银杏叶联合骨髓间充质干细胞降糖疗效观察

1、银杏叶联合骨髓间充质干细胞降糖疗效观察吉林大学中日联谊医院130033【摘 要】目的：银杏叶联合骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stems cells, bmscs)对(i型)糖尿病大鼠模型降糖疗效观察。方法: 建立i型糖尿病wistar大鼠模型并随机分为糖尿病(dm)组、银杏叶(ginkgo biloba l.extract egb)组、egb+bmsc 组、bmsc 组，同时设置对照(contral)组， 其中egb+bmsc组经眼眶静脉输注骨髓间充质干细胞，并给予银杏叶提取物治 疗，观察各组大鼠血糖、胰岛素、超氧化物歧化酶(sod)、谷胱甘肽过氧化物 酶

2、(gshpx)、白介素6 (il-6)等指标变化。结果:egb+bmsc组的血糖、il-6水 平显著低于egb、bmsc组(p<0.05),而胰岛素、sod及gsh-px水平较之升 高(p<0.05)；结论：egb联合bmsc治疗可显著降低糖尿病大鼠血糖水平， 增加胰岛素分泌，减轻细胞炎症反应，为糖尿病治疗提供新的方法。【关键词】骨髓间充质干细胞；银杏叶提取物；氧化应激【中图分类号】r551.3【文献标识码】a【文章编号】2096-0867 ( 2015 ) -09-021-02既往研究1证明，糖尿病患者体内氧化应激水平较高，加重胰岛细 胞的损伤；银杏叶提取物含抗氧

3、化成分，可清除自由基，减弱氧化应激水平，减 少内皮细胞的凋亡2。间充质干细胞是一种幼稚细胞，具有多向分化潜能，相 关研究3-4通过其可塑性，将其诱导分化为胰岛细胞来降低血糖。但糖尿病 患者机体内高氧化应激状态下的微环境，会加速移植干细胞的死亡5,为此, 利用银杏叶抗氧化应激作用，联合骨髓间充质干细胞降糖成为一条可能的治疗途 径。木实验将对二者联合降糖的疗效与单药治疗进行对比。1材料和方法1.1材料及方法选取健康的wistar成年雌性大鼠60只，体重 200246g,购自吉林大学基础医学院动物实验中心obmscs取自5天的wistar大 鼠乳鼠股骨。stz购于大连美罗药厂。银杏叶提取物购自台湾济

4、生化学制药厂股 份有限公司。大鼠sod和gsh-px试剂盒购于南京建成生物公司。分别给予腹 腔内注射stz配置液(stz粉末溶于枸椽酸枸椽酸钠缓冲液，配置成o.lmol/l, ph值为4.3),齐ij量为55mg/kg.d-l,当大鼠尾静脉血糖值连续2次>16.7mmol/l吋成功建模i型糖尿病。将其随机分为egb组、dm组、bmscs 组以及egb+bmscs组。另选取10只人鼠只注射等剂量的枸椽酸枸椽酸钠缓冲 液作对照。egb组每日给予0.8 ml kg-1的egb； egb+bmscs组先给予等量的 egb注射7天，7天后从眶下经脉输注1106个bmscs/只；bmscs组

5、的大鼠则于第7天直接从眶下静脉输注1106个bmsc/只；dm组及对照组给予注射0.8mlkg-1/只的生理盐水。1.2标本采集及指标测定：于第20天处死大鼠，并取其静脉血留做标 本，采用黄瞟吟氧化酶法测定血清sod含量，二硫代双硝基苯甲酸直接显色法 测定血清gsh-px含量，elisa方法测定血清il6含量。1.6统计分析：符合正态分布的计量资料以均数±标准差(x ±s)表示，正态分布且方差齐的资料，采用单因素方差分析，组间比较 采用snk-q检验，当p<0.05为差异有统计学意义。2 结果：2.1各组人鼠检测指标的测定比较egb+b

6、msc组的血糖、il-6水平明显低于dm组、egb组、bmsc组(p<0.05)；而胰岛素分泌水平、血清sod、gsh-px活性明显高于上述各组 (p<0.05)；结果表明相比单独移植bmsc,联合egb可以帮助bmsc减轻移 植环境的氧化应激水平及炎症反应程度，进一步降低血糖水平、增加胰岛素分泌 水平。见表1.表1各组大鼠检测指标比较(x ± s, n二5)3 .讨论：美国内分泌医师协会在2004年曾提出体内的氧化应激6是糖尿病 及其并发症的共同发病机制。正常机体内存在氧化系统与抗氧化系统的动态平衡,而糖尿病的高血糖状态可通过葡萄糖的自身氧化

7、、线粒体途径等使细胞内产生过 多的0、过氧硝基自由基、活性氧簇(ros),打破了这种平衡。由于缺乏内源性抗氧化代偿机制，使机体氧化还原稳态失衡。血糖刺激器官产生自由基有多 条途径，包括线粒体氧化磷酸化途径、脂质过氧化物酶、nadph氧化酶和一氧 化氮合酶(nos)等7-8o 一方面，过多的自由基导致细胞蛋白质、dna损伤， 使细胞最终死亡9； ros是细胞内一种信号分子，过多的ros可介导多种信 号转导途径、转录因子的激活10,并直接氧化dna、脂质、蛋白质损伤细胞， 体内氧化成分如脂质过氧化产物mda增加，而抗氧化成分降低，如sod、gshpx, 降低，加重糖尿病机体内细胞损害及并发症的发生

8、；sod是抗氧化防御系统中 重要的酶类，它可以去除超氧阴离子，避免细胞受到体内自由基损害，通过检测 体内sod的水平，可反映机体清除氧自由基的能力；gsh-px作用与sod相似， 它不仅可清除h2o2,还可以清除mda。另一方面，长期高血糖还会通过氧化还 原依赖机制，刺激内皮细胞分泌炎性因子，引起病理损伤，进一步加重细胞损伤 凋亡。已有利用骨髓间充质干细胞诱导为胰岛细胞降糖的研究报导，但是由于 糖尿病患者机体内环境高氧化应激水平，移植细胞的生存率较低1门。我们在 移植bmsc之前，通过利用银杏叶抗氧化应激及减轻炎症反应的作用，提前给 予银杏叶治疗，改善机体内高氧化应激的生存环境，结果显示其对于

9、移植bmscs 的存活是十分必要的。这与国外类似报导是一致的12。本研究结果表明，与 dm、bmsc组、egb组相比，egb+bmsc联合治疗可以进一步改善dm体内氧 化应激的程度，其中sod、gsh-px水平升高，减弱细胞内炎症反应，il6、il-10 水平降低；降低细胞凋亡水平，使bax表达降低，bcl2水平升高。综上，egb+bmsc联合治疗糖尿病效果显著，能够改善糖尿病大鼠体内 氧化应激水平，进一步降低血糖，减少细胞内炎症反应。参考文献：1yang h, jin x, kei lcw, et al.oxidative stress anddiabetes mellitusj .clin

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