CR结果PAL课件

1、CR结果PALPPT课件12341号孔：空白对照号孔：空白对照2号孔：下游号孔：下游P7 P8（405bp）3号孔：上游号孔：上游P5 P6（314bp)4号孔：号孔：marker200010007505002501002010,12,24上样量5ulCR结果PALPPT课件引物20、21（P7,P8)，加样0.5ul产物405bp引物18.19加样0.5ul产物314bpP5,P6Marker750bp 加样2ul共60ng其余Marker均20ng.2010年12月31号产物回收跑胶照片，还剩产物14.5ul，约580ng(根据亮度按20ng/0.5uL计算）To do: 用zhh 201

2、0.1.10的P1P2,P3P4， （ P5P6和P7P8： 40ng/mL）P1P2:P5P6=2:3，P3P4:P7P8=2:5, P1P2和P3P4做1:3dilution，2nd PCR, P5P6:0.5uL,P7P8:0.9uL2010.12.31CR结果PALPPT课件marker12341号：体系中模板号：体系中模板p78多多加了加了0.3ul。条带为。条带为p3p4+p7p8（1605bp）2号：体系中用了新号：体系中用了新buffer。无条带。无条带。P3p4+p7p83号：同号：同2号号,无条带。无条带。P1p2+p5p64号：体系中模板号：体系中模板p56多多加了加了0

3、.3ul。条带为。条带为p1p2+p5p6(1814bp)200010007505002501002011、1、20CR结果PALPPT课件分析：分析： 1、4号都出现了正常条带，说明体系中模板多加号都出现了正常条带，说明体系中模板多加适量对结果影响不大，但是产物产量偏低。适量对结果影响不大，但是产物产量偏低。 2、3号均未出现条带说明可能是所更换的号均未出现条带说明可能是所更换的buffer有一定问题，需要进一步验证。有一定问题，需要进一步验证。2011、1、21 重复上述重复上述PCR，所用，所用buffer为新的，和上述为新的，和上述3、4号的一致，仍未出条带，得出结论，可能是号的一致，

4、仍未出条带，得出结论，可能是buffer的的原因，进一步探究。原因，进一步探究。CR结果PALPPT课件1231号产物P2P5(1814kb)2号产物P4p8(1605kb)3号marker750kb上样量1ul，产物量较小为20ng/ul共1ug，1号有杂带，2号条带周围较模糊2011,3,4CR结果PALPPT课件改进PCR条件，切胶回收 需要25ug（in 20uL）注：两种产物同时提取的总量 CR结果PALPPT课件1234561号：原方法p25 加样1ul2号：原方法p48 加样1ul3号：原方法 buffer为zhh的 加样1ul4号：新方法p25 加样1ul5号：新方法p48 加

5、样1ul2011.3.116号：marker 2ul估计：1,2号孔为20ng/ul，4号孔为30ng/ul，5号孔为65ng/ulCR结果PALPPT课件12345671号:marker 2ul5、6、7号：p4p8 各1ul2、3、4号：p2p5各1ul 分别为温度48.7 、54.2、Mg离子浓度2.0mol/L估计30ngCR结果PALPPT课件1号:marker 2ul1、2、3号：p4p8 各上样1ul亮度和最暗的marker差不多亮度，估计20ng,3管各50ul,总量1ug123420110412CR结果PALPPT课件1号：marker 2ul2号：p78 上样1ul3号：p56上样1ul123CR结果PALPPT课件1231号： p78 上样0.5ul2号： p56上样0.5ul 3号：marker 2ul估计量CR结果PALPPT课件marker123420001000750500250100欲扩增P4P8，温度梯度1、温度51.7 （52 ）2、温度53.8 （ 54 ）3、温度55.7 （ 56 ）4、温度58.2 （ 58 ） 括号里是预设的，括号外的是实际PCR仪设计的其余条件为改变，所用程序为最初的程序，电泳上样1ul,marker 2ul条带