冻干粉针剂过滤系统工艺实验的设计

1、冻干粉针剂过滤系统工艺实验的设计 目  录摘 要 4前 言 5文献综述 6一、 冻干粉针工艺概述 7 二、 过滤除菌方式及发展趋势 9三、化学消毒方法灭菌及个种方式的特点 12四、热力灭菌简介 17实验部分 201仪器与试剂 201.1实验仪器 20 1.2实验试剂 202试验方法 202.1原理 202.1.1气泡点检测简介 202.12 CFU简介 212.2实验过程 21、2.2.1 过滤系统灭菌 212.2.2. 无菌甘露醇溶液的制备 212.2.3 完整性测试 212.2.4 微生物截留试验 213实验结果 214讨论 225 结论 22 参考文献： 24 摘 要

2、灭菌是指杀灭或去除环境中的一切微生物，包括病原和非病原微生物及细菌的芽孢使之完全无菌，消毒是指杀灭或去除环境中的病原微生物的过程，使之无害化，不致引起感染或致病【1】从上诉定义可知，消毒和灭菌都需外环境中的微生物，只是杀灭和去除微生物的目标和程度不同，即消毒处理不一定能达到灭菌要求，灭菌能达到消毒目的。此论文结合了一些国内的文献和个人几年来的生产实践经验。结合近几年文献在文献综述部分对对如何控制好冻干粉针剂的灭菌工艺，控制冻干粉针无菌的关键工序和关键点，进行了一些论证。在无菌环境下将药液冷冻，将原料药“掺”在某些辅料或溶在某些溶媒中，经过一定的加工处理制成不同形式的制剂，就是我们所说的“冻干粉

3、针剂”。冻干粉针剂工艺中的灭菌生产的关键，如何控制好生产中的灭菌工艺和消毒工艺，往往成为药品合格与否的关键。此论文本实验部分主要探讨非最终灭菌注射剂生产过程中除菌过滤器对微生物的截留效果, 及气泡点完整性实验。确认过滤除菌过滤系统的完整性及过滤系统在微生物截留的有效性与安全性。实验方法: 采用孔径为0. 22 m 除菌级聚醚砜滤芯, 以直径在0. 30.4m 的缺陷假单胞菌为生物指示剂, 将菌液用滤芯过滤, 计算被过滤液体过滤前的微生物数量与过滤后的微生物数量比的常用对数值(LRV) 。结果: 菌液过滤前后微生物数量比的常用对数值LRV大于7。结论: 滤芯每平方厘米有效过滤面积符合中国药典20

4、10年版2 部附录灭菌法的规定, 确认除菌过滤工艺在注射剂生产过程中的有效性与安全性。关键词：灭菌 消毒 冻干粉针剂 过滤除菌 消毒剂杀灭微生物 LRV前 言我国卫生部于1995年7月11日下达卫药发（1995）第35号"关于开展药品GMP认证工作的通知"。药品认证是国家依法对药品生产企业（车间）和药品品种实施GMP监督检查并取得认可的一种制度，是国际药品贸易和药品监督管理的重要内容，也是确保药品质量稳定性、安全性和有效性的一种科学的先进的管理手段。 我国在真空冷冻干燥技术已有几十年的历史，但是对于无菌冻干生产联动线只有十几年的时间，在20世纪八十年代前，对于无菌冻干生产联

5、动线依赖于进口。在20世纪70年代我国的冻干制药设备才处于萌芽状态，当时的设备处于半工半机械之中，在80年代时期，改进为单机自动化生产设备，90年代我国生产线改进为洗瓶机，隧道烘箱，灌装，单机连线的简单半自动联动生产线。在99年的SFDA发布药品GMP认证标准出台刺激了我国的制药机械的突飞猛进，随着国外先进制药设备引进，冻干生产线联动生产线才得到完善。为了满足更好的提高药品的质量，的满足生产需求，以下将对冻干粉针的无菌工艺进行介绍，冻干粉针的由于是最终灭菌，无菌要求特别严格。而灭菌消毒更需要认真，本人结合文献，与个人经验。对灭菌除菌和消毒进行了总结和研究。这些对生产有一些借鉴作用在实验部分，为

6、了证明过滤系统的完整性和安全性，对过滤滤系统气泡点及微生物截留进行实验，主要是为了保证冻干粉针无菌生产的质量安全。文 献 综 述冻干粉针剂是非最终灭菌产品，非最终灭菌产品洁净度的要求相对要高。过滤设备的升级，过滤产品材质的升级，操做自动化提高，检测设备的完善，都有力的保证了冻干粉针生产无菌的要求。以除菌过滤产品为例，针对不同的药液，使用不同材质的滤膜，同时过滤器完整性检测仪的应用，又能够检测滤膜的完整性及过滤系统的密闭性，他们都为半成品的无菌做了可靠保障。车间灭菌方法为例，除常规灭菌方法外，臭氧和环氧乙烷灭菌的应用，杀灭了死角的细菌，给无菌生产提供了保障，在常规加热灭菌中，分为湿热灭菌和干热灭

7、菌，其中湿热灭菌的穿透力比较强，而干热灭菌可除去内毒素。 冻干工艺在药物生产安全性方面就存在很多风险.物料,人员,设备,环境是直接影响着成品的质量.所谓物料就是指用于包装的原料、辅料和包装材料。药品的生产是与各种物料开始的，即使药品生产过程控制的十分完美，但是所用的物料达不到规定标准，那么药品的生产过程就没有意义了。因此药品生产要从物料开始。人员主要的污染源，所以要对人员进行GMP卫生培训，设备：无论药品生产企业的规模大小，还是生产何种类型的药品或品种数量都离不开组织生产必不可少的要素设备。设备是药品生产中物料投入到转化成品的工具和载体，所以药品质量的优略与设备与设备这个生产的主要息息相关，在

8、生产中，设备的 设计、选型、安装应符合生产要求,易于清洗、消毒或灭菌,便于生产操作和维修防止差错和减少污染.干燥灭菌设备、配制的微生物截留滤灌装加塞设备、加塞后与冻干之间的转运、胶塞转运等存在很大影响产品质量的风险，对生产的安全性形成很大的挑战。主要表现在：干燥灭菌机的热分布、热穿透性能试验不能满足要求，还有些生产使用厂家由于没有配备必要检测设备，在生产前根本没有对其性能进行验证就投入运行，另外对干燥灭菌机的生产速度与工艺要求的匹配性非常陌生，根本无法满足抗生素瓶的无菌要求；灌装加塞设备国内很多厂家采用的是敞开式层流系统，操作人员可以随意进入到百级层流下，灌装药液管路及灌装泵不能实现；胶塞转运

9、、半加塞后转运至冻干机均采用人工进行，对整个分装冷冻干燥过程的无菌要求形成巨大挑战；轧盖机在非百级层流下工作也对胶塞要求在无菌环境下进行轧盖封口形成挑战。环境：主要包括外部环境和内部环境，外部环境包括厂址的选择，选择的一个原则就是防止污染，就是从厂房设计与布局总体去考虑，如何预防、减少与消除生产环境有可能对药品生产所产生的污染。【2】   对于以上问题，本文在结合大量文献的基础上，总结出了一些设计方案，并提出了一些用于合理化的设计方案，以改进冻干粉针的灭菌工艺的，达到成品无菌一 冻干粉针工艺概述1冻干粉针简介冻干粉针是药物的一种制剂形式，是将药用成分（原

10、料）及辅助成分（辅料），用溶媒（例如水）溶解后，配制成一定浓度的溶液，分装于安瓿或西林瓶等容器中，在无菌密闭环境中，低温下冻结，再通过降低环境气压，缓慢升高制品温度的方法使制品中的溶媒（例如水）升华，留下固体形态的疏松块状或粉末状药物而成的制剂。在使用时，需要加入溶媒（如水），将药物溶解成溶液再用于注射或输液治疗疾病。2冻干粉针工艺流程 3冻干粉针工艺无菌关键流程 图一为冻干工艺生产过程，原料药配制后的，初滤和精滤是除菌过程；胶塞清洗后是灭菌工序，西林瓶的洗烘联动也能除内毒素和细菌，灌装和半压塞工序在百级下操作，操作的无菌要求也极其高， 配制工序过程称量配制过程在十万级环境下进行，易染菌，主要

11、控制点是染菌的程度和配制的时间，室温温度，湿度等。物测试。 配制时间在工艺设计时也应考虑，如果生产时间过长，洁净间温度，湿度适宜细菌的繁殖过快，细菌量达到了过滤系统的承受量，半成品的染菌程度 加大，将严重影响成品的质量初滤和精滤工序对环境的要求相对严格，对滤膜的材质，完整性都有着严格的要求胶塞是在万级下灭菌，百级分装，不太容易染菌，主要注意点是，灭菌后放置时间不易过长。加入加塞器时注意不要染菌。洗瓶工序由于都是洗烘联动，细菌的清除率极高。染菌的可能性不大。分装工序，由于冻干粉针为非最终灭菌产品，所以这道工序是冻干粉针是否合格的关键。所以此道工序减少人为污染，保持环境无菌状态，由为重要。分装主要

12、培养操作人员的无菌意识，如果能够实现机械的自动化程度，应该是最终解决办法。环境这一块，随时监控好生产车间的温度，湿度，空气漂浮物数量等等。生产后彻底清场。注意消毒液的更换，等等。4国内冻干粉针生产工艺的进展 冻干粉针无菌工艺，近几年，主要向着机械自动化，和消毒设备无害化方向进展，检测设备的简易化都有较大提高。冻干机结构紧凑占地面积小、生产效率高、节能和自动化程度高等特点，但普遍没有解决灭菌问题，成为生产上的遗憾。 完整性检测方面，现在的仪器能够进行气泡点、扩散流、水侵入和压力衰减测试，运用这些工业上可接受的物理测试，检测滤材及滤器的过滤精度及完整性，这些方法满足我国药典及GMP规范中对除菌过滤

13、器进行验证的要求，既可以离线测试又可以在线测试，既可以判断滤材精度是否合格又可以检查滤壳以及密封件是否完好，测试时不影响下游的无菌状态过滤的完整性检测，检测，对过滤系统的完整性及药物无菌的安全性。有了可靠保障消毒设备中，臭氧的应用，也减小了消毒剂残留所带来的危害。对洁净间整体环境的提升，起到了有利作用。大型臭氧发生器谷称公斤级臭氧发生器，主要由空气压缩及净化系统、冷却系统、臭氧发生系统、电源控制系统、臭氧化气体处理系统五大部件组成。采用当今最新型功率电子模块组成的变频电源电路、脉冲宽度调控控制等系列新技术、新工艺，产品操作简便，结构紧凑，性能稳定，臭氧量高，易于维护。二 除菌过滤方式及发展趋势

14、1除菌过滤系统简介过滤是一种通用的灭菌方法，除菌行过滤器应该得到验证，从而可在线的去除流体中的活性微生物，生成无菌滤出液【3】过滤除菌用物理阻留法去除悬浮于介质中的微生物，称为过滤除菌。过滤须通过致密的滤材，仅适于液体与气体等流动物质的处理。【4】冻干粉针工艺中的过滤系统粗滤系统和精滤系统组成，其中包括微孔滤膜,平板滤器、硅胶管、蠕动泵等组成。冻干粉针剂生产以微孔滤膜,滤膜以混合纤维素，聚酰胺类，聚醚砜( PES) 微孔滤膜等最为常用，平板滤器的材质为316L。生产前整个过滤系统需灭菌，生产前后滤膜都需做气泡点实验。 2.微孔滤膜简介: ：微孔滤膜由精制硝化棉，加入适量醋酸纤维素、丙酮、正丁醇

15、、乙醇、等制成，亲水，具有无毒卫生，是一种多孔性的薄膜过滤材料，孔径分布比较均匀穿透性的微孔，微孔率高达80的绝对孔径。主要用于水系溶液的过滤，故也称水系膜。 易燃，保存时应注意密封，防潮湿，防火。【5】 特点：孔径比较均，孔隙率高，无介质脱落，质地薄，阻力小，吸附极小。 微孔滤膜，有亲水性和疏水性之分，在现在的众多微孔滤膜中PVDF材料的是应用最广的，效果最好的3各种微孔滤膜的种类及特点（1）混合纤维素( CN- CA)CN - CA 是一种较标准的常用微孔滤膜,开发最早,应用也比较成熟. 由于成孔性能良好,亲水性强,因此该种滤膜的系列孔径规格分级最多,从0.05m 到8m， 【6】国内制膜

16、企业普遍生产的的一种滤膜，冻干过滤工序常用此膜，质量良莠不齐。药厂使用性价比较高（2） 聚酰胺类如尼龙6 ( PA - 6) 和尼龙66 ( PA - 66) 微孔滤膜,这类膜亲水性好,较耐碱而不耐酸. 在酮、酚、醚及高分子量醇类中,不易被浸蚀. 孔径型号也较多.质地坚固，个别品种注意溶出度。价格适中。 （3） 聚醚砜( PES) 微孔滤膜PES特性 耐热性优越，热变形温度200，高温下强度大。 耐水性优越，耐酸、碱。 难燃性，燃烧时发烟少。 透明、无毒。【7】该类膜具有良好的化学稳定性和热稳定性,耐辐射,滤速快,应用面也较广.膜产品已得到认可和应用.是比较理想的滤膜。只是此膜大多依靠进口，或

17、国外提供原料国内加工，价格较贵。适用于贵重药液过滤和大批量药液过滤除此之外聚氟乙烯类，聚碳酸酯和聚酯类如聚偏氟乙烯膜( PVDF) 和聚四氟乙烯膜(PTFE) . 这两类微孔滤膜,都有极好的化学稳定性,适合在高温下使用. 特别是PTFE 膜,其使用温度- 40 260 ,一部分是采用聚氟类微孔滤膜.还有聚碳酸酯和聚酯类聚 ，烯烃类，无机基材类微孔滤膜等。药厂有时也有应用。4气泡点检测简介气泡点检测原理：截留效率是微孔膜最重要的性能指标，它受控于膜的最大孔径和膜的孔径分布。用来测量膜最大孔径的最普通最经典的方法是泡点压力法，其原理是基于假定微孔膜是由很多圆形毛细管状的孔道组成。测泡点压力时，是先

18、将微孔膜完全湿润 (亲水性的膜一般用纯水湿润，疏水性的膜可用甲醇、异丙醇等溶剂湿润)，然后在装置中对膜一侧施加气体压力，在膜另一侧看气泡的最低压力值时称这个压力点为泡点，膜孔径与泡点压力之间的关系是【8】P=4cos/D其中：P压差 表面压力 浸润液与滤材的接触角 D孔径（厘米） 气泡点检测是证明过滤系统是针对滤膜完整性的一种重要手段，三 化学消毒剂在冻干粉针工艺上的应用1化学消毒剂简介：定义：化学消毒灭菌法是利用化学物质抑制和杀死微生物。可用浸泡、喷雾和熏蒸等方法 理想的化学消毒剂特质 （1）杀菌谱广； （2）使用有效浓度低； （3）杀菌作用速度快； （4）性能稳定； （5）易溶于水； （6

19、）可在低温下使用； （7）不易受各种物理化学因素影响； （8）对物品无腐蚀性； （9）无臭无味，无色； （10）毒性低，消毒后无残留毒害； （11）使用安全，不易燃烧； （12）价格低廉； （13）运输方便； （14）可大量生产供应。【9】化学消毒剂的使用原则：（1）有针对性地根据所要杀灭微生物的特点，选用合适的消毒剂。（2）严格掌握消毒剂的浓度、消毒时间及消毒方法，否则达不到消毒灭菌的作用。（3）被消毒的物品，在消毒前必须清洗干净。（4）浸泡消毒时，物品必须全部浸泡在溶液内，轴节应打开。（5）对易挥发的消毒溶液，必须将盖盖严，定期测量比重，以保证浓度。（6）浸泡的器械在使用前应用灭菌蒸馏水或

20、生理盐水将消毒液冲洗干净，以免刺激人体组织。【10】目前的化学消毒剂中，没有一种能够完全符合上述要求的！因此在使用中，只能根据被消毒物的特点使用 2 GMP对药厂使用化学消毒剂的规定（1）应按照操作规程对洁净区进行必要的清洁和消毒。所采用消毒剂的种类应多于一种。为及时发现是否出现耐受菌株及其蔓延情况，应定期进行环境监测。紫外线杀菌效力有限，不能用以替代化学消毒剂。(2) 应监测消毒剂和清洁剂的微生物污染状况，配制后的消毒剂和清洁剂应存放在事先清洁过的容器内，存放期不得超过规定时限。A/B级区应使用经除菌过滤的消毒剂和清洁剂。(3) 必要时可采用熏蒸的方法以降低洁净区内卫生死角的微生物污染，应对

21、熏蒸剂的残留水平予以验证。【11】3消毒药物的选择： （1）.消毒药对微生物有一定选择性，针对所要杀灭的微生物的特点，选择合适的消毒剂是消毒工作成败的关键。如果要杀灭细菌芽孢，则必须选择高效的化学消毒剂才能取得可靠的消毒效果。季铵盐类是阳离子表面活性剂，因杀菌作用的阳离子具有亲脂性，而革兰阳性菌的细胞壁含类脂多于革兰阴性菌，故革兰阳性菌更易被季铵盐类消毒剂灭活。 （2）消毒剂的配合： 消毒剂的正确配合运用也是有效使用消毒剂的关键。洗必泰和季铵盐类消毒剂用70%酒精配制比用水配制穿透力强，杀菌效果更好。酚在水中的溶解度低，制成甲酚的肥皂溶液，可杀灭大多数细菌繁殖体，对结核杆菌亦能在15分钟内杀灭

22、。 （3）消毒剂的浓度： 一般来说，消毒剂的浓度和消毒效果成正比，即消毒剂越浓，其消毒效力越强。如石炭酸的浓度降低1/3，其效力降低1/7291/81，但也不能一概而论，如70%酒精比其他浓度酒精消毒效力都强。但浓度越大，对机体或器具的损伤或破坏作用也越大。因此，在配制消毒剂时，要按消毒对象的重量或体积计算选择其最有效而又安全的浓度，不可随意加大或减少药物浓度。 （4）.环境温度、湿度和酸碱度： 一般来说，消毒剂随温度升高其杀菌能力增强。温度每升高10，石炭酸的消毒作用可增加58倍，金属盐类增加25倍。【12】 4常用的化学消毒剂（1）酒精消毒剂: 简介：70%-75%的酒精用于灭菌消毒，药厂

23、应为75%的酒精。用于包括皮肤消毒、设备消毒等。 有人以为，酒精浓度越高，消毒效果越好，这是错误的。酒精消毒的作用是凝固细菌体内的蛋白质，从而杀死细菌。但95%的酒精能将细菌表面包膜的蛋白质迅速凝固，并形成一层保护膜，阻止酒精进入细菌体内，因而不能将细菌彻底杀死。如果酒精浓度低于70%，虽可进入细菌体内，但不能将其体内的蛋白质凝固，同样也不能将细菌彻底杀死。只有70%-75%的酒精即能顺利地进入到细菌体内，又能有效地将细菌体内的蛋白质凝固，因而可彻底杀死细菌。乙醇属中效消毒剂，目前医药生产单位使用很普遍。 【13】主要优缺点： 优点：具有中效、速效的杀菌作用； 无毒、无刺激，对金属无腐蚀性；

24、缺点：受有机物影响大； 易挥发，不稳定。 杀菌作用：乙醇为中效消毒剂，能杀灭细菌繁殖体、结核杆菌及大多数真菌和病毒， 但不能杀灭细菌芽胞。 适用范围：适用于皮肤、环境表面及设备表面消毒。 配制方法：取95%的酒精，按比例加入纯化水到75%，经0.45nM的滤膜过滤，放置在密闭容器内，有效期7天。 2 新洁尔灭 新洁尔灭属季铵盐类消毒剂，它是一种阳离子表面活性剂，在消毒学分类上属低效消毒剂。 （1） 杀菌原理： 该消毒剂杀菌作用机制主要有：改变细胞的渗透性，使细菌破裂；使蛋白质变性； 抑制细菌体内某些酶，使之失去活性；因其有良好的表面活性，可高浓度聚集于菌体表面，影响细胞的新陈代谢。 （2）主要

25、优缺点： 优点： 无难闻的刺激性气味； 易溶于水； 有表面活性作用； 耐光耐热； 性质较稳定，可以长期贮存。 缺点：易受有机物的影响；吸附性强。一块 10cm×10cm 的纱布浸入 1000m11/1000 的新洁尔灭溶液中，可使该溶液变成 1/2000 之的浓度。 （3）杀菌作用： 新洁尔灭对化脓性细菌、肠道菌及部分病毒有一定的杀灭能力；对结核杆菌、真菌的杀 灭效果不好；对细菌芽胞仅能起抑制作用。 本消毒剂对革兰氏阳性菌的杀灭能力一般较对革兰氏阴性菌强，抑菌浓度远低于杀菌浓度。 （4）适用范围：墙面抹擦，地漏液封，浸润双手等。（5）使用方法： 对污染物品的消毒：可用 0.1-0.5

26、%浓度的溶液喷洒，浸泡或抹擦，作用10-60 分钟。 (3) 臭氧简介：臭氧是一种广谱杀菌剂，可杀灭细菌繁殖体和芽胞、病毒、真菌等，并可破坏肉毒杆菌毒素。 臭氧对空气中的微生物有明显地杀灭作用，采用 30mg/m3 浓度的臭氧，作用 15 分钟，对自然菌的杀灭率达到 90%以上。用臭氧消毒空气，必须是在人不在的条件下，消毒后至少 过 30 分钟才能进入。可用于手术室，病房，无菌室等场所的空气消毒。 主要用于洁净间的消毒灭菌，臭氧发生器可以流动使用，对不同的罐进行消毒，每个生产单元在每次换料前，都可以及时得到消毒，使用效率很高，也很方便，不要用那么多的酒精、氮气，也不要用高压蒸汽。所以在制药厂就

27、能够得到推广。灭菌形式：臭氧能氧化分解细菌内部葡萄糖所需的酶，使细菌灭活死亡。直接与细菌、病毒作用，破坏它们的细胞器和DNA、RNA，使细菌的新陈代谢受到破坏，导致细菌死亡。透过细胞膜组织，侵入细胞内，作用于外膜的脂蛋白和内部的脂多糖，使细菌发生通透性畸变而溶解死亡。注意事项： 臭氧对人有毒，国家规定大气中允许浓度为 0.2mg/m3，故消毒必须在无人条件下进 行。 臭氧为强氧化剂，对多种物品有损坏，浓度越高对物品损坏越重，可使铜片出现绿色 锈斑、橡胶老化，变色，弹性减低，以致变脆、断裂，使织物漂白褪色等。使用时应注意。 温度和湿度可影响臭氧的杀菌效果： 臭氧作水的消毒时，0最好，温度越高，越

28、有利于臭氧的分解，故杀菌效果越差加湿有利于臭氧的杀菌作用、要求湿度>60%，湿度越大杀菌效果越好。臭氧在常温下为爆炸性气体，有特臭。臭氧在水中的溶解度较低（3%）。臭氧稳定性差，在常温下可自行分解为氧。所以臭氧不能瓶装贮备，只能现场生产，立即使用。(4)环氧乙烷简介:气体灭菌剂，在25室温下能杀灭一切病原体。它杀灭细菌芽孢的浓度与时间为： 884mg/L，24h; 442mg/L，4h;884mg/L，2h。本品对物品的损害小，不损坏金属、棉、毛、橡胶、合成纤维，但可损坏赛璐珞制品、聚乙烯、聚氯乙烯。本品的穿透力强，能穿透纸张、塑料薄膜等包装材料。【14】消毒方法：液体消毒：可于水浴中用

29、其15%溶液浸泡数小时。此法适用于某些生物制品、培养基、移植物或埋藏物的灭菌。熏蒸消毒： 可于丁基橡胶尼龙袋、聚乙烯塑料袋、密闭的消毒柜或其他容器内进行。投药量一般为440880mg/L，作用时间为1624h(>15);如于丁基橡胶袋中剂量加大至2500mg/L，则作用24h (>20) 即可。消毒后的物品应彻底通风散气。密切接触皮肤的乳胶或塑料制品，须通风18h以至数日，才可使用。热空气或超声波可加速其扩散。，【15】四 热力灭菌热力灭菌简介：制药工业所用灭菌设备的常用灭菌方法热力消毒系指利用热力作用杀灭病原微生物防止疾病传播的处理。若将微生物全部杀灭则称热力灭菌。其主要作用是通

30、过菌体酶的破坏与蛋白质的凝固使微生物死亡。干热消毒是在无水情况下加热以达消毒的处理。其主要作用是通过氧化，破坏细菌原生质使微生物死亡。湿热杀菌作用较干热为强，但所有微生物均可被此两种处理方法杀灭而达灭菌。 微生物对热的抵抗力多用热死亡时间表达，即在一定温度与条件下，全部杀死该种微生物所需的时间。不同微生物在湿热或干热处理下的热死亡时间不尽相同，其中以细菌芽胞最长，而嗜热脂肪芽胞杆菌芽胞又较一般病原菌芽胞的热死亡时间为长(见表1)。 微生物煮沸压力蒸气干 热100121132160180细菌繁殖体*病毒真菌孢子产气夹膜梭菌芽胞腐败梭菌芽胞炭疽杆菌芽胞破伤风梭菌芽胞肉毒杆菌芽胞嗜热脂肪芽胞杆菌芽胞

31、222510106030030011123351212<1<1<1<1<1<1122333466123030<1<1<1<1<1<1255【17】1 湿热灭菌法系热灭菌法的一种，即以沸水、蒸汽和蒸汽加压灭菌。常用的巴氏灭菌法就是湿热灭菌，此法又有两种方式：(1)低温长时间处理，在61.762.8摄氏度以下处理30分钟;(2)高温短时间处理，在71.6摄氏度或略高温度下处理15分钟，湿热灭菌中，以蒸汽加压灭菌效果最好，可用常压蒸汽灭菌，也可在高压蒸汽锅中灭菌，其蒸汽温度可达121摄氏度，能将耐热的芽孢在30分钟内全部杀死。但

32、对某些易被高压破坏的物质，如某些糖或有机含氮化合物，宜在60千帕压力下(110摄氏度)灭菌1530分钟。【18】在一般情况下，热压灭菌法所需的温度（蒸汽表压）和时间的关系为：115（67kPa）、30min; 121（97kPa）、20min; 126（139kPa）、15min。在特殊情况下，可以通过试验确认合适的灭菌温度和时间。（XVIII）湿热法是在高压灭菌器中使用高压蒸汽或高温水进行灭菌的方法。因微生物在湿热的环境中，一些重要的蛋白发生变性和凝固，会使微生物死亡，从而达到灭菌的目的。较之干热灭菌，在湿热的条件下，微生物可在相对较低的温度下被杀死。高压灭菌器的常规操作温度是121 ，时间

33、是1020 min；也可选择达到相同杀灭效果的115 ，一般时间45 min。通常湿热灭菌方法适用于可承受所需温度，且能被湿气穿透但不会受到不良影响的、包装在密闭容器中的药物制剂。蒸汽灭菌对油类、脂肪类、油性制剂、其他不能被湿气穿透的制剂，以及可能会被凝结水破干热灭菌：使微生物氧化，而不是蛋白质变性。【19】2 干热灭菌法系热灭菌法的一种，其中有焚烧法和干烤法等。一般细菌的繁殖体在干热80100°C经1小时即死亡，芽胞则需160°C经2小时才死亡。干热灭菌法在医疗中有一定意义。【20】干热法是在特别设计的灭菌设备中进行灭菌的方法，通过气体或电加热，设备内温度是可控的。干热灭

34、菌是基于焚化或氧化使微生物脱水死亡，从而达到灭菌的目的。因干热灭菌在杀灭微生物方面的效果较差，故需要更高的温度和更长的时间。具体的温度和时间需根据产品的装量大小和类型、容器及其热分布特性来确定。一般来说，进行灭菌处理的个体单位应尽量小，装载灭菌设备时热空气应能在设备容器室内自由循环。干热灭菌的温度通常是160170 ，时间2 h。更高的温度可缩短时间，反之，较低的温度则需要更长的时间。干热灭菌通常用于湿热灭菌无效的物质，包括不挥发油、甘油及各种热稳定的粉末等。干热灭菌也是玻璃器皿和手术器具灭菌的有效方法。实 验 部 分 过滤系统气泡点及PH值变化实验设计1.仪器与试剂：1.1仪器：（1）微孔滤

35、膜： 孔径0.22m 级别: 除菌级 直径：150mm 滤膜面积: 225平方厘米 厂家：杭州西斗门设备厂（2）平板滤器：直径：150mm 级别: 除菌级 厂家：上海先维过滤设备厂完整性检测仪： 型号：FILGUARD-212 厂家：上海先维过滤设备厂 （3）蠕动泵，三角瓶 ，脉动灭菌柜，10L立瓶，5L三角瓶，管路等。1.2实验试剂：（1）甘露醇:山东洁晶医药科技有限公司 批号：10080907 配制40L 5%的甘露醇灭菌溶液。（2）微生物指示剂: 缺陷假单孢菌( ATCC19146直径0.3m 0. 4m m) , 北京鑫四环消毒技术开发中心。( 3) 菌液浓度: 每平方厘米应达到10个

36、菌的挑战水平。( 4) 培养基: 硫乙醇酸盐流体培养基: 北京三药科技开发公司, 批号: 091111; 营养琼脂: 广东环凯微生物科技有限公司, 批号: 200907081; 营养肉汤: 广东环凯微生物科技有限公司, 批号:2009120712实验方法：2.1 原理：2.1.1气泡点检测简介气泡点检测原理：截留效率是微孔膜最重要的性能指标，它受控于膜的最大孔径和膜的孔径分布。用来测量膜最大孔径的最普通最经典的方法是泡点压力法，其原理是基于假定微孔膜是由很多圆形毛细管状的孔道组成。测泡点压力时，是先将微孔膜完全湿润 (亲水性的膜一般用纯水湿润，疏水性的膜可用甲醇、异丙醇等溶剂湿润)，然后在装置

37、中对膜一侧施加气体压力，在膜另一侧看气泡的最低压力值时称这个压力点为泡点，膜孔径与泡点压力之间的关系是【8】P=4cos/D其中：P压差 表面压力 浸润液与滤材的接触角 D孔径（厘米） 气泡点检测是证明过滤系统是针对滤膜完整性的一种重要手段2.1.2: 经培养所得菌簇形成单位的英文缩写。 细菌（可见）和真菌的测量单位。菌落形成单位，将稀释后的一定量的菌液通过浇注或涂布的方法，让其内的微生物单细胞一一分散在琼脂平板上，待培养后，每一活细胞就形成一个菌落。与常规利用显微镜对微生物数量进行测量不同，主要是对可见（即多数情况下形成菌落）的细菌数量进行测量的单位。2.2实验过程2.2.1 过滤系统灭菌:

38、 将试验所需的不锈钢桶、硅胶管、过滤器及滤芯等置于脉动真空灭菌器中于121度 灭菌40 min。2.2.2. 无菌甘露醇溶液的制备：配制20L 5%的甘露醇溶液，置于脉动真空灭菌器中于121度 灭菌40 min。2.2.3 完整性测试：（1）系统密闭性检查：按下图所示，连接整个过滤系统，安装滤器。封闭出料口，将上口与压缩空气管道相连。缓慢开启压缩空气阀门，压力表显示0.6mpa时，打开完整性检测仪，打开功能5，按开始键，仪器开始手动检测，在按加压键，升到0.2Mpa时松开生压键，稳定1-2分钟，如显示器压力值不下则气密性完好。(2)滤膜气泡点测试：系统检测合格后，打开完整性检测仪，设置好时间，

39、打开功能3系统自动进行气泡点，检测完毕后，显示器显示气泡点压力。按打印键，打印出结果。2.2.4 微生物截留试验： （1） 截留试验: 将缺陷假单胞菌液360 mL 加入0.5% 甘露醇溶液中搅拌均匀, 取1mL 按中国药典2005 年版2 部附录0.5%微生物限度检查法进行检查, 计数过滤前液体的微生物数量。然后将菌液全部用过滤器滤过, 取1000mL按过滤前药液微生物数量检查法同法操作, 计数过滤后的液体的微生物数量。计算被过滤液体过滤前的微生物数量( N0 ) 与过滤后的微生物数量(N) 比的常用对数值,即: LRV = 1gN0-1gN= 7.7。2.5微生物截留试验：除菌滤器再次进行

40、起泡点测试, 确认试验过程中滤膜的完整性。记录见表一系统完整性确认记录3.实验结果：表一：完整性确认检验结果测量值标准规定是否符合是/否×实验前0.3245MPa实验后0.3241MPa0.30MPa完整性确认检验结果：实验前后都0.30Mpa，所以完整性确认检验结果合格。表2微生物截留试验结果过滤前微生物数量( N)过滤后微生物数量(N)1gN1gNLRV标准规定7.0×10 CFU1.2×10 CFU9.82.17.7LRV 7微生物截留实验4.讨论滤膜的气泡点国内没有严格规定，厂家给的标准为0.30Mpa，所以此次验证以此为准，实验前后滤膜的气泡点0.30Mpa，符合厂家标准，完整性确认检验结果系统。实际生产中，气泡点是过滤系统检测的主要手段。通常也有不合格的情况，如遇到此情况，需认真分析原因，：常见的不合格原因有以下几种滤芯润湿时间；不够滤芯为安装好；过滤系统漏气完整性检测仪漏气；压源压力不足6Mpa；滤芯未冲洗干净；滤芯已坏需要更换等等。如果过滤前未确定不合格，应更换滤芯，如