宫颈癌基因E6E7mRNA(南阳讲课)

1、Kodia Biotech Inc.,Confidential & Proprietary科蒂亚生物科蒂亚生物 科蒂亚生物：周贺娟科蒂亚生物：周贺娟 新一代宫颈癌变风险评估方法新一代宫颈癌变风险评估方法与与Kodia Biotech Inc.,Confidential & Proprietary科蒂亚生物科蒂亚生物 HPV癌基因E6/E7mRNA 主要内容 报告解读、处理建议1 临床意义、适用范围 32Kodia Biotech Inc.,Confidential & Proprietary科蒂亚生物科蒂亚生物 主要内容1 HPV癌基因E6/E7mRNA 1Kodia

2、Biotech Inc.,Confidential & Proprietary科蒂亚生物科蒂亚生物v2 2. .型别：型别：1 12 20 0多种（依据多种（依据L1 DNAL1 DNA）v1.1.结构：结构： 外壳蛋白：外壳蛋白：L1蛋白（蛋白（72个五聚体），个五聚体）， L2蛋白（蛋白（12个）。个）。 内部遗传物质：内部遗传物质：闭环、双链闭环、双链DNA 。 （不含（不含 RNA）v3.3.分类：分类：依据生物特性、致癌性依据生物特性、致癌性 高危型高危型HPV(HR-HPVHR-HPV) )：1616、1818、3131、3333、3535、3939、4545、5151、5

3、252、5656、5858、5959、6868、6666 低危型低危型HPV（LR-HPVLR-HPV）：6 6、1111、4242、4343、4444 什么是E6/E7 mRNA ?Kodia Biotech Inc.,Confidential & Proprietary科蒂亚生物科蒂亚生物L1: L1: 主要衣壳主要衣壳蛋白，是疫苗蛋白，是疫苗的主要成分。的主要成分。 L2: L2: 次要衣壳次要衣壳蛋白，是市售蛋白，是市售抗体的主要识抗体的主要识别位点。别位点。E4E4：结合并破坏细胞：结合并破坏细胞角蛋白网，形成挖空角蛋白网，形成挖空细胞的外观。细胞的外观。E2E2：负性调节：

4、负性调节E6E6和和E7E7，维持凋亡和细胞周期的维持凋亡和细胞周期的调控。调控。通常在病毒发生通常在病毒发生整合整合时时失活。失活。HPV HPV 的主要致癌基因的主要致癌基因E6E6通过抑制通过抑制p53p53而阻断而阻断凋亡凋亡E7 E7 通过抑制通过抑制pRBpRB使细胞使细胞周期失控周期失控。XHPV的基因片段及功能的基因片段及功能E6/E7 mRNA ?Kodia Biotech Inc.,Confidential & Proprietary科蒂亚生物科蒂亚生物高危亚型高危亚型HPV感染宫颈上皮细胞，将产生两种癌蛋白：感染宫颈上皮细胞，将产生两种癌蛋白：E6和和E7蛋白。癌

5、蛋白蛋白。癌蛋白可与宿主细胞的细胞周期调节蛋白（抑癌蛋白如可与宿主细胞的细胞周期调节蛋白（抑癌蛋白如P53、RB等）相结合，导致细等）相结合，导致细胞周期控制失常，发生癌变。胞周期控制失常，发生癌变。 （人民卫生出版社、妇产科学、（人民卫生出版社、妇产科学、2004年年1月第月第6版）版）致癌原理 E6/E7 mRNA与宫颈癌的关系E6、E7mRNA-是宫颈病变是宫颈病变开始和进展开始和进展的必由之的必由之路路!Kodia Biotech Inc.,Confidential & Proprietary科蒂亚生物科蒂亚生物HPV感染在宫颈细胞内的表达过程基因改变早于细胞改变基因改变早于细

6、胞改变Kodia Biotech Inc.,Confidential & Proprietary科蒂亚生物科蒂亚生物E6/E7mRNA： 是是致癌基因致癌基因E6/E7表达的表达的直接直接产物产物； 是最终致癌物是最终致癌物-E6/E7癌蛋白合成的癌蛋白合成的模板模板； 是宫颈病变开始和进展的是宫颈病变开始和进展的必要条件必要条件！ 小结小结Kodia Biotech Inc.,Confidential & Proprietary科蒂亚生物科蒂亚生物 主要内容1 E6/E7mRNA的临床意义与适用范围 2Kodia Biotech Inc.,Confidential &

7、 Proprietary科蒂亚生物科蒂亚生物高危的高危的HPV感染宫感染宫颈上皮细胞颈上皮细胞癌基因癌基因E6、E7 mRNAE6、E7 癌蛋白癌蛋白E6、E7 癌蛋白与抑癌癌蛋白与抑癌蛋白蛋白P53、RB等结合等结合宫颈细胞宫颈细胞CIN或癌变或癌变癌基因癌基因E6、E7 DNAHPV病毒学检测病毒学检测病毒癌基因学检测病毒癌基因学检测细胞形态学检测细胞形态学检测HPV L1 DNAHPV L1 mRNAHPV L1 蛋白蛋白HPV复制繁殖复制繁殖HPV感染后演变路径及宫颈癌筛查&诊断方法应用Kodia Biotech Inc.,Confidential & Propriet

8、ary科蒂亚生物科蒂亚生物检测方法检测方法检测靶标检测靶标主要检测意义主要检测意义巴氏涂片巴氏涂片宫颈上皮细胞宫颈上皮细胞提示提示宫颈细胞宫颈细胞已发生的病变情况，筛查的基本已发生的病变情况，筛查的基本方法。主要用于评估现阶段宫颈（病变）情况。方法。主要用于评估现阶段宫颈（病变）情况。液基细胞学液基细胞学（TCTTCT）HPVHPV病毒学病毒学HPVHPV 病毒病毒DNADNA提示是否有提示是否有病毒病毒感染。主要用于评估现阶段宫感染。主要用于评估现阶段宫颈是否有病毒感染。颈是否有病毒感染。癌基因癌基因E6/E7 mRNA检测检测病毒癌基因病毒癌基因E6/E7 mRNAE6/E7 mRNA提示

9、病毒提示病毒癌基因已经癌基因已经转录表达转录表达。可用于了解人体宫颈细胞或组织癌变的可用于了解人体宫颈细胞或组织癌变的发发展趋势展趋势。阴道镜检阴道镜检宫颈内表面宫颈内表面提示已经发展到提示已经发展到宫颈表面宫颈表面的病变及其位置。主的病变及其位置。主要是更直接辅助检查现阶段宫颈（病变）情况。要是更直接辅助检查现阶段宫颈（病变）情况。宫颈活检宫颈活检宫颈组织宫颈组织提示提示宫颈组织宫颈组织病变情况，确诊金标准。病变情况，确诊金标准。 临床意义临床意义-特异性强、阳性预测值高特异性强、阳性预测值高Kodia Biotech Inc.,Confidential & Proprietary科

10、蒂亚生物科蒂亚生物正常正常宫颈宫颈感染感染HPVHPV轻度宫颈上皮轻度宫颈上皮内瘤变内瘤变(CIN )(CIN )中度宫颈上皮中度宫颈上皮内瘤变内瘤变(CIN )(CIN )高度宫颈上皮高度宫颈上皮内瘤变内瘤变(CIN )(CIN )原位癌原位癌浸润癌浸润癌依靠免疫力依靠免疫力80%80%自行消退自行消退06-18 6-18 个月个月至少至少2 2年后年后5-10 5-10 年后年后一过性感染一过性感染持续性感染持续性感染62%62%转为正常转为正常16%16%进一步进展进一步进展22%22%维持原状维持原状54%54%转为正常转为正常30%30%进一步进展进一步进展16%16%维持原状维持原

11、状100%100%HPV感染致宫颈癌模式图什么样的感染者会进一步进展呢？哪种检测方法能提示？什么样的感染者会进一步进展呢？哪种检测方法能提示？Kodia Biotech Inc.,Confidential & Proprietary科蒂亚生物科蒂亚生物E6/E7mRNA检测检测 1、发现已感染、发现已感染HPV，且，且癌基因已经表达癌基因已经表达的宫颈病变高风险的宫颈病变高风险 者者, 特异性特异性强强、阳性预测值、阳性预测值高高； 2、弥补：细胞学检测敏感性；、弥补：细胞学检测敏感性； HPV检测特异性；检测特异性； 阴道镜阴道镜/活检的漏检等。活检的漏检等。 3、预测发展趋势，指导

12、后续治疗、随访。、预测发展趋势，指导后续治疗、随访。 提供关键的癌变信息，治疗更提供关键的癌变信息，治疗更及时及时，预防更，预防更有效有效！ 小小 结结Kodia Biotech Inc.,Confidential & Proprietary科蒂亚生物科蒂亚生物 适用范围适用范围（不局限于（不局限于30岁以上人群）岁以上人群）： 1、筛查：、筛查：细胞学细胞学+ E6/E7 mRNA检测；检测； 2、辅助诊断：、辅助诊断： （1）细胞学）细胞学+E6/E7 mRNA检测检测； （2）若）若HPV（+） E6/E7 mRNA检测检测； （3）病理组织）病理组织+ E6/E7 mRNA检测

13、检测。 3、手术后、手术后及及随访随访时时: 组织学组织学+癌基因癌基因E6/E7 mRNA； 细胞学细胞学+ E6/E7 mRNA检测。检测。Kodia Biotech Inc.,Confidential & Proprietary科蒂亚生物科蒂亚生物v TCT结果正常的女性，在正常筛查间隔内一定是安全的吗？结果正常的女性，在正常筛查间隔内一定是安全的吗？v TCT结果：结果：ASCUS，如何评估风险？，如何评估风险？ 直接镜检直接镜检&活检：过度检查？活检：过度检查？ 随访：漏诊？随访：漏诊？ v 30岁以下妇女，感染率高，清除率高，岁以下妇女，感染率高，清除率高，HPV（

14、+）率高，）率高，该如何评估风险？该如何评估风险？筛查筛查 常见常见问题问题Kodia Biotech Inc.,Confidential & Proprietary科蒂亚生物科蒂亚生物. .Intracellular Human Papillomavirus E6, E7 mRNA Quantification Predicts CIN 2 + in Cervical Biopsies Better Than Papanicolaou Screening for Women Regardless of Age. Arch Pathol Lab Med. 2012；136:956-96

15、0.Kodia Biotech Inc.,Confidential & Proprietary科蒂亚生物科蒂亚生物E6/E7 mRNA检测；检测；n 联合联合TCT筛查筛查 基因改变早于细胞形态改变，辅助提高细胞学敏感性，基因改变早于细胞形态改变，辅助提高细胞学敏感性，ASC-US分流分流n 30岁以下女性筛查效率。岁以下女性筛查效率。 筛查应用筛查应用Kodia Biotech Inc.,Confidential & Proprietary科蒂亚生物科蒂亚生物v CIN1风险评估？随访时间确定风险评估？随访时间确定。v CINII-III的患者，手术方式的患者，手术方式 术后

16、随访。术后随访。 特殊病例：未生育女性、妊娠女性？特殊病例：未生育女性、妊娠女性？ 随访间隔？随访间隔？ 辅助诊断辅助诊断 常见常见问题问题：Kodia Biotech Inc.,Confidential & Proprietary科蒂亚生物科蒂亚生物正常正常宫颈宫颈感染感染HPVHPV轻度宫颈上皮轻度宫颈上皮内瘤变内瘤变(CIN )(CIN )中度宫颈上皮中度宫颈上皮内瘤变内瘤变(CIN )(CIN )高度宫颈上皮高度宫颈上皮内瘤变内瘤变(CIN )(CIN )原位癌原位癌浸润癌浸润癌依靠免疫力依靠免疫力80%80%自行消退自行消退06-18 6-18 个月个月至少至少2 2年后年后

17、5-10 5-10 年后年后一过性感染一过性感染持续性感染持续性感染62%62%转为正常转为正常16%16%进一步进展进一步进展22%22%维持原状维持原状54%54%转为正常转为正常30%30%进一步进展进一步进展16%16%维持原状维持原状100%100%HPV感染致宫颈癌模式图Kodia Biotech Inc.,Confidential & Proprietary科蒂亚生物科蒂亚生物预测性能预测性能ASCUS & LSILASCUS & LSIL者，者，2年内跟踪诊断至年内跟踪诊断至CIN2+女性：女性：HPV HPV E6E6、E7 mRNA作为监测手段：检测

18、呈阳性数量约是阴性数量的作为监测手段：检测呈阳性数量约是阴性数量的69.8倍。倍。HPV HPV DNADNA作为监测手段：检测呈阳性数量约是阴性数量的作为监测手段：检测呈阳性数量约是阴性数量的5.7倍。倍。Tor Molden etc. Predicting CIN2+ when detecting HPV mRNA and DNA by PreTect HPV-Proofer and consensus PCR: a 2-year follow-up of women with ASCUS or LSIL Pap smear. International Journal of Cancer

19、. Int. J. Cancer, 2005,114: 973976.Kodia Biotech Inc.,Confidential & Proprietary科蒂亚生物科蒂亚生物E6/E7 mRNAE6/E7 mRNA检测检测 辅助活检后人群的后续处理，提高诊断水平：辅助活检后人群的后续处理，提高诊断水平：n 组织学组织学CIN1CIN1，建议采用，建议采用E6/E7mRNAE6/E7mRNA检测：检测： E6/E7mRNAE6/E7mRNA检测阳性，建议缩短随访时间；检测阳性，建议缩短随访时间； E6/E7mRNA E6/E7mRNA检测阴性，建议根据医嘱随访。检测阴性，建议根据医

20、嘱随访。n 组织学组织学CIN2+CIN2+，建议采用，建议采用E6/E7mRNAE6/E7mRNA检测：检测： E6/E7mRNAE6/E7mRNA检测阳性，建议积极治疗；检测阳性，建议积极治疗； E6/E7mRNA E6/E7mRNA检测阴性，建议保守治疗，密切随访。检测阴性，建议保守治疗，密切随访。 辅助诊断应用辅助诊断应用Kodia Biotech Inc.,Confidential & Proprietary科蒂亚生物科蒂亚生物v 手术后残端是否会残留病毒？复发的可能性多大？手术后残端是否会残留病毒？复发的可能性多大？ v 术后随访间隔是多久，确定依据是什么？术后随访间隔是多

21、久，确定依据是什么？ 术后随访术后随访 常见常见问题问题：Kodia Biotech Inc.,Confidential & Proprietary科蒂亚生物科蒂亚生物Detection of Residual/Recurrent Cervical Disease after Detection of Residual/Recurrent Cervical Disease after Successful LEEP Conization: the Possible Role of mRNA-Successful LEEP Conization: the Possible Role of

22、 mRNA-HPV Test.HPV Test.LeepLeep锥切术成功后检测剩余锥切术成功后检测剩余/ /复发的宫颈疾病：复发的宫颈疾病：mRNA HPVmRNA HPV检测可能发挥的作用。检测可能发挥的作用。14%-70%的阳性切缘患者的阳性切缘患者5-15%的干净切缘患者的干净切缘患者 存在复发宫颈疾病的风险。存在复发宫颈疾病的风险。E6/E7E6/E7mRNAmRNA检测的随访检测的随访Kodia Biotech Inc.,Confidential & Proprietary科蒂亚生物科蒂亚生物 Detection of Residual/Recurrent Cervical

23、 Disease after Successful LEEP Conization: the Possible Role of mRNA-HPV Test. Current Pharmaceutical Design 2013,19,1450-1457. 术后，mRNA（+）比mRNA（-）复发的几率更高n=116（CIN患者经LEEP刀治疗后）Kodia Biotech Inc.,Confidential & Proprietary科蒂亚生物科蒂亚生物E6/E7 mRNAE6/E7 mRNA检测，检测，辅助术后的后续处理：辅助术后的后续处理：n 手术后，病理组织学诊断手术后，病理组织

24、学诊断+E6/E7mRNA检测检测n 术后随访，细胞学术后随访，细胞学+E6/E7mRNA检测。检测。 术后随访应用术后随访应用Kodia Biotech Inc.,Confidential & Proprietary科蒂亚生物科蒂亚生物病例分析病例分析-30岁已婚女性岁已婚女性 2013.12.3体检：体检： E6/E7mRNA(+)E6/E7mRNA(+) 低度风险低度风险 TCTTCT正常正常未进行干预性治未进行干预性治疗，疗，3 3个月复个月复查查 2014.3.25 细胞学：细胞学：ASC-US E6/E7mRNA(+) E6/E7mRNA(+) 高度风险高度风险 术后病检结

25、果：宫颈术后病检结果：宫颈1点、点、6点慢性点慢性宫颈炎，部分区域呈湿疣性改变；宫颈炎，部分区域呈湿疣性改变；12点处小灶区域点处小灶区域CIN2LEEPLEEPKodia Biotech Inc.,Confidential & Proprietary科蒂亚生物科蒂亚生物3: 2012.93: 2012.9月，广东一家医院，一病人月，广东一家医院，一病人6666岁岁TCT HSILTCT HSIL，E6E6、E7mRNAE7mRNA检测阴检测阴 性，性，TCTTCT阅片老师认为那个标本报告为癌都不为过，所以进行活检，但阅片老师认为那个标本报告为癌都不为过，所以进行活检，但 活检结果为活

26、检结果为CIN1-2CIN1-2级，临床医生对活检不满意，并考虑到该病人年龄级，临床医生对活检不满意，并考虑到该病人年龄 比较大，行使锥切后活检，活检结果比较大，行使锥切后活检，活检结果CIN1CIN1。1：2012.3月，河北一医院对一月，河北一医院对一LEEP术后术后45岁病人加做岁病人加做E6，E7mRNA检检 测，发现拷贝值为测，发现拷贝值为2万多，两周后重新取样检测，发现万多，两周后重新取样检测，发现E6,E7 mRNA 检测仍有一万多拷贝，于是重新取样活检，发现切缘为检测仍有一万多拷贝，于是重新取样活检，发现切缘为CIN3级。级。2 2：2012.72012.7月浙江余姚市一医院，

27、一病人月浙江余姚市一医院，一病人HPV HPV 检测阴性，检测阴性，TCTTCT检测正常，检测正常， E6 E6、E7mRNAE7mRNA检测一万多拷贝，主任对该检测结果质疑，对该病人进行检测一万多拷贝，主任对该检测结果质疑，对该病人进行 活检，病理结果活检，病理结果CIN2CIN23 3级。级。病例病例Kodia Biotech Inc.,Confidential & Proprietary科蒂亚生物科蒂亚生物 主要内容1 报告解读及处理建议 3Kodia Biotech Inc.,Confidential & Proprietary科蒂亚生物科蒂亚生物 细胞细胞学学E6E6

28、、E7E7mRNAmRNA结果解读结果解读临床处理建议临床处理建议 正常正常-未检测到癌未检测到癌基因转录。基因转录。1年后复查细胞学和年后复查细胞学和E6/E7 mRNA。 +癌基因转录癌基因转录，未观察到，未观察到细胞形态的细胞形态的改变。改变。酌情进行阴道镜检或酌情进行阴道镜检或6个月后复查细胞学和个月后复查细胞学和E6/E7 mRNA。ASC-ASC-USUS -未检测到癌未检测到癌基因转录。基因转录。6-12个月复查细胞学和个月复查细胞学和E6/E7 mRNA。 +癌基因已经癌基因已经开始转录，开始转录，细胞形态处细胞形态处于转变期。于转变期。异常异常-癌基因此时癌基因此时处于转录不

29、处于转录不活跃状态。活跃状态。 +癌基因已经癌基因已经开始转录，开始转录，细胞形态已细胞形态已经明显改变经明显改变，处于细胞，处于细胞形态改变状形态改变状态。态。阴阴道道镜镜/ /活活检检如无如无病变病变，半，半年后年后复查复查E6/E7 E6/E7 mRNAmRNA如如E6/E7 E6/E7 mRNAmRNA（+ +），查细胞，查细胞学学细胞学细胞学ASC-US,ASC-US,阴道镜检阴道镜检如如E6/E7 mRNAE6/E7 mRNA（- -），半年后查），半年后查E6/E7 mRNA+E6/E7 mRNA+细胞学。细胞学。阴阴道道镜镜/ /活活检检无病变：严密随访无病变：严密随访CIN2

30、+:CIN2+:相应手术治疗相应手术治疗Kodia Biotech Inc.,Confidential & Proprietary科蒂亚生物科蒂亚生物组织组织学学E6E6、E7E7mRNAmRNA结果解读结果解读临床处理建议临床处理建议 CIN1CIN1-未检测到癌未检测到癌基因转录。基因转录。 立即用病理标本的石蜡切片做立即用病理标本的石蜡切片做E6/E7mRNA检测检测+癌基因处于癌基因处于转录活跃状转录活跃状态，进展风态，进展风险较大。险较大。1、建议用病理标本的石蜡切片做建议用病理标本的石蜡切片做E6/E7 mRNA检测，作为检测，作为 治疗的辅助指标。治疗的辅助指标。2、严格随访或进行积极处理（如冷冻、电灼的病灶处理严格随访或进行积极处理（如冷冻、电灼的病灶处理CIN2CIN2/3/3 -癌基因处于癌基因处于转录不活跃转录不活跃状态。状态。1、立即用病理标本的石蜡切片做立即用病理标本的石蜡切片做E6/E7 mRNA检测，作为检测，作为治疗的辅助指标。治疗的辅助指标。 2、临床处理请参照宫颈癌诊治指南临床处理请参照宫颈癌诊治指南。3、建议术后建议术后6个月进行细胞学及个月进行细胞学及E6/E7 mRNA检测。检测。 +癌基因处于癌基因处于转录活跃状转录活跃状态