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文档简介
1、精品文档由于HPV不能在体外细胞培养,故不能用简便的血清血检测进行 HPV的诊断和分型。临床上 用于检测 HPV的方法包括细胞学方法、免疫组化、原位杂交、斑点杂交、核酸印迹和PCR等,其中以PCR方法的敏感性最高,是目前应用最多感染的HPV型别、含量、持续时间决定病变的发展与预后,是进行HPV检测的主要内容。目前主要是通过应用分子生物学方法进行HPV DNA勺检测。1、现有的HPV验室主要检测手段: 聚合酶链反应(PCR, Polymerase Chain Reaction):扩增位于两段已知序列之间的DNA断的方法。该法有较高的敏感度,可进行HP/型,缺点是对实验室环境要求较高,容易发生样本
2、间的交叉污染,从而导致假阳性率高。核酸杂交检测有较好的特异性和敏感度,还可以进行HPVDNA勺分型,各种核酸杂交检测方法有一定的 优缺点。A核酸印迹原位杂交适用于HPV分型和HPV DN心子量鉴定,虽然灵敏度高,但因操作复杂,需要新鲜组织标 本,不便在临床上大规模使用。B斑点印迹其敏感度和特异性均低于核酸印迹原位杂交法,虽然经济实用,但实验过程存在有放射性污染,是环保所不能轻视的问题。C原位杂交(in situ hybridization , 一种核酸杂交技术,可用来测定基因或特定核 甘酸序列在核酸分子的所在部位,检测重组体DNA通过非放射性探针对石蜡组织进行检测,能作定位检测,假阳性率低,但
3、灵敏度不高,大大降低了临床使用价值。D杂交捕获法(Hybrid Capture)杂交捕获试验是利用化学发光对抗体捕获的信号加以放大。首先使DNAM链释放并分解成为可以杂交的核甘酸单链 ,DNA单链与RNAa合探针结合为 RNA-DN原合体,特异性抗体将 RNA-DN媒合体捕获,偶联有碱性磷酸酶的第二抗体与 RNA-DN原合体结合,碱性磷酸酶使酶 底物发光,根据光的强弱可确定碱性磷酸酶的含量 ,从而确定RNA-DNA合体的含量。能检测 13 种高危型 HPV,包括 HPV16 18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68。各种检测方法的比较各种检测方法的比较方法学灵敏度
4、特异性技术特点细胞学(Cytology )低低操作容易,成本较低,准确度较差斑点印迹(Dot blot )中中有一定放射性核酸印迹原位杂交(southernblothybridization )高高标准、麻烦,不宜大规模使用原位杂交(In Situhybridization )高中蜡块组织包埋内检测 HPV杂交捕获(HC HC2高中无放射性,易使用,高、低危型间有交叉反应,且不能分型普通多聚酶链反应(PCR很高中取材容易,但目前已应用试剂的只能检测少数单一型别,如6、11、18等,且由于技术上的问题存在假阳性2、最新推出的HPV的实验室检测技术高灵敏度高危型HPV分型多色荧光实时 PCR式剂:
5、为欧洲著名分子生物学研究机构专门针对宫颈癌筛查而全新设计的高危型HP/型多色荧光实时 PCR佥测试剂,可同时检测高危型中最主要的16、18、31/33、35/45型。了解宫颈疾病人乳头状瘤病毒( HPV )感染患者中 HPV亚型分布情况及高危型 HPV的年 龄分布。方法采用专利Invader酶切信号放大法,利用Cervista HPV HR Cervisat 核酸杂交基因分型试剂检测宫颈脱落细胞HPV的14个亚型DNA。HPV型组亚型J备注A5/A651, 56, 66A718, 39, 45, 59, 68A916, 31, 33, 35, 52, 58精品文档1.3 HFV DMA *因分
6、型检费HybriMstx联用棱酸分子杂交仪,口NA摄取忒 剂盒和人乳头状短痛毒核酸分子快速杂交易因分型 试剂需(HyhriMRK.美国专利6020187 )均为凯普 生物科技有限公司产品口果田低密度基因芯片和导 流杂交技术(dflw-th«xii hyfcridizaiion)应用墓核 甘酸探针杂交.口I检出13种高危亚型(HPV 1队 以 31, 33、35v 3g. 45、51、52、56, 58, 59、 68). 5 种低危亚型(HPV6. LU 42、43 和 44) 及中国人特有的高危亚型(CW304, 53、66)fl具 体步膜如下:利用凯普生物化学科技公司的基 因里抽
7、提试剂盒提取样本DNA.FTC-200 ( MJ 曲h) PCR扩增.反应体系25皿,条件为95 T9 min, 95 T: 20 s, 5530 ar 72 12 M .r 扩增 40个循环,72 f延伸5 min中45七预热后.在 HybriMaj医用核酸分子快速杂交仪平台上放入标 记有21种HPV帮因型寡核昔酸探针的低密度基因 芯片,将外增产物置93 X:变性5 mM.冰浴2 min, 加入检测孔内透行10 min的界流杂交I场标用 色:加入封阻液封闭为反应的空白微扎,酶标显色 后观察检测结果,阳性点呈现盘紫色圆点,多个圆 点阳性即为多重感染.每张芯片上有PCR反应质 控点和柒交显色质控
8、点各I个。HPV基因分型检测试剂盒(PCR-反向点杂交法)【产品用途】对人乳头瘤病毒(HPV)的感染情况进行定性检测并加以分型,能够检测23种HPV基因型,直接提示感染HPV的基因型;包括18种高危和5种低危型,可用于临床 HPV感染的辅助诊断。【产品优势】1 .精确分型:能同时对 23种HPV基因型进行精确分型,包括 18种高危型和5种地位型;2 .效率高:单次检测标本数量可达 96份;3 .性能好:特异性强、重复性好,均高于 98% ;4 .设备通用:如普通 PCR仪和杂交仪,适应于大、中、小型实验室;5 .内部质控:具有真正意义上的内部质控,检测结果更加准确;6 .可以检测多种临床标本。【技术方法】采用 PCR 和反向点杂交法相结合的基因芯片技术【检测原理】通过检测杂交将大量不同序列的探针分子固定于支持物的不同位置上,然后与已做标记的样本进行杂交,信号的强度和分布来进行分析。【检测标本】
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