大肠杆菌非中断杂交基因定位

1、大肠杆菌非中断杂交基因定位院 系：生命科学学院班 号：周三上午第5组组 员：王笑梅、金岚 欧阳智山、阿布都实 验 日 期：2015年12月9日实验结果：我们小组对BG板上生长的菌落数进行了统计，4个人的统计结果如下表所示：表1 本小组BG板菌落统计表组员平板上生长的菌落性质BCDEFG1阳性173929174027阴性795460774471无法确定471161622阳性173630211731阴性735965747362无法确定105551073阳性173615111925阴性836182887566无法确定0331694阳性333928336541阴性615653612239无法确定651

2、961320表2 本小组BG板结果统计表B(arg)C(purE)D(trp)E(his)F(lac)G(gal)119.0 42.5 34.5 20.0 48.0 28.0 222.0 38.5 32.5 23.5 22.0 34.5 317.0 37.5 16.5 11.5 22.0 29.5 436.0 41.5 32.5 36.0 71.5 51.0 平均生长菌落数23.5 40.0 29.0 22.8 40.9 35.8 菌落生长百分数23.5%40.0%29.0%22.8%40.9%35.8%重组频率23.5%40.0%29.0%22.8%40.9%35.8%本实验的选择培养基有B

3、G，共6个，其中B培养基不加精氨酸，C培养基不加腺嘌呤，D培养基不加色氨酸，E培养基不加组氨酸，F培养基以乳糖为碳源，G培养基以半乳糖为碳源，每一种培养基都能验证一个基因的表达与否，且基因重组的频率与距离原点的距离有关，所以根据不同培养基中的存活菌数可以间接判断重组频率，也就可以得知基因排列的大概顺序，做出染色体图。由此，我们小组得出的基因顺序为：F-C-G-D-B-E，即lac-pueE-gal-trp-arg-his。分析得到的染色体图如下： lac purE his gal trp arg图1 本小组实验结果推测染色体图由于一个小组的实验数据有限，可能产生较大误差，所以我们综合了全班的实

4、验数据，得到如下表所示的结果：表3 全班结果统计表 板号 组号BCDEFG板号排序一26.538.23229.54737.8FCGDEB二18.2536.7541.7529.8561.531.5FDCGEB三12.7527.2526.524.557.2536.75FGCDEB四15.37538.87525.625045.62524.875FCDGBE五23.5402920.2540.87535.75FCGDBE六9.527.6712.6733.82013.67ECFGDB平均值17.6534.7927.9227.5845.3830.06FCGDEB由表3可知，本班结果得到的基因顺序为FCGDE

5、B，即lac-pueE-gal-trp-his-arg。分析得到的染色体图如下： lac purE arg gal trp his 图2 全班实验结果推测染色体图为了进一步减小实验数据产生的误差，我们还综合了全年级的实验数据，得到如下表所示的结果：表4 全年级结果统计表 板号 班次BCDEFG板号排序周三上午183528284530FCGDEB周三下午303626175328FCBGDE周四上午104645195942FCDGEB周四下午17.0842.1338.2920.2567.6338.29FCDGEBFCGDEB全年级结果18.6339.6434.2521.1156.4234.62FC

6、GDEB由表4可知，本年级结果得到的基因顺序为FCGDEB，即lac-pueE-gal-trp-his-arg。分析得到的染色体结果如下： lac purE arg gal trp his 图3 全年级实验结果推测染色体图表5 历年结果统计表学年板号排序学生年级2010-2011FGCDEB20082011-2012FCDGEB20092012-2013FCDGEB20102013-2014FCGDEB20112014-2015FGCDEB20122015-2016FCGDEB2013结果讨论通过相关资料的查询，能够知道实际的基因顺序为F-C-G-D-E-B，即lac-purE-gal-trp

7、-his-arg，与全班和全年级得到的基因顺序几乎完全一致，而我们组得到的结果为F-C-G-D-B-E，仅调换了E和B，即his和arg的顺序，故本小组实验结果统计与实际情况相比出现了误差。再由表5观察历年实验结果，只有两年与理论值相同，故存在一定实验误差。分析整个实验过程，我们猜测误差主要出在两个方面，一是操作误差，二是计数误差。1、操作误差因实验在超净台中进行且无污染出现，排除杂菌影响的原因。故操作误差主要可能产生在以下两方面：（1）在点种的时，为提高效率，两位同学同时进行。分别从两个A板中沾取菌落，再点到BG板上，以B板为例，板中150号菌落来自A1板，51100号菌落来自A2板。且把BG板依次排列，由B板开始，向G板方向依次点样，故最先点的那个板上的菌量较多，生长也会比较好，这可能是B板数量偏大的一个原因。（2）在点种时用力较大，或是倒平板太薄造成了培养基破损，对计数造成了一定影响。2、计数误差在计数方面，产生误差的原因主要来自以下两方面：（1） 每个人判定菌落的标准不同，面对流产菌落等多种多样的结果，不同的人有不同的判断，故在计数时菌落统计的结果产生较大差异。（2） 观