牛乳微生物测定方法

1、微生物的生长于繁殖的感念生长微生物细胞吸收营养物质，进行新陈代谢，当同化作用大于异化作用时，生命个体的重量和体积不断增大的过程。繁殖-生命个体生长到一定阶段，通过特定方式进行新的生命个体，即引起生命个体数量增加的生物学过程。发育从生长到繁殖，是生物的构造和机能从简单到复杂、从量变到质变的发展变化过程，这一过程称为发育。个体生长微生物细胞个体吸收营养物质，进行新陈代谢，原生质与细胞组成的增加为个体生长。群体生长群体中个体数目的增加，可以用重量、体积、密度或浓度来衡量。由于微生物的个体极小，所以用群体生长来反映个体生长的状况。个体生长个体繁殖群体生长群体生长=个体生长+个体繁殖平板菌落计数法 最常

2、用的活菌计数法。将适当稀释的菌液倾注平板或涂布在平板表面，经保温培养后，以平板上出现的菌落数乘以稀释度就可以计算出原菌液的含菌量。直径9CM的培养皿平板上出现菌落数一遍以50-500为宜。按照国家标准规定的样品菌落总数测定的计数原则，以平板菌落在30-300之间的为报告依据。技术要求：样品充分混匀，操作熟练快速，一般10-20分钟完成操作，严格无菌操作。注意事项：每一支吸管只能用于一个稀释度，样品混匀处理，倾注平板时的培养基温度。适用范围：中温、好氧和兼性厌氧，能在营养琼脂上生长的微生物。误差：多次稀释造成的误差是主要来源，其次还有由于样品内菌体分布不均匀、以及不当操作。微生物的个体生长和同步

3、生长由于微生物细胞及其微小，研究其个体生长存在着技术上的困难。同步生长的概念：一个细胞群体中各个细胞都在同一个时间进行分裂的状态，称为同步生长。进行同步分裂的细胞称为同步细胞。同步细胞群体在任何一时刻都处在细胞周期的同一相，彼此间形态、生化特征都很一致，因而是细胞学、生理学和生化学等研究的良好材料。二、微生物的群体生长1、无分支单细胞微生物的群体生长特征无分支单细胞微生物主要包括细菌和酵母菌，其群体生长是以群体中细胞数量的增加来表示的。由一个细胞分裂成为两个细胞的时间间隔称为世代，一个世代所需要的时间就是代时（Generation G）代时也就是群体细胞数目扩大一倍所需时间，有时也称为倍增时间

4、。下图表示的是一个细胞经过若干代分裂后的情况。由下图可见，每经过一个代时，细胞数目就增加一倍，呈指数增加，因而被称为指数生长，这就是单细胞群体生长的特征。指数生长可以用下式表示：2、无分支单细胞微生物的群体生长曲线 以细菌为例介绍无分支单细胞微生物群体生长规律，其结论也基本适用于酵母菌。生长曲线代表了细菌在新的环境中从开始生长、分裂直至死亡的整个动态变化过程。 每种细菌都有各自的典型生长曲线，但它们的生长过程却有着共同的规律性。一般可将生长曲线分为四个时期。时期的划分：按照生长速率常数（growth race constant）不同1、延滞期（lag phase）其他名称：停滞期、调整期、适应

5、期1.1现象：活菌数没增加，曲线平行于横轴1.2特点：生长速率常数=0细胞形态变大或增大细胞内RNA特别是rRNA含量增加，原生质嗜碱性增强合成代谢活跃（核糖体、酶类、ATP合成加快）、易产生诱导酶对外界不良条件敏感，如氯化钠的浓度、温度、抗生素化学药物1.3原因：适应新的环境条件，合成新的酶，积累必要的中间产物。影响延迟期长短的因素菌种：繁殖速度较快的菌种的延迟期一般较短：接种物菌龄：用对数生长期的菌种接种时，其延迟期较短，甚至检查不到延迟期。接种量：一般来说，接种量增大可缩短甚至消除延迟期（发酵工业上一般采用十分之一的接种量）培养基成分：在营养成分丰富的天然培养基上生长的延滞期，比在合成培

6、养基上生长的时短。接种后培养基成分有较大的变化时，会使延滞期加长，所以发酵工业上尽量使发酵培养基的成分和种子培养基接近。认识延迟期的特点及形成原因对实践的指导意义：在发酵工业上需要设法尽量缩短延滞期：采取的缩短延滞期的措施有：A、增加接种量：群体优势-适应性增强B、采用对数生长期的健壮菌种：C、调整培养基的成分，在种子基中加入发酵培养基的某些成分D、选用繁殖快的菌种 在食品工业上，尽量在此期间进行消毒或灭菌2、对数期（logarithmic phase）其他名称：指数期2.1现象：细胞数以几何级数增加，其对数与时间呈直线关系。2.2特点：生长速率常数最大，即代时最短。细胞进行平衡生长，菌体大小

7、、形态、生理特征等比较一致，代谢最旺盛细胞对理化因素较敏感2.3影响因素：菌种营养成分营养物浓度 培养温度2.4应用意义：由于此时期的菌种比较健壮，增殖噬菌体的最适菌龄；生产上用作接种的最佳菌龄。发酵工业上尽量延长该期，以达到较高的菌体密度。食品工业上尽量使有害微生物不能进入此期。是生理代谢及遗传研究或进行染色，形态观察等的良好材料。3、稳定期（stationary phase）又称横定期或最高生长期3.1特点：新增殖的细胞数和老细胞数的死亡数几乎相等，微生物的生长速率处于动态平衡，培养物中的细胞数达到最高值。细胞分裂速度下降，开始积累内含物，产芽孢的细菌开始产芽孢。此时期的微生物开始合成次生代谢产物，对于发酵生产来说，一般在稳定期的后期产物积累达到高峰，是最佳的收获期。3.2产生原因：营养物尤其是生长限制因子的耗尽。营养物的比例失调，如碳氮比不合适；有害代谢废物的积累（酸、醇、毒素等）物化条件（如PH、氧化还原势等）不合适；4、衰亡期（decline phase）4.1特点细胞死亡数增加，死亡数大大超过新增殖的细胞数，群体中的活菌数目急剧下降，出现“负增长”。细胞内颗粒更明显，细胞出现多形态，畸形或衰退形，芽孢开始释放。因菌体本