竹子花叶病毒分子鉴定

1、LOGO竹子花叶病毒分子鉴定实验小组：绿竹之花竹子花叶病毒竹子花叶病毒v竹花叶病毒竹花叶病毒(Bamboo mosaic virus, BaMV)是目前为止被发现感染竹类惟一的病毒是目前为止被发现感染竹类惟一的病毒。可危害。可危害4个属、个属、14个种、个种、3个变种和个变种和3个栽培种。个栽培种。v感染此病毒的植株生长受到显著影响，病害特征感染此病毒的植株生长受到显著影响，病害特征为叶片呈黄绿相间的条纹型嵌纹，尤以心叶最为为叶片呈黄绿相间的条纹型嵌纹，尤以心叶最为明显。竹笋和竹杆内部呈褐色条纹病变，造成竹明显。竹笋和竹杆内部呈褐色条纹病变，造成竹笋木质化，发笋率降低，可影响竹笋产量达笋木质化

2、，发笋率降低，可影响竹笋产量达50%以上。竹杆节间变短，竹笋和竹材的产量和品质以上。竹杆节间变短，竹笋和竹材的产量和品质都显著下降，影响竹材的应用。都显著下降，影响竹材的应用。感染竹子花叶病毒症状感染竹子花叶病毒症状感染竹子花叶病毒症状感染竹子花叶病毒症状竹子花叶病毒的危害竹子花叶病毒的危害v 叶片枯萎，影响观赏价值（观赏叶片枯萎，影响观赏价值（观赏竹）竹）v 植株整体萎蔫，影响发笋量（食植株整体萎蔫，影响发笋量（食用性竹）用性竹）v 植株矮小，商品价值降低（材料植株矮小，商品价值降低（材料用竹）用竹）v 植株大面积感染死亡，水土保护植株大面积感染死亡，水土保护能力下降（生态保护用竹）能力下降

3、（生态保护用竹）实验方案实验方案2014年年10月月2014年年9月月2014年年7月月-2014年年8月月2014年年5月月-2014年年6月月电镜观察电镜观察 2014年年5月月-2014年年6月月 v收集相关文献资料收集相关文献资料v采样采样v利用负染法进行电镜观察利用负染法进行电镜观察RT-PCR实验测序实验测序 2014年年7月月-2014年年8月月 v采用采用Trizol试剂及其他试剂盒提取竹子样品的总试剂及其他试剂盒提取竹子样品的总RNA。v根据已报道的竹子嵌纹病毒根据已报道的竹子嵌纹病毒BaMV基因序列设计基因序列设计引物引物 ，进行，进行RT-PCR实验。实验。v将总将总RN

4、A送到华大基因有限公司进行送到华大基因有限公司进行Solexa deep-sequencing深度测序。深度测序。构建病毒文库构建病毒文库 2014年年9月月 v收集我国竹子病毒及竹子的核酸序列，建立病毒收集我国竹子病毒及竹子的核酸序列，建立病毒种群数据库。种群数据库。v将小将小RNA文库在构建的植物基因组数据中比对，文库在构建的植物基因组数据中比对，最终排除植物来源的小最终排除植物来源的小RNA。剩余的小。剩余的小RNA构建构建成病毒文库，运用拼接软件成病毒文库，运用拼接软件Velvet对小对小RNA进行进行组装，将拼接的组装，将拼接的contigs与已建立的检疫性病毒与已建立的检疫性病毒基

5、因组数据库进行比对，研究是否存在竹子病毒基因组数据库进行比对，研究是否存在竹子病毒并进行同源性分析。并进行同源性分析。构建病毒文库构建病毒文库 2014年年10月月 v运用常规运用常规PCR方法从测序样品的总方法从测序样品的总RNA中克隆病中克隆病毒序列进行验证。毒序列进行验证。v整理数据，准备答辩。整理数据，准备答辩。本实验研究的意义以及展望本实验研究的意义以及展望v将将BSL6发展成生物防治分子发展成生物防治分子 目前研究发现，目前研究发现，BSL6能够干扰能够干扰BaMV的复制并减轻的复制并减轻其在竹叶中所引起的病症其在竹叶中所引起的病症 v竹子花叶病毒卫星竹子花叶病毒卫星RNA可发展为有效的植物载体可发展为有效的植物载体 目前竹子花叶病毒卫星目前竹子花叶病毒卫星RNA已成为世界上唯一具有表已成为世界上唯一具有表达外源蛋白能力的卫星达外源蛋白能力的卫星RNA载体。可发展为有效的