30d后调查病情。每小区调查20-25个 分枝，以发病高峰后的调查结果作为品种抗性评价的主要依据。植株病害级别按以下标准确定:病级病情0无症状1茎或叶有少数病斑，叶片能正常展开2分枝上的1/3叶片受害皱缩3分枝上的1/2叶片受害皱缩4新梢畸形，嫩叶卷皱5顶芽枯死或受损，叶片严重扭曲或变黄脱落6分枝上病斑密布，枯死或叶片全部脱落病情指数按以下公式计算：小，0xn. +0.2xn9 +0.4xn, +0.6xnd +0.8x ns + l.ox nadi=!= x 100n式中：di病情指数，%nx1至6级各级相应的发病株数n 供试总株数。病情指数以表示，精确到0.1%0根据病情指数确定种质甘薯疮痂病的抗性，分为五级。1高抗(£>/<10.5)3抗