蛋白质变性与沉淀

1、 实验项目实验项目 蛋白质变性与沉淀蛋白质变性与沉淀一、实验目的一、实验目的 1.1.掌握蛋白质变性与沉淀掌握蛋白质变性与沉淀的原理及各种沉淀方法；的原理及各种沉淀方法； 2.2.熟悉刻度吸量管的正确熟悉刻度吸量管的正确使用；使用； 3.3.了解蛋白质变性与沉淀了解蛋白质变性与沉淀两者的关系。两者的关系。二、实验原理二、实验原理 （一）（一） 蛋白质沉淀原理蛋白质沉淀原理 蛋白质蛋白质溶于水形成溶于水形成稳定稳定的胶体溶的胶体溶液，维持液，维持蛋白质蛋白质胶体溶液稳定因素：胶体溶液稳定因素： 1.1.蛋白质蛋白质颗粒表面的颗粒表面的水化膜；水化膜； 2.2.蛋白质蛋白质颗粒表面的颗粒表面的电荷

2、。电荷。 去除上述稳定因素可使蛋白质沉去除上述稳定因素可使蛋白质沉淀析出淀析出。 蛋白质沉淀析出常用的方法有蛋白质沉淀析出常用的方法有等电点法、盐析法、重金属离子沉等电点法、盐析法、重金属离子沉淀法、有机酸试剂沉淀法、有机溶淀法、有机酸试剂沉淀法、有机溶剂沉淀法等。剂沉淀法等。（二）蛋白质变性原理（二）蛋白质变性原理 蛋白质受某些物理或化学因蛋白质受某些物理或化学因素的影响，空间结构发生改变，素的影响，空间结构发生改变，生物活性丧失。称为蛋白质变性。生物活性丧失。称为蛋白质变性。蛋白质变性，分可逆；不可逆。蛋白质变性，分可逆；不可逆。三、实验仪器与试剂三、实验仪器与试剂 1.仪器试管、刻度吸量

3、管、洗耳球等。 2.试剂 5蛋白质蛋白质溶液、溶液、 2.5蛋白质蛋白质溶液、溶液、10ZnSO4溶液、溶液、 o.1mol/LNaOH、 1三氯醋酸、无水乙醇、NaCl（固体）四、实验内容及四、实验内容及操作步骤操作步骤1.1.重金属盐及有机酸类沉淀蛋白质重金属盐及有机酸类沉淀蛋白质2.2.乙醇沉淀蛋白质乙醇沉淀蛋白质（一）实验内容（一）实验内容（二）（二）操作步骤操作步骤1.1.重金属盐及有机酸类沉淀蛋白质重金属盐及有机酸类沉淀蛋白质1 1）实验原理）实验原理COO-NH3+POH-H+重金属离子M+酸根X-COO-NH2PCOOHNH3+PCOO-M+NH2PCOOHNH3+X-PpH

4、pIpH pI pI，蛋白，蛋白质分子带负电荷，与质分子带负电荷，与ZnZn2+2+结合生成不溶于结合生成不溶于水的盐沉淀。水的盐沉淀。 试管试管2 2中加入酸，其中加入酸，其pH pIpH pI，蛋白，蛋白质分子带正电荷，与三氯醋酸根质分子带正电荷，与三氯醋酸根结合生结合生成不溶于水的盐沉淀。成不溶于水的盐沉淀。 试管试管3 3中只加有蛋白液和中只加有蛋白液和ZnSOZnSO4 4 蛋白质分子因带较少的正、负电荷，与蛋白质分子因带较少的正、负电荷，与ZnZn2+2+不反应。不反应。2. 2. 乙醇沉淀蛋白质乙醇沉淀蛋白质 1 1）实验原理）实验原理 乙醇溶解于水，破坏蛋白乙醇溶解于水，破坏蛋

5、白质分子的水化膜，加入少量中质分子的水化膜，加入少量中性盐抑制蛋白质的解离，使电性盐抑制蛋白质的解离，使电荷减少，沉淀更完全。荷减少，沉淀更完全。2）操作步骤操作步骤试剂（试剂（mL）试管试管1 1试管试管2 22.5%蛋白质蛋白质溶液溶液0.5 mL0.5 mL结晶结晶NaCl数粒（适量）数粒（适量）无水无水乙醇乙醇1mL1mL现象现象3）观察、记录实验现象，并解释之。观察、记录实验现象，并解释之。结果记录结果记录试剂试剂试管试管1试管试管22.5%蛋白质蛋白质溶液溶液0.5 mL0.5 mL结晶结晶NaCl数粒（适数粒（适量）量）无水乙醇无水乙醇1mL1mL现象现象 沉淀沉淀沉淀充分沉淀充

6、分实验现象分析实验现象分析 试管试管1 1中加入无水乙醇，破坏蛋白中加入无水乙醇，破坏蛋白质分子表面的水化膜，使蛋白质沉淀。质分子表面的水化膜，使蛋白质沉淀。 试管试管2 2中加入无水乙醇和少量的氯中加入无水乙醇和少量的氯化钠，不但破坏蛋白质分子表面的水化钠，不但破坏蛋白质分子表面的水化膜，同时蛋白质分子表面的电荷减化膜，同时蛋白质分子表面的电荷减少，沉淀更充分。少，沉淀更充分。 五、注意事项五、注意事项 1.1.试剂瓶滴管不能交叉使用，否则试剂瓶滴管不能交叉使用，否则污染试剂。污染试剂。 2.2.刻度吸量管不能交叉使用，否则刻度吸量管不能交叉使用，否则污染试剂，影响反应现象。污染试剂，影响反

7、应现象。 3. 3. 做完实验把把试剂按原样摆放，做完实验把把试剂按原样摆放，试管和试管和刻度吸量管冲刻度吸量管冲洗干净，桌面擦干洗干净，桌面擦干净，登记签名。净，登记签名。 4.4.值日生听老师安排，认真打扫，值日生听老师安排，认真打扫，经老师批准才能离开实验室。经老师批准才能离开实验室。 六、思考题六、思考题 1.1.临床抢救重金属中毒患者，临床抢救重金属中毒患者，为什么用鸡蛋清或牛奶？为什么用鸡蛋清或牛奶？ 2.2.蛋白液中加入适量乙醇，为蛋白液中加入适量乙醇，为什么会产生沉淀？什么会产生沉淀？ 3.3.蛋白液在碱性条件下加入蛋白液在碱性条件下加入ZnSO4 ，为什么会产生沉淀？，为什么会产生沉淀？ 4.4.蛋白液中加入三氯醋酸蛋白液中加入三氯醋酸 ，为，为什么会产生沉淀？什么会产生沉淀？ 下次实验：下次实验： P74页页 激活剂及抑制剂对酶活性的影响激活剂及抑制剂对酶活性的影响实验报告明天交，请组长负起责实验报告明天交，请组