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文档简介
1、关于试剂在诊断层析膜上条带化的更深入的理解材料和方法材料:膜:类型:unisart cn140不带背衬(徳国赛多利斯)材质:硝化纤维吸水速度:140 s/ 4 cm标称孔径:8pm厚度:140pm蛋口结合能力:2.5g/l孔隙率:85%浸透:阴离了型表血活性剂线显示面:正面抗体:alex flour 555类型:羊抗鼠igg抗体 荧光标记:标记浓度:5mol标记物/i mol抗体方法:线条的印刷与蛋白质的形象化泵流量10 pl/s移动喷嘴速度:5 cm/smoving n|ozzle speed: 5 cm/scn140诊断膜 diagnosticcn140 membrampump flow
2、rate:10 |il/s印刷毛细管内径:100pm printing capillary八、” inner diameter: 100um印刷的线条pprinted line1, 印刷荧光标记的抗体溶液在不同浓度抗体屮的线条2, 把膜在50° c下放30分钟,干燥。3. 荧光显微法可看见蛋白质分布在膜的横截面。4. 确定蛋白线的深度和宽度。荧光抗体标记的 膜横截面membrane cross section with labelled antibodywoooo线宽(渗透)line depth (penetration)0300distanee pixelssartorius结果和
3、探讨荧光就微法看到的膜横截miparameters: 2pl/cm 50 mm/s0.025 g/l0.100 g/l0.25 g/l2 g/l5 g/l不同蛋门浓度下的标准突破曲线参数:2pl/cm 5 mm/s(calculated solution5 g/l2 g/l0.25 g/l0.025 g/lsartoriusline depth pmthickness of m emb rar (=140 pm)line width mmcalculated width of wet line (= 1r8 mm)sartoriu 膜层析进展的假设计算溶解线条的宽度最小的蛋口质宽度是由液体的弯月面决定的。calculated solution5 g/l2 g/l0.25 g/l0.025 g/l蛋白质过量会形成“horns”:盐效应假设在高的蛋口质浓度下会形成“horns” y代表口由,分散的抗体二线条的边缘蒸发最快二过多的抗体被送到线条边缘:盐效应 结论1, 最小的蛋白线条宽度是由润湿弯月而决定的。2, 弯月面的形状是山下面这些主要过程中的参数影响的:a:试剂溶液的表面能=盐的加入会加宽线条的宽度。二酒精或表面活性剂的加入会增加线条的宽度。b:试剂条参数二增加体积流率会增加线条的
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