实时荧光定量PCR技术在粮油转基因成分检测中的应用

1、实时荧光定量pcr技术在粮油转基因成 分检测中的应用大连工业大学摘要：随着我国在转基因粮油上的产量增加，造消费作物上随z增加，在作物的进行 育种中，更为广泛地采用转基因技术，所以对我们而言在检测粮油转基因物的 成分时，就要分析其技术。随着技术的发展，出现了一种可以实时地检测的技术 -实时荧光定量pcr技术，由于优势很多广泛地应用在粮油检测中。基于此木文 对实时荧光定量pcr技术进行分析，重点对其在粮油转基因成分检测中的应用 进行阐述，以供参考。关键词：实时荧光定量pcr;粮油;转基因成分;应用;1引言在我国，由于转基因技术的逐渐成熟化，以前转基因农作物还停留在实验阶段， 目前开始在具体的环境中

2、得到利用。油菜籽、玉米、大豆以及棉花是百分之九十 五的转基因农作物都集中于此。而且很多的农作物已经实现了生产上的商品化， 其种植面积不断扩大化。作为粮油质检机构，就要在转基因检测中遵循准确、快 速以及简便的原则进行，在定量以及定性进行进口转基因物的检测技术进行加 强，就要确保监督管理食甜的安全性。当前对待转基因的食品，人们越来越重视，而且更加重视其建立相关的转基因 成分标签制度，提高了更为严格的定量分析要求。在检测转基因的过程中采用传 统的pcr技术进行定性分析，因为反应抑制、不适当的操作以及高敏感性差导致 假阳性的岀现，传统的方法已经满足不了现在的检测要求。因为科学技术的成熟 化，实时荧光定

3、量pcr技术的不断创新，其操作简单、特异性强、具有很高的灵 敏度，可以定量地分析dna模板，而且可以实时地检测、没有产生污染、结果准 确度高以及可以实现自动化等优势。2实时荧光定量pcr技术2.1实时荧光定量传统pcr技术是可以定性进行，随着发展出现了实时荧光定量pcr技(realtime pcr),它可以实现定量核酸的技术。在美国applied biosystems 公司此技术就是由此开始的，就是利用荧光基团加入到pcr的反应体系中，而 且检测的荧光信号强度以及dna数量关系是线性相关。可以实时地对整个pcr 进程在荧光信号的积累下进行检测，进一步dna扩增曲线就刻意得到，对于定 量分析未知

4、模板时其中之一的方式就是可以利用标准曲线进行。在pcr反应中， d7a拷贝数就会产牛，而且增大反应循环数，dna拷贝数增加是以指数的形式进 入到平台期，实时荧光定量pcr技术和传统的pcr技术相比较，由于传统上定量 分析pcr采用终点法存在缺陷，但实时技术可以弥补其缺陷，可以实时地在pcr 反应扩增中进行检测，而且荧光信号经过连续的分析，就会扩增，当荧光信号 被检测出，就会得到曲线。所以指数期间时pcr反应可以进行对pcr产物量的检测，在某一个点进行，进一 步对模板的起始含量进行推断。实时荧光定量pcr反应时，处于指数期，为了更 为对样本进行检测，要进行荧光信号阈值的设置，而且荧光的本底信号是

5、基于 pcr反应之前的循环荧光信号进行，数量确定15个。样本的域值循环数ct就可 以用此进行定义，其模板的ct值和模板起始拷贝数对数是线性相关，ct值随着 起始拷贝数的增加值越来越小。对于未知样品ct值，利用标准的曲线就可以对 样品的起始拷贝数进行计算。2.2实时荧光pcr类型进行实时地定量分析时有两种方式:非探针类(sybr green)以及探针 类，采用tapman探针。前者扩增产物的原理就是利用特殊的设计或者染料进行， 易操作，低成木，但是特异性低;后者对引物进行指引的增加是用和靶序列特异 进行杂交的探针进行，优势就是特异性较高。2.3实时荧光定量pcr技术要求2. 3. 1实验室条件根

6、据转基因产品检测实验室技术要求(gb/t19495. 22004) 的相关要求设立pcr实验室，而且检测质量以及实验室的总体规定应该遵循， 粮食机构就是定量定性地检测对植物的样木的转基因。在对转基因进行检测的实 验室内，对于实验的各区域避免不相关的人员进入。检验核酸时，如果条件允许, 当区域进行隔开时，就要有缓冲间的设置，而且缓冲间相连的工作区域压力规 定为正值，缓冲间为负压，为了以免因为空气的流动，导致所处的环境遭到污 染，就要有连锁的装置的安装在缓冲间以及工作间之间。检验不同种类的核酸时, 工作区域应该相互独立，之间不能对开门，并用标志进行区分。若是区域之间是 相连的，要将物品传递窗进行安

7、装，对此工作区就有要求，要进行254mn波长 的紫外灯的安装，而且是40w的，每隔20ni区域进行安装，灯和地面距离误差在 2. 0±0. im 范围。由于实验室的工作区域就是对试剂进行制备的区域，主要进行分装试剂、制备贮 存的试剂以及制备在主反应的混合液，所以就要进行设置。要注意的是，没有对 控制气流压力有严格的规定，但是压力梯度，为了以相邻间的气溶胶流动污染， 就要规定为正值，和邻近区相反，注意在本区域尽量避免走动。在区域进行试剂 的原材料贮存，而且它的制备也要在区域进行。处理样品就要提取样品的核酸， 进一步进行贮存，混合液进行扩増。3结语传统的荧光定量采用的是终点检测的方式，但是利用pcr技术，可以实现没有 后处理的步骤，如不需要进行电泳，而且打破传统方式，分析利用的是闭管， 当检测人员检测吋，其目的产物同位素具有放射性，但是可以避免，而口核酸 扩增物会产生交叉的污染，但是利用此技术可以降低。所以，此技术实现了检测 更为灵敏，检测时间减少，由于传统检测速度慢、而且并不具有特异性，pcr技 术可以实现其提高，不仅在检测致病菌上得以使用。而且在定量定性检测粮油转 基因成分时，广泛利用实时荧光定量pcr技术，促进了在以后致病菌以及粮油 转基因成分的发展屮更具有潜力。参考文献1 许安君.实时荧光定