肝组织内HBVcccDNA含量与肝细胞癌临床和病理相关性分析

1、肝组织内hbvcccdna含量与肝细胞癌临床和病理相关性分析钮志林1高胜利1朱翔2陈少骥3吴江第一人民医院感染病科215200摘要：冃的测定肝细胞癌(hcc)癌组织和非癌组织的hbvcccdna含量, 探讨癌组织hbvcccdna与hcc的关系。方法采用荧光定量pcr检测45例肝细 胞 癌患者癌组织和非癌组织屮总hbvdna和hbvcccdna含量，分析2种组织 屮hbvcccdna和总hbvdna与癌组织病理分级的关系。结果血清hbsag阳性 的癌组织较对应非癌组织总hbvdna无显著性差异(4.33±l.lvs4.13±1.09, p=0.439

2、),而癌组织 hbvcccdna 水平显著 升高(3.09&plusmn;1.22vs2.62&plusmn;0.97, p=0.039), hbvcccdna 所占比例也 显著升高(70.09%vs62.33%, p二0.015)； 42 例中有 14 例(33%)的癌组织 hbvcccdna 几乎成为hbvdna唯一存在形式；3例血清hbsag阴性的hcc屮均检测到了 hbvcccdna的存在，且hbvcccdna比例均较高；癌组织和非癌组织hbvcccdna 与组织总 hbvdna 均呈正相关(r二0.8244, p<0.001；r=0.8460, p<0.0

3、01)；癌组织屮hbvcccdna定量和肿瘤的病理分级无明显相关性(p>0.05)。结论肝癌组 织屮hbvcccdna水平和所占比例较非癌组织均升高，hbvcccdna在肝细胞癌 变屮有重要的作用，但水平与肝细胞癌的病理分级无明显相关。关键词：肝细胞癌，hbvcccdna, hbvdnahbv的共价闭合环状dnacccdna是hbv生命周期屮重要的 复制中 间体，是病毒mrna转录模板，也是病毒感染和复制的重要 标志1,被公认为 hbv持续感染和肝脏进行性病理改变的根本原因。我们应用荧光定量pcr方法 检测癌组织和非癌组织hbvcccdna水平，分析其与肝癌病理分级关系，了解 hbvcc

4、cdna在hcc中的作用。1研究对象与方法1.1研究对象2012年12月2013年5月就诊的45例原发性肝癌患者，男36例， 女9例。其中42例为血清hbsag阳性，3例为血清hbsag阴性，其中2例 血清抗hbe和抗hbc均阳性，1例仅抗hbc阳性。血清抗hcv抗体均阴性。 所有患者均未进行过抗病毒治疗。hcc诊断均经病理检查证实。癌组织和非癌 组织均取自于手术切除标本，非 癌组织中均未查到癌细胞。所有标本采集后， 部分10%甲醛固定、石蜡包埋、连续切片后行he染色。其余组织放入70°c保 存备用。1.2 肝组织中 hbvcccdna 和总 hbvdna 定量 vq.pcr 检测

5、hbvcccdna 定量检测试剂盒购于杭州博赛基因诊断技术有限公司，按说明书操作，检测范 围是 2.5&times;1022.5&times;1011copies/ml 总 hbvdna 用荧光定量 pcr 仪 (罗氏公司lighecycler仪)检测，取检测结果对数值进行统计学分析。1.3肝癌组织病理学分级按edmondson分级，其中i级8例，ii级 20例，iii级12例，iv级5例。1.4统计学处理用spss16.0软件进行。2结果2.1血清hbsag阳性癌组织和非癌组织内hbvdna和hbvcccdna的定量结果表142例血清hbsag阳性癌组织和非癌组织中hbvdn

6、a定量水平(&plusmn;s, log)3例血清hbsag阴性的癌组织内hbvdna和hbvcccdna定 量平均值 (&plusmn;s, log)分别为 3.03&plusmn;0.49 和 2.52&plusmn;0.37,非癌组织内 hbvdna 和 hbvcccdna 定量平均值分别为 2.82&plusmn;0.61 和 1.81&plusmn;0.35o此3例癌组织中hbvcccdna所占比例均高于对应的非癌组织，最高者可 达 99.52%o2.2癌和非癌组织中hbvcccdna与组织hbvdna定量的相关性，癌组 织中hbvcc

7、cdna和hbvdna定量呈高度正相关，r二0.8244, p<0.001；非癌组 织中hbvcccdna和hbvdna定量亦 呈高度正相关r=0.8460, pv0.001。2.3hcc组织中hbvcccdna水平与病理分级的关系无显著的相关性(p<0.05)o3讨论levrerom等2曾用实吋pcr技术定量检测癌组织和非癌组织中hbvdna水平，但该技术不能区分cccdna和rcdna,无法了解hbvcccdna水 平和变化。江明凤等3设计的嵌合引物检测方法，利用hbvrcdna和hbvcccdna 分子结构的不同，有效地将两者分开，实现了对cccdna的特异性检测。本研究采用

8、此方法，结果显示癌组织中hbvcccdna水平和hbvcccdna 占总hbvdna的比例均较非癌组织显著增加，但2种组织的总hbvdna水平 没有显著差别；组织内hbvcccdna水平和总hbvdna水平呈高度正相关；癌 组织中hbvcccdna水平与hcc的病理分级无明显相关。与cheng等用侵入 式方法对hcc患者肝 癌组织和非肝癌组织hbvcccdna和总hbvdna的检测结 果一致。本研究中80%的hcc均存在肝硬化，肝硬化是hcc重要的前 期病变。 逻辑上硬化的非癌组织的hbvcccdna的水平应比无硬化的慢性肝炎组织高，马 艳丽等同样采用嵌合引物法对48例慢性乙肝患者肝活检组织中

9、hbvcccdna和总hbvdna进行了定量检测，慢肝组织中hbvcccdna水平和本 文硬化非癌组织hbvcccdna水平进行比较后，前者水平明显高于后者，可能随 着肝脏的进行性病理改变，病毒常规复制总体逐渐减弱的趋势占据了主导地位。本研究中癌组织和非癌组织内hbvcccdna水平与其总hbvdna水平 均呈高度正相关，与慢性乙肝患者肝活检组织中两者相关性的研究结果一致， 显示此正相关存在于整个慢性乙肝自然病 程中，组织内总hbvdna水平在一定 程度上可以反映组织内hbvcccdna的水平。研究表明，抗病毒治疗能显著降低组织内hbvcccdna水平和hcc的发生6。本研究中，包括3例血清h

10、bsag阴性的hcc在内，癌组织内 hbvcccdna水平和比例均升高，甚至成为唯一存在形式，提示hbvcccdna在 hcc发生过程中起着重要作用。虽然具体机制尚不清楚，但为临床上进行积极 的抗病毒治疗而降低肝癌的发生提 供了理论依据。参考文献1 jun-bi ns,zhic,wei qinn junf.aquantitativemethodtodetecthbvcccdnabychimericprimera ndrealtimepolymerasechainreactio nv irol methods.2003.112(1-2):45-52.2 levrerom,pollicinot,p

11、etersenj,bellonil,raimondog,dandrim.c ontrolofcccdnafunctioninhepatitisbvirusinfectionhepatol.2009.51 ：581-92.江明凤，江培学,陈伟华乙肝患者血清中hbvcccdna荧光定 量检测方法的优化中国卫生检验杂志.2010.(04):782-785.4chengpn 丄 iuwctsaihwm/ucchangteyoungkc.associationofin trahepaticcccdnareductio nwiththeimproveme ntofliverhistologyi nc hronichepatitisbpatientsreceivingor