反刍动物饲料降解率测定技术规程9[1]30

1、反刍动物饲料瘤胃降解率的测定瘤胃尼龙袋法技术规程Regulation for Determination of Rumen Degradability ofFeeds for RuminantsRumen nylon bag method1 主题内容与适用范围1.1 主题内容本规程规定了采用瘤胃尼龙袋法测定各种反刍动物饲料主要营养成分瘤胃降解率的试验条件、试验方法、结果计算和结果表示。1.2 适用范围1.2.1 本规程适用于一切理化性质符合采用瘤胃尼龙袋法测定其主要营养成分瘤胃降解率的反刍动物饲料。1.2.2 适用于本规程测定瘤胃降解率的饲料营养成分主要包括：干物质、有机物、粗蛋白、中性洗涤纤

2、维和酸性洗涤纤维。1.2.3 本规程1.2.2中未包括的适用于采用瘤胃尼龙袋法测定的饲料其他营养成分和非营养目标成分的瘤胃降解率的测定可参照本规程的相关条款进行。1.2.4 本规程1.2.1中未包括的适用于采用瘤胃尼龙袋法测定的饲料类似物中营养成分和非营养目标成分的瘤胃降解率的测定可参照本规程的相关条款进行。1.2.5 下列饲料和饲料类似物不适用于本规程瘤胃降解率的测定：（1）水溶性超过5的饲料和饲料类似物。（2）颗粒直径过小或45 mm筛孔筛下物超过5%的饲料和饲料类似物。（3）理化特性不适用于本方法的其他饲料和饲料类似物。1.2.6 某些饲料或饲料类似物，如高含量的维生素和微量元素制品或预

3、混料，微生态制剂和药物等化学制剂，有毒有害物质含量过高的饲料或饲料类似物质，在本规程所规定的装样量情况下足以导致试验动物瘤胃功能及其他生理机能异常，此类饲料和饲料类似物不适用于直接采用本规程测定其目标成分的瘤胃降解率。但可根据其特性采取适当降低装样量的方法进行测定。2 规范性引用文件下列文件中的条款，通过本规程的引用而成为本规程的条款。凡是注明日期的引用文件，其随后所有的修改字（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本规程，然而，鼓励根据本规程达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本适用于本规程。GB6435-86 饲料中水分含量的测定GB/T6438

4、-2007 饲料中有机物含量的测定GB/T6432-1994 饲料中粗蛋白含量的测定GB/T20805-2006 饲料中中性洗涤纤维含量的测定GB/T20805-2006 饲料中酸性洗涤纤维含量的测定3 术语3.1 瘤胃实时降解率（Instantaneous rumen degradability）被测饲料在瘤胃中停留某一定时间某成分被降解的部分占该成分原含量的百分比称该饲料该成分在该时间点的实时降解率，用质量百分数表示。3.2 瘤胃食糜外流速率（Outflow rate of rumen digesta）指单位时间内从瘤胃中流出的食糜重量占瘤胃内食糜重量的百分比，用“%/h”表示，是表示饲料

5、在瘤胃内停留时间的重要指标。3.3 瘤胃有效降解率（Effective rumen degradability）不同性质的饲料在瘤胃内实际停留的时间不同，根据不同时间点的实时降解率，结合实际饲喂条件下瘤胃食糜外流速率计算而得的降解率称瘤胃有效降解率，表示被测饲料在实际饲喂条件下的瘤胃降解程度，是配合反刍动物日粮时实际使用的降解率，又称动态降解率。用质量百分数表示。3.4 饲料类似物（Feed-like materials）指根据饲料的分类与定义未被界定为饲料的、但可通过采食方式进入反刍动物瘤胃的物质。此类物质中，有些具有某种营养功能或非营养生理调控功能，但其可否作为饲料在反刍动物生产中使用需要

6、进一步研究；有些虽然具有一定营养或生理功能，但含有有毒有害成分，其在反刍动物生产中的使用方法与限量需要进一步研究。在对此类物质的研究中有时需要测定其中所含某种成分的瘤胃降解率。3.5 非营养目标成分目标成分指所要测定的成分。目标成分可以是粗蛋白、中性洗涤纤维等营养成分，也可以是棉酚、黄曲霉毒素等非营养成分。3.6 培养时间（Incubation time）指装有待测样品的尼龙袋在瘤胃内的停留时间。4 试验条件4.1 试验动物试验动物为成年普通牛或成年绵羊。数量至少4头以上。要求品种相同，年龄、生理状态、生产性能相近，发育正常，健康状况良好。试验动物应安装有永久性瘤胃瘘管，瘘管内径大于40 mm

7、。安装瘤胃瘘管手术后20天以上，已恢复正常生理状态。除特殊试验要求外，一般不用水牛、牦牛和瘤牛及其杂交后代作为试验动物，也不用山羊（包括绒山羊、奶山羊、肉用山羊等）及其杂交后代作为试验动物。4.2 试验动物的饲养管理4.2.1 动物日粮4.2.1.1 试验动物采用常规牛（羊）饲料原料，根据相应饲养标准配制日粮，按1.3倍维持水平饲养，日粮精粗比为4:6。4.2.1.2 日粮中不可添加任何抗生素、生长促进剂、微生物和微生态制剂。也不可添加任何诸如寡糖、小肽、有机酸等瘤胃功能和环境调控剂及干扰瘤胃正常发酵机能的物质。4.2.2 饲养管理4.2.2.1 试验动物按该品种动物常规程序饲养管理，每天饲喂

8、23次，自由饮水。4.2.2.2 测定前预饲至少15天。4.2.2.3 预饲期和测定过程中不能更换日粮，不能对试验动物进行免疫、治疗及实施其他可能干扰瘤胃消化机能的任何措施。4.3 试验材料4.3.1 尼龙袋4.3.1.1 选用孔径为50 mm的尼龙布，制成长×宽为8 cm×12 cm的尼龙袋，袋底部两角呈钝圆形，以免样本残留。4.3.1.2 尼龙袋用细涤纶线双线缝合。针孔用在瘤胃内不易溶解或脱落的胶粘剂弥合。散边用电烙铁烫平或用酒精灯烤焦，以防止尼龙布脱丝，尼龙线脱落。4.3.1.3 新制作的尼龙袋用不易在瘤胃中褪色的墨水编号。用前放入瘤胃内72 h，取出、洗净、65烘干

9、后方可使用。4.3.2 半软塑料管4.3.2.1 半软塑料管的作用是固定尼龙袋，并保证装有待测样品的尼龙袋始终沉浸于瘤胃食糜中。4.3.2.2 半软塑料管的直径应介于0.50.8 cm之间，羊用的细一些，牛用的粗一些。长度羊用25 cm，牛用50 cm。4.3.2.3 在塑料管的一端距顶端12 cm处向内划透一长3 cm的夹缝，用于固定尼龙袋。在塑料管的另一端距顶端12 cm处打一直径约0.5cm的孔，系一条结实的尼龙线，用于将半软塑料管固定于瘤胃瘘管盖上。4.3.2.4 也可以采用其它方法固定尼龙袋，但所采用的方法必须保证尼龙袋始终沉浸于瘤胃食糜中。5 试验方法5.1 待测样品的准备将待测样

10、品3 mm筛孔粉碎，置于样品瓶内，清洁干燥处保存备测。5.2 称样与装袋5.2.1 将尼龙袋、饲料样品置于真空干燥箱或鼓风干燥箱内65下恒重。5.2.2 用分析天平称取尼龙袋重量，然后采用适当工具将经称重的待测样品小心放入尼龙袋底部，注意袋口处切勿沾染样品。精饲料样品每个袋4g左右，粗饲料样品每个袋2g左右。尼龙袋和待测样品均精确至0.0001克。每个待测样品装48个尼龙袋。5.2.3 对于某些待测样品，每个尼龙袋的样品量可根据其特性灵活调整。5.3 将尼龙袋固定于半软塑料管上分别将每两个装有待测样品的尼龙袋口交叉夹于一根半软塑料管的夹缝中，用橡皮筋缠绕固定，确保其不渗漏、不脱落。5.4 尼龙

11、袋的放置在早晨饲喂前1 h，打开试验动物的瘤胃瘘管盖，借助木棒（或其他适宜工具）将固定尼龙袋的半软塑料管连同尼龙袋一起送入瘤胃腹囊食糜中。用塑料管上端的尼龙线将半软塑料管固定于瘘管盖上。每头（只）试验动物放置7根半软塑料管，计14个尼龙袋。4头（只）试验动物共放置28根半软塑料管，计56个尼龙袋。5.5 培养时间5.5.1精饲料的培养时间为：2，4，8，16，24，36和48 h。粗饲料的培养时间为：4，8，16，24，36，48和72 h。 5.5.2 也可根据待测样品的降解特性适当增加培养的时间点，如1h，12h等。5.6 尼龙袋的取出将装有待测样品的尼龙袋放入试验动物的瘤胃后开始记录培养

12、时间，每个培养时间点从每头（只）试验动物瘤胃中各取出一根管（连同上面所系的2个尼龙袋），直至所有塑料管（尼龙袋）全部取出为止。5.7 尼龙袋的冲洗将取出的尼龙袋浸泡在冰水中，并立即用自来水冲洗，在冲洗过程中可用手轻轻挤压，直至水清为止。在冲洗过程中严格防止尼龙袋中的残余物随水逃逸。5.8 尼龙袋的烘干将冲洗过的尼龙袋（连同之中的残余物）置于真空干燥箱或鼓风干燥箱内65下恒重。用分析天平称重，精确至0.0001克。5.9 样品与培养残余物目标成分含量的分析分别将各培养时间点尼龙袋中的残余物完全转移出来。采用相应的国家标准或行业标准所规定的方法分别测定装袋样品中和培养后残余物中各目标成分（如干物质

13、、蛋白质、中性洗涤纤维等）的含量，并统一折算为65下的含量。5.10 样品空白试验某些细小的样本颗粒可能不经瘤胃降解就迅速通过尼龙袋孔逃逸，此部分实际上并未真正参加瘤胃的降解过程，因而应从装袋样品中扣除。这部分未经瘤胃降解就直接从尼龙袋中逃逸的样品可通过空白试验进行校正，即在进行上述操作的同时，按步骤5.2和5.3的操作另装2个尼龙袋，但不将其放入瘤胃内，直接对其按步骤5.7、5.8和5.9进行处理。6 结果计算6.1 装袋样品量的校正6.1.1 装袋样品逃逸率的计算采用下式计算装袋样品干物质逃逸率：6.1.2 校正装袋样品量的计算采用下式计算校正装袋样品量：校正装袋样品量（g） 实际装袋样品

14、量（g）×（1样品逃逸率（）6.2 目标成分降解量的计算采用下式计算样品各目标成分各培养时间点的降解量：某目标成分某培养时间点的降解量（g） 校正装袋样品量（g）× 空白试验残余物中某目标成分的含量（） 某培养时间点残余物的重量（g）× 某培养时间点残余物中某目标成分的含量（）6.3 目标成分实时降解率的计算采用如下公式计算样品各目标成分某培养时间点的实时降解率：6.4 降解参数的计算饲料中某成分在瘤胃中的实时降解率符合指数曲线：P = a + b（1e-ct）式中：P 为t时刻被测样品某目标成分的实时瘤胃降解率，%；a 为被测样品某目标成分的快速降解部分，%；b

15、 为被测样品某目标成分的慢速降解部分，%；c 为b部分的降解速率，%/h；t 为饲料在瘤胃内停留的时间，h。利用各培养时间点实时降解率的数据（P和t），采用最小二乘法，或统计软件中的非线性回归程序，或饲料瘤胃降解参数计算软件，计算式中a、b和c值。6.5 有效降解率的计算利用6.4的计算结果（a、b、c值）采用下式计算待测饲料目标成分的有效降解率：P = a + bc /（c+k） 式中：P 为待测样品某目标成分的有效降解率，%；a 为待测样品某目标成分的快速降解部分，%b 为待测样品某目标成分的慢速降解部分，%；c 为b部分的降解速率，%/h；k 为待测样品某目标成分的瘤胃外流速率，%/h。

16、式中的k值可按本规程的附录反刍动物饲料瘤胃外流速率的测定中所规定的方法测定得到。由于k值的测定比较复杂，因此在无测定条件时可根据被测饲料的性质和相关文献资料设定k值。但设定的k值必须符合实际情况，有理有据。7 结果表示试验结果应包括各目标成分在各培养时间点的实时降解率、降解常数a、b、c值、食糜外流速度k值和有效降解率。试验结果的表示应精确到小数点后两位有效数字。在试验报告中应对试验动物的种类、品种、数量等情况加以说明。对k值的获取方法加以说明。附录 反刍动物饲料瘤胃外流速率的测定铬标记法1 原理利用铬在动物消化道内基本不被消化的特性，将待测饲料样品与重铬酸钾按一定比例均匀混合，并使二者良好结

17、合，借此将待测饲料样品用铬标记。将用铬标记的饲料样品定量饲喂给试验动物，在规定的不同时间点收集试验动物排出的粪便，并测定粪便中铬的含量，得到待测饲料样品的排出量与时间之间的关系曲线。采用适当的数学模型，计算出待测饲料样品在瘤胃内的实际停留时间或瘤胃外流速率。2 试验动物与饲养管理除瘤胃瘘管为非必须外，其他要求与饲料瘤胃降解率测定技术规程4.1和4.2中的要求基本相同。在条件允许时，建议使用测定饲料瘤胃降解率的试验动物测定瘤胃的外流速率。3 铬标记饲料的制备3.1 铬标记饲料中铬用量占待测饲料干物质的4%14%。3.2 称取相当于以上铬用量的重铬酸钾，溶于温水中。3.3 将溶解后的重铬酸钾溶液倒入装有待测饲料的搪瓷盘内，搅拌均匀至稠粥状，加盖，置于恒温干燥箱内，100加热24 h。3.4 将烘干的铬标记饲料放入底部装有细筛网（孔径236 m）的桶中，用自来水冲洗至水澄清。3.5 将冲洗后的铬标记饲料放入塑料盆中，加入适量蒸馏水，将饲料悬浮于水中。加入适量抗坏血酸，搅拌均匀，使pH下降至4.0，静置12 h。3.6 用水将铬标记饲料冲洗至水清亮，恒温干燥箱内65 烘干。3.7 铬标记饲料的稳定性以24 h的瘤胃干物质消失率低于10 %为标准。4 测定步骤4.1 将铬标记饲料于晨饲时与精料混合一起喂给试验动物。牛的喂量为300 g/头；