神经外科ICU病房鲍曼不动杆菌耐药性基因研究分析

1、神经外科icu病房鲍曼不动杆菌耐药性基因研究分析马英花，杨桂清，曹银光聊城市人民医院，252000【摘 要】目的：调查分析聊城市神经外科icu病房109株鲍曼不动杆菌耐 药性及β-内酰胺酶基因型。方法：用k-b法测定临床分离的109株鲍曼不动 杆菌对13种抗菌药物的耐药性，采用pcr法检测β-内酰胺酶耐药基因型。 结果：除imp外,109株鲍曼不动杆菌对其余13种抗菌药物的耐药率均超过50%, pcr扩增对imp中介或耐药的53株鲍曼不动杆菌有11株扩增到blaoxa-23,产 esbls 组 29 株中有 5株扩增出 blashv>blactx-m-

2、14>blactx-m-3,2株出现 blashv、 blactx-m-lo结论：聊城市神经外科icu病房鲍曼不动杆菌多重耐药常见，β 内酰胺酶产牛率高，碳青霉烯酶以blaoxa-23型为主，esbls、ampc酶两种β- 内酰胺酶基因的多重pcr阳性率均低。【关键词】鲍曼不动杆菌；β内酰胺酶；基因型【中图分类号】r446.5【文献标识码】a【文章编号12096-0867(2016)-03-049-02 不动杆菌是近年来医院感染中分离率增长非常快的菌种，其中鲍曼不动杆菌 最为常见1。鲍曼不动杆菌是一类不发酵糖类、氧化酶阴性、没有动力的

3、革兰 阴性细菌，是目前引起院内感染的重要的条件致病菌,随着广谱抗牛素的广泛使用 及介入性操作的使用，鲍曼不动杆菌在非发酵菌中分离率仅次于铜绿假单胞菌而 位居第二，而在不动杆菌属中分离率最高。该菌在医院环境中分布很广且可以长 期存活，极易造成危重患者的感染，因此常从被感染患者的血、体液、脓液及呼 吸道分泌物等标木中分离出，在非发酵菌中感染仅次于假单胞菌2。本研究对 2009年1月2014年6月，109株鲍曼不动杆菌耐药的表型和常见的β-内酰 胺酶基因类型进行了检测，现报告如下。1材料与方法1.1菌株来源：2009年1月2014年6月间共从聊城市人民医院神经外科icu 住院病人送

4、检标本中分离出鲍曼不动杆菌109株，标本类型包括痰液、创面分泌 物、血液、导管等，全部菌株均分别使用法国梅里埃vetec2compact进行细菌 鉴定试验。使用的标准菌株为人肠埃希菌atcc25922和铜绿假单胞菌atcc27853。1.2药敏试验：采用k-b法测定13种抗菌药物的敏感性。本实验采用的方法 和判读标准均按照美国clsi2014的规定进行。1.3ampc粗提酶液制备与三维试验：参照文献操作31.4基因检测：均为pcr法:β-内酰胺酶基因检测本研究共进行了 18种 β内酰胺酶、氨基糖昔类修饰酶基因检测，引物和产物见表x表1靶基因pcr引物序列no

5、te： blaadcgene,wholegeneamplificationsequencingfoward primer： 5’-atgcgatttaaaaaaatttcttgtc/tta-3’, re verseprimer： 5’-ttatttctttattgcattc-agcac aa/gc-3’.pcrproductisll52bp.2结果我们对聊城市人民医院神经外科icu病房培养的109株鲍鳗不动杆菌釆用 k-b法进行了 13种抗菌药物敏感性试验，用pcr检测了β内酰胺酶耐药基 因型，结

6、果如下：2.1 2009年1月2014年6月神经外科icu鲍曼不动杆菌对13种抗菌药物的 药敏结果（表2）表2鲍曼不动杆菌对13种抗菌药物的耐药率和敏感率（）2.2 esbls基因的多重pcr结果为：71株鲍曼不动杆菌对ctx/caz均耐 药，对该71株菌中的每一株均进行了 shv、ctx-m-3和ctx-m-14基因pcr的电 泳分析，结果表明，29株菌中共有5株扩增出条带（该29株菌均来自三维试验 产esbls组），其中3株表现为大小不等的3条单一条带，分别约150bp、300bp、 450bp,分别是blashv、blactx-m-14> blactx-m-3； 5株扩增条带中的另

7、外2株 出现大小一致的双条带，均约为150bp、300bp大小,考虑同时存在blashv、 blactx-m-1两种基因型（图2）。42株鲍曼不动杆菌（该42株菌均来自三维试验 不产生esbls组）的pcr扩增电泳结果均没有条带出现。3讨论鲍曼不动杆菌感染的治疗一直是临床上很大的难题，因为鲍曼不动杆菌极易 对各种消毒剂和抗菌药物产生耐药性,对重症患者、icu病房的患者等威胁很大。 多重耐药鲍曼不动杆菌、泛耐药鲍曼不动杆菌、耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌等的 广泛传播更是成了医生和患者的噩梦。鲍曼不动杆菌是医院感染重要的条件致病 菌，其环境释放能力强，传播速度快，已成为呼吸道院内感染的主要致病菌，也

8、可引发菌血症、尿道感染、继发性脑膜炎等。鲍曼不动杆菌的环境生存能力强、 耐药率高，近年来已成为重要的院内感染条件致病菌，其在医院环境中广泛分布 且可长期存活，易老弱危重及免疫力低下的人群中爆发流行4-5o本研究检测了 脑外科鲍曼不动杆菌的耐药性、ampc酶、β内酰胺酶基因，报告如下：本研究发现，鲍曼不动杆菌对β内酰胺类抗生素耐药率均在27.9%-77.9% （ipm除外）。耐药率相对较低的包括头砲哌酮/舒巴坦及氨茱西林/舒巴坦，这可 能是β 内酰胺酶能够被舒巴坦可抑制，又可通过作用于细菌的青霉素结合蛋 白，增加了其抗药活性6。阿米卡星耐药率

9、较低（29.5%）,但临床用药后的反馈证 明该药单独使用疗效不佳。左旋氧氟沙星耐药率已经达到39.3%,这可能与近年来 临床广泛使用这类抗生素有关。该研究表明，鲍曼不动杆菌对ipm的耐药率最 低（<3.6%）,可能与该药对多数β-内酰胺酶稳定有关。从表2可以看出鲍曼 不动杆菌已经出现泛耐药菌株，109株鲍曼不动杆菌耐药率除亚胺培南外，其余 药物耐药率均在73.40%以上，并口呈上升趋势，对亚胺培南耐药率已达到34.5%。本研究实验对ipm中介或耐药的136株鲍曼不动杆菌的基因，采用了引物 oxa-23> oxa-24进行pcr扩增，结果是blaoxa-23

10、阳性，blaoxa-24阴性。但感 染携带blaoxa-23基因的鲍曼不动杆菌（33株）者，择其临床资料完整的25例， 其中有23例被诊断为医院感染，这说明存在对ipm耐药的鲍曼不动杆菌医院感 染流行，且基因型为blaoxa-230结合临床使用药物情况分析，鲍曼不动杆菌对 ipm、美罗培南等碳青霉烯类药物耐药由于产生了 0xa-23型和0xa-6型碳青霉烯 酶7。本研究多重pcr检测了鲍曼不动杆菌的esbls、ampc酶，在13株鲍曼不动 杆菌中，有3株esbls基因型阳性，2株ampc酶基因型阳性，两者阳性率均低。 该结果说明这些基因型在鲍曼不动杆菌中没有大量出现，可能属于散发，故推测 可能

11、与耐药鲍曼不动杆菌医院感染流行无关。然而，这些基因型在鲍曼不动杆菌 中发生率虽然不高，似乎与医院感染的传播关系不人，但该结果提示质粒的水平 传递已经存在。这应引起临床医生的足够重视，严格按照抗生素使用规定，合理 使用抗生素，减少或防止院内感染耐药菌的传播。参考文献：邹玖明，张爱平,李智山，等.不动杆菌属与医院感染j中国感染与化疗杂 志,2011.11(4):314-316.2王丹，许颖鲍曼不动杆菌的分布特征及耐药性分析j国际检验医学杂 志,2013, 2 ( 3 ):361-363.3李乃健，徐襯健，孙慧冰，等多重耐药鲍曼不动杆菌的耐药性与ampc 耐药基因的研究j中国热带医学,2010.6 (10)： 669-671.4何臣，徐羽中，李元广，等下呼吸道鲍曼不动杆菌感染的临床分布及耐 药性分析j临床肺科杂志,2013,9 (18):1563-1566.周秀珍，卢岩，王艳玲，等.1999-2010年连续