NTproBNP生基础和化验室指标的应用

1、1nt-probnp生物学基础生物学基础和化验室指标的应用和化验室指标的应用潘柏申教授潘柏申教授2内容概要内容概要 nt-nt-probnpprobnp生物学基础生物学基础v 利钠肽家族利钠肽家族v 脑钠肽脑钠肽bnp的生理功能的生理功能v 脑钠肽脑钠肽bnp的分泌和释放的分泌和释放v bnp和和nt-probnp的清除的清除 nt-probnp化验室指标的应用化验室指标的应用v 影响影响nt-nt-probnpprobnp的检验前因素的检验前因素v 影响影响nt-nt-probnpprobnp的检验因素的检验因素v 影响影响nt-nt-probnpprobnp的分析因素的分析因素3利钠肽家族

2、（利钠肽家族（6 6种心血管型肽种心血管型肽 ）anp（心房利钠肽，28肽） anp存在于成人的心房，胚胎和新生儿的心室组织和肥大的心室。在慢性心力衰竭存在于成人的心房，胚胎和新生儿的心室组织和肥大的心室。在慢性心力衰竭等情况下，心房压增加时，心房对其延展作出反应而分泌等情况下，心房压增加时，心房对其延展作出反应而分泌anp。bnp （ b型利钠肽，32肽） 主要存在于心脏中；心房、更主要的心室肌细胞是主要存在于心脏中；心房、更主要的心室肌细胞是bnp的主要来源。最近发现心脏的主要来源。最近发现心脏成纤维细胞等也可以产生成纤维细胞等也可以产生bnp。cnp （ c型利钠肽，22或53肽） cn

3、p主要在中枢神经系统和血管组织合成。不同于主要在中枢神经系统和血管组织合成。不同于anp和和bnp，心脏组织中几乎没，心脏组织中几乎没有有cnp。 urodilatin（u型利钠肽，32肽） 由肾脏以旁分泌的方式分泌，具有利钠利尿作用。由肾脏以旁分泌的方式分泌，具有利钠利尿作用。dnpvnp4利钠肽家族（利钠肽家族（3 3种种npnp受体受体 ） np受体a：作为鸟苷酰环化酶配对受体起生物学效应 np受体b ：作为鸟苷酰环化酶配对受体起生物学效应 np受体c ：作为短的细胞质主受体起清除肽分子和可能的调节细胞增生作用 5利钠肽家族在种群中的分布非常保守利钠肽家族在种群中的分布非常保守 硬骨鱼，

4、两栖动物，爬行动物，鸟类 ：内分泌和旁分泌都能在心和脑中被发现 哺乳动物（人类，猫，牛，狗，家鼠，大鼠，羊和猪） ：内分泌和旁分泌都能在心和脑中被发现 软骨鱼（软骨鱼纲） ：只发现了cnp 一些硬骨鱼 ： anp，cnp，vnp 鲨鱼和盲鳗：cnp 6npsnps功能的进化功能的进化调节渗透压 容量调节 排钠激素 水钠排泄的减容激素 鱼类哺乳动物7人类人类bnpbnp的基因表达的基因表达 bnp基因位于人类1号染色体，与anp基因（居于bnp上游约约8千个碱基）呈前后串联关系 5端上游非翻译区序列有3个外显子和2个内含子。 bnp基因的外显子1编码了5端非翻译区和部分pre-probnp（26

5、个-氨基酸信号肽和最初的18个bnp前体氨基酸）。 外显子2编码了氨基酸45-129 外显子3编码了5末端氨基酸（130-134氨基酸）和3”侧端富含attta非稳定基序的非翻译区 8利钠肽的加工和分泌利钠肽的加工和分泌（5a figure 1）j am coll cardiol 2007;49:119312029b b型利钠肽（型利钠肽（bnpbnp）基因的重要调节因子（）基因的重要调节因子（5a 5a table1table1） 刺激物刺激物潜在效应器潜在效应器cis元素元素肾上腺素能激动剂肾上腺素能激动剂camp, src, rac, gsk3, camk, pi3kgata (-85)

6、, mcat (-97 和和 -124)白介素白介素-1ras, rac, p38 mapk, pkcmcat (-97)内皮素内皮素-1rac, srcgata; -1818至至-408之间区之间区域域; tre 在在 -1000应激应激mkk6 and p38 mapk激动激动剂剂类类ap-1位点在位点在 -111缺血损伤缺血损伤未知未知-408至至+100之间区域之间区域苯肾上腺素苯肾上腺素神经钙蛋白神经钙蛋白nf-at 在在 -927甲状腺素（甲状腺素（t3）甲状腺受体甲状腺受体tre 在在 -1000机械拉伸机械拉伸p38 mapkssres (-652至至-633和和-162)ap

7、-1活化蛋白-1；camp环磷腺苷；camk钙/钙调节蛋白依赖蛋白激酶-；gsk3糖原合成酶激酶-3；mapk丝裂原激活蛋白激酶；mcat肌-cat结合点；mkk6丝裂原激活蛋白激酶激酶6；nf-at活化t细胞的核因子；pi3k磷脂酰肌醇3-激酶；pkc蛋白激酶c；ssres剪切压力反应元素；tretpa-反应元素 hypertension 1996;27:715722.peptides 2005;26:944 956.10 血浆渗透压血浆渗透压 增加血容量增加血容量anp / bnpanp / bnp肾素肾素血管紧张素血管紧张素 iiii醛固酮醛固酮钠的流失钠的流失水的排泄水的排泄钠的排泄钠

8、的排泄肾小球肾小球滤过率滤过率 外周血管阻力外周血管阻力+ + + +- - - - - -+ + + +- -后叶加压素后叶加压素( (抗利尿激素抗利尿激素) ) 心肌扩张心肌扩张利钠肽的生物功能（利钠肽的生物功能（1）11利钠肽的生物作用（利钠肽的生物作用（2） 对对心血管的作用 促进血管内液体转移至血管外，静脉扩张； 增加尿钠排泄和降低心脏前负荷； 抑制脑和外周交感神经系统，抑制自主神经释放儿茶酚胺，降低中枢神经系统交感输出信号，防止血压升高； 降低迷走神经输入阈值，促进副交感兴奋性，抑制通常伴随前负荷下降而出现的心动过速反射和血管收缩 ；12 正常心脏正常心脏 心衰心衰bnpnt-pr

9、obnp脑钠肽的合成与释放脑钠肽的合成与释放anpnt-proanpanpnt-proanpbnpnt-probnp心室肥大13pre-pro-bnp1-134（前脑利钠肽）前脑利钠肽）26-氨基信号序列nt-probnp1-76bnp77-108pro-bnp1-108（脑利钠肽原）脑利钠肽原）t1/2 = 18 分钟 室壁张力增加室壁张力增加t1/2 = 60-120 分钟脑钠肽的演变脑钠肽的演变14b b型利钠肽和型利钠肽和nt-nt-probnpprobnp的清除的清除 bnp的清除 bnp通过受体介导与np受体c结合被清除 bnp能通过血流中中性肽链内切酶的活性所清除 bnp能被包括

10、肾脏在内的高血流量器官通过被动排泄（或局部区域内由中性内切酶降解）所清除 nt-probnp的清除 缺乏主动清除机制 在高血流量的器官床内被清除（肌肉，肝脏，肾脏等） 机制研究显示肾脏对nt-probnp和bnp的清除能力相等15npsnps生物学的小结生物学的小结 np系统在物种间高度保守并有着复杂的基因调节机制。probnp1-108和nt-probnp1-76没有或几乎没有生物学活性，bnp3-32的生物学活性较bnp1-32弱。bnp通过多种机制被清除，包括受体清除，中性内切酶降解和由多种器官被动清除。有多种器官可能以被动方式清除nt-probnp。机制研究显示肾脏对nt-probnp

11、和bnp的清除能力相等 16nt-probnp化验室指标的应用影响影响nt-nt-probnpprobnp的检验前因素的检验前因素 影响影响nt-nt-probnpprobnp的检验因素的检验因素 影响影响nt-nt-probnpprobnp的分析因素的分析因素17影响影响nt-nt-probnpprobnp的检验前因素的检验前因素18影响影响bnpbnp和和nt-nt-probnpprobnp的检验前因素的检验前因素 nt-probnp的检测可以在各种不同的标本中进行 ，包括edta化血浆、血清和肝素化血浆 。但edta化血浆中测得的nt-probnp较在血清或肝素化血浆中低（根据方法的不同

12、可能低10%-13% ） bnp检测只能用硅化玻璃管采样，nt-probnp分析的血样可以抽进玻璃或塑料管中而不会改变其稳定性 检测前的非规律运动对bnp和nt-probnp的影响尚未有报导 姿势对于nt-probnp值并没有太大的影响 没有发现nt-probnp有持续的昼夜节律变化。但在心衰患者中有报道发现bnp的一个较小但重要的昼夜节律变化。 在不同的储存条件下血清或血浆nt-probnp的浓度都较稳定，如室温下保存7天，4 保存10天 ，-20 或更低温度下保存若干个月。bnp在室温条件下甚至在冷冻情况下都不稳定 19室温下在室温下在edtaedta化血浆中化血浆中nt-nt-probn

13、pprobnp的短期和长期稳的短期和长期稳定性优于定性优于bnpbnp（11a 11a figure1figure1) )clin chim acta 2003;338:107115.202-82-80 0c c在在edtaedta化血浆中化血浆中nt-nt-probnpprobnp的短期和长期稳定的短期和长期稳定性优于性优于bnpbnp （11a 11a figure1figure1) )clin chim acta 2003;338:107115.21-20-200 0c c在在edtaedta化血浆中化血浆中nt-nt-probnpprobnp的短期和长期稳定的短期和长期稳定性优于性优于

14、bnpbnp （11a 11a figure1figure1) )clin chim acta 2003;338:107115.22影响影响nt-nt-probnpprobnp的检验因素的检验因素23现有现有nt-nt-probnpprobnp检测的方法间的最大偏倚只有检测的方法间的最大偏倚只有2020，偏倚主要是由于不同检验者采用的不同方法，偏倚主要是由于不同检验者采用的不同方法 ，较容易校正（较容易校正（13a 13a figure2afigure2a）clin chem lab med 2005;43:12631273.24bnpbnp检测方法均基于不同的认证标准，使用针对原始检测方法均

15、基于不同的认证标准，使用针对原始bnpbnp分子分子不同部分的抗体，且定标器也不同，同一样本通过不同的方不同部分的抗体，且定标器也不同，同一样本通过不同的方法检测法检测bnpbnp结果的差异可能结果的差异可能4040。 （13a 13a figure2bfigure2b）am j clin pathol 2005;123:43944525影响影响nt-nt-probnpprobnp的分析后因素的分析后因素26年龄和性别是影响正常人群年龄和性别是影响正常人群nt-nt-probnpprobnp数值的因素（数值的因素（14a 14a figure1figure1）clin biochem 2004;37:210216eur heart j2005;26:2269 2276.27bnpbnp和和nt-nt-probnpprobnp的生物学变异的生物学变异 对连续检测中的差异是否有显著意义进行解释时，需要考虑到整体的生物学变异 一组得到良好控制的hf患者中， nt-probnp 的1周参考变异值为23 一组得到良好控制的hf患者中， bnp 的1周参考变异值为43 nt-probnp浓度的最低生物学变异出现在nt-probnp1300ng/l时。28nt-probnp化验室指标应用的小结小结nt-probnp在临床实验室检测非常方便，在各种温度下