《DNA重组技术》ppt课件

1、定向基因改造想象定向基因改造想象 基因工程的别名基因工程的别名操作环境操作环境操作对象操作对象操作程度操作程度根本过程根本过程结果结果 基因工程基因工程需求哪些根需求哪些根本工具本工具? ?分子手术刀分子手术刀限制性内切酶限制性内切酶第第1节节DNA重组技术的根本工具重组技术的根本工具一、限制性核酸内切酶一、限制性核酸内切酶思索思索 在自然界中有一些生物的在自然界中有一些生物的DNADNA能够进入另一种能够进入另一种生物的细胞中。我们有没有学过相关的实例？生物的细胞中。我们有没有学过相关的实例？ 细菌为什么不会因外源细菌为什么不会因外源DNADNA的入侵而灭绝？的入侵而灭绝？黏性末端黏性末端平

2、末端平末端内切酶切割内切酶切割DNADNA后构成的末端后构成的末端黏性末端、平黏性末端、平末端是如何构成的？末端是如何构成的？ 限制酶存在于原核细胞中的作用是限制酶存在于原核细胞中的作用是什么？为什么限制酶不剪切细菌本身的什么？为什么限制酶不剪切细菌本身的DNA？二、衔接酶二、衔接酶“分子缝合针分子缝合针.作用：衔接磷酸二酯键作用：衔接磷酸二酯键 限制酶切割后产生两种不同的末端。限制酶切割后产生两种不同的末端。那么恢复它们的衔接时，所用那么恢复它们的衔接时，所用DNA衔接衔接酶能否可以不加选择？酶能否可以不加选择？E.coliDNAE.coliDNA衔接酶：衔接黏性末端衔接酶：衔接黏性末端T4

3、DNAT4DNA衔接酶：衔接黏性末端和平末端衔接酶：衔接黏性末端和平末端.DNA.DNA衔接酶的种类衔接酶的种类DNA聚合酶和聚合酶和DNA衔接酶有何衔接酶有何一样点和不同点？一样点和不同点？DNADNA衔接酶衔接酶DNADNA聚合酶聚合酶衔接衔接DNADNA链链衔接部位衔接部位一样点一样点双链双链单链单链在两在两DNADNA片段之间形片段之间形成磷酸二酯键成磷酸二酯键将单个核苷酸加将单个核苷酸加到已存在的核酸到已存在的核酸片段的片段的3 3末端的末端的羟基上，构成磷羟基上，构成磷酸二酯键酸二酯键都能构成磷酸二酯键都能构成磷酸二酯键二者都由蛋白质构成二者都由蛋白质构成假设目的基因导入受体细胞后

4、不能复制假设目的基因导入受体细胞后不能复制将怎样？将怎样？作为载体没有切割位点将怎样？作为载体没有切割位点将怎样？目的基因能否进入受体细胞，他如何觉目的基因能否进入受体细胞，他如何觉察？察？假设载体对受体细胞有害将怎样？假设载体对受体细胞有害将怎样？三、基因进入受体细胞的载体三、基因进入受体细胞的载体 “分子运输车分子运输车1. 载体的必要条件载体的必要条件 能自我复制，或能进入受体生物细胞并能自我复制，或能进入受体生物细胞并在受体生物细胞内复制并表达；在受体生物细胞内复制并表达； 有切割位点有切割位点 有遗传标志基因有遗传标志基因 对受体细胞无害、容易分别对受体细胞无害、容易分别 比较容易得

5、到比较容易得到能复制并带着插能复制并带着插入的目的基因一入的目的基因一同复制同复制有切割位点有切割位点有标志基因的存有标志基因的存在，可用含青霉在，可用含青霉素的培育基鉴别。素的培育基鉴别。常用的分子运输车常用的分子运输车有哪些？有哪些？小结基因工程基因工程的工具的工具限制酶限制酶主要存在于原核生物中主要存在于原核生物中具有专注性具有专注性(识别序列识别序列)切开切开DNA分子的磷酸二酯键分子的磷酸二酯键DNA连连接酶接酶衔接磷酸二酯键衔接磷酸二酯键种类种类E.coliDNA衔接酶衔接酶T4 DNA衔接酶衔接酶运载运载工具工具具备的具备的条件条件构造简单构造简单,大小适中大小适中能在宿主细胞中自能在宿主细胞中自我复制并稳定存在我复制并稳定存在具一个多个限制酶切位点具一个多个限制酶切位点具标志基因具标志基因质粒、质粒、噬菌体衍生物、动植物病毒噬菌体衍生物、动植物病毒1.在基因工程中，切割运载体和含有目的在基因工程中，切割运载体和含有目的基因的基因的DNA片段，需运用片段，需运用 同种限制酶同种限制酶 B. 两种限制酶两种限制酶同种衔接酶同种衔接酶 D. 两种衔接酶两种衔接酶 大肠杆菌的一种限制酶大肠杆菌的一种限制酶EcoR)EcoR)能识别能识别GAATTCGAATTC序列，序列，并在并在G G和和A A之间切开构成黏性末之间切开构成黏性