体外孵育的小白鼠肝脏切片对戊巴比妥钠的代谢作用

1、体外孵育的小白鼠肝脏切片对戊巴比妥钠的代谢作用【目的目的】 通过肝组织与戊巴比妥钠体外孵育，以睡眠开始及维持时间为指标，通过肝组织与戊巴比妥钠体外孵育，以睡眠开始及维持时间为指标，了解肝脏对戊巴比妥钠的代谢作用了解肝脏对戊巴比妥钠的代谢作用【原理原理】 肝组织内含有细胞色素肝组织内含有细胞色素P450酶系统酶系统, ,可致戊巴比妥钠代谢失活可致戊巴比妥钠代谢失活，从而，从而影响其催眠作用影响其催眠作用药物代谢药物作为一种异物进入体内后，机体要动员各种机制使药物发生化药物作为一种异物进入体内后，机体要动员各种机制使药物发生化学结构的改变，即学结构的改变，即药物的转化或称生物转化又称药物代谢药物的

2、转化或称生物转化又称药物代谢，从体内，从体内消除，代谢是药物在体内消除的重要途径消除，代谢是药物在体内消除的重要途径体内各种组织均有不同程度的代谢药物的能力，但体内各种组织均有不同程度的代谢药物的能力，但肝脏肝脏是最主要的是最主要的的药物代谢器官的药物代谢器官体内药物代谢有一部分不经酶促而自动发生，但绝大多数药物是通体内药物代谢有一部分不经酶促而自动发生，但绝大多数药物是通过特异性细胞酶催化的过特异性细胞酶催化的【器材与药品器材与药品】 剪刀剪刀 天平天平 小镊子小镊子 ml移液管移液管 培养皿培养皿 注射器注射器 10ml离心管离心管/试管试管 离心机离心机 试管架试管架 恒温水浴箱恒温水浴

3、箱 95%氧气和氧气和5%二氧化碳混合气体二氧化碳混合气体 0.4%戊巴比妥钠溶液戊巴比妥钠溶液 （玻棒）（玻棒）【实验对象实验对象】 小白鼠小白鼠 【肝损伤模型肝损伤模型】 硫代乙酰胺（硫代乙酰胺（TAA） 其原理是其原理是TAA入肝后延长肝细胞有丝分裂过程，并阻碍入肝后延长肝细胞有丝分裂过程，并阻碍RNA从胞核从胞核到胞质的转移，进而影响依赖酶的代谢过程，到胞质的转移，进而影响依赖酶的代谢过程，最终形成肝细胞坏死最终形成肝细胞坏死.肝实质的破坏引起间质内结缔组织的生成增多，从而引起纤维组织肝实质的破坏引起间质内结缔组织的生成增多，从而引起纤维组织在局部的沉积，其形成的动物模型在血流动力学、

4、形态学及功能上在局部的沉积，其形成的动物模型在血流动力学、形态学及功能上的改变均的改变均与人肝硬化相似与人肝硬化相似. 【步骤与方法步骤与方法】1.取离心管及试管各取离心管及试管各5支，分别标记为支，分别标记为A、B、C、D、E2.取正常小鼠和肝损伤小鼠各两只，颈椎脱臼处死，置方盘内剖腹暴露取正常小鼠和肝损伤小鼠各两只，颈椎脱臼处死，置方盘内剖腹暴露肝脏，肝脏，【步骤与方法步骤与方法】3.用镊子小心取出肝脏，置于生理盐水中用镊子小心取出肝脏，置于生理盐水中漂洗，并将胆囊摘除，滤纸吸漂洗，并将胆囊摘除，滤纸吸干干，放在天平上称取，放在天平上称取1克克肝组织肝组织4.将称好的肝组织放在离心管口，用

5、小剪刀剪碎将称好的肝组织放在离心管口，用小剪刀剪碎5.A、B、C、D、E各管中均准确加入各管中均准确加入0.4%戊巴比妥钠溶液戊巴比妥钠溶液5ml。同时。同时置于置于37恒温水浴中孵育，恒温水浴中孵育，A、C管孵育管孵育30min，B、D、E管孵育管孵育1h，培养期间每培养期间每10min通入气体一次通入气体一次【步骤与方法步骤与方法】6.将上述孵育液将上述孵育液3000r/min离心离心5min，然后将上清液移至相应的，然后将上清液移至相应的A、B、C、D、E试管内试管内7.取小白鼠取小白鼠10只，分为只，分为A、B、C、D、E五组，每组五组，每组2只，称重后均按只，称重后均按0.15ml/

6、10g 分别腹腔注射相应分别腹腔注射相应A、B、C、D、E管内上清液管内上清液【流程图流程图】ABCDE正常肝正常肝 1g正常肝正常肝 1g受损肝受损肝 1g受损肝受损肝 1g0.4%戊巴比戊巴比妥钠溶液妥钠溶液5ml3737孵育，通孵育，通气气30mim60mim30mim60mim60mim3000r/mim, 5mim取上清液取上清液2只只2只只2只只2只只2只只记录给药时间、翻正反射消失及恢复时记录给药时间、翻正反射消失及恢复时间间【注意事项注意事项】1.肝分离操作应迅速，以免延误时间影响药酶活性肝分离操作应迅速，以免延误时间影响药酶活性2.肝切片孵育过程中，应经常用玻璃棒搅动离心管中

7、的内容物，以肝切片孵育过程中，应经常用玻璃棒搅动离心管中的内容物，以使肝切片与药物充分发挥作用使肝切片与药物充分发挥作用3.培养液内通气时气泡需小而均匀，勿超过培养液的液面培养液内通气时气泡需小而均匀，勿超过培养液的液面【实验结果实验结果】组别组别处理处理给药时间给药时间翻正反射翻正反射消失时间消失时间翻正反射翻正反射恢复时间恢复时间睡眠潜伏睡眠潜伏时间时间/min睡眠持续睡眠持续时间时间/minABCDE正常肝孵正常肝孵育育30min正常肝孵正常肝孵育育60min受损肝孵受损肝孵育育30min受损肝孵受损肝孵育育60min未处理未处理【预测结果预测结果】1.睡眠潜伏时间睡眠潜伏时间 E C

8、D A C D A B【讨论讨论】 戊巴比妥钠经肝、受损肝组织孵育后，对小鼠的睡眠有什么影响？戊巴比妥钠经肝、受损肝组织孵育后，对小鼠的睡眠有什么影响？为什么？为什么？【结论结论】1.戊巴比妥钠经肝脏代谢戊巴比妥钠经肝脏代谢2.戊巴比妥钠有镇静、催眠作用戊巴比妥钠有镇静、催眠作用巴比妥类药物的抗惊厥作用【目的和原理目的和原理】了解大剂量中枢兴奋药尼可刹米的中毒表现惊厥了解大剂量中枢兴奋药尼可刹米的中毒表现惊厥观察巴比妥类的抗惊厥作用观察巴比妥类的抗惊厥作用【实验步骤实验步骤】1.取体重相近的小白鼠取体重相近的小白鼠2只，分别编号、标记只，分别编号、标记2.分别给两只小鼠分别给两只小鼠腹腔注射腹

9、腔注射生理盐水和生理盐水和0.5% 戊巴比妥钠溶液戊巴比妥钠溶液 0.15ml/10g3.15min后，分别后，分别皮下注射皮下注射 5%尼可刹米溶液尼可刹米溶液0.1ml/10g，盖好笼盖，盖好笼盖，观察现象观察现象【流程图流程图】1号号2号号0.15ml/10g 生理盐水生理盐水 i.p.0.15ml/10g 0.5%戊巴比妥钠戊巴比妥钠 i.p.15min后后0.1ml/10g 尼可刹米尼可刹米 s.c.观察现象观察现象【结果结果】 注射生理盐水的小鼠出现惊厥注射生理盐水的小鼠出现惊厥 注射戊巴比妥钠的小鼠没有出现惊厥注射戊巴比妥钠的小鼠没有出现惊厥 尼可刹米尼可刹米：对延脑呼吸中枢有直接兴奋作用，可提高中枢对：对延脑呼吸中枢有直接兴奋作用，可提高中枢对COCO2 2的敏的敏感性。还可通过刺激颈动脉体和主动脉体化学感受器而反射性的兴感性。还可通过刺激颈动脉体和主动脉体化学感受器而反射性的兴奋呼吸中枢，使呼吸加深加快。本品在呼吸抑制时兴奋作用尤为明奋呼吸中枢，使呼吸加深加快。本品在呼吸抑制时兴奋作用尤为明显。临床用于中枢性呼吸抑制及循环衰竭、各类继发的呼吸抑制显。临床用于中枢性呼吸抑制