血清镇静药物阿普唑仑和艾司唑仑临床快速检验研究

1、    血清镇静药物阿普唑仑和艾司唑仑临床快速检验研究    王丹阳 殷雪婧摘要：目的： 构建rp-hplc法同时对血清镇静药物阿普唑仑和艾司唑仑含量进行快速检测。方法： 采用techsphere-ods色谱柱作为分析柱，甲醇：水（65：35）作为流动相，流速1.0ml/min，内标为硝西泮，检测波长为254nm，柱温室温。结果：艾司唑仑和阿普唑仑血浓线性范围0.25-3.0g/ml，其中，最小检测浓度分别为12.5g/l、12.5g/l。日内、日间精密度良好，回收率较高，分别为100.49%、95.08%。结论： 该方法操作简便、结果可靠，可用于临床血

2、清镇静药物阿普唑仑、艾司唑仑浓度测定。关键词：血清；镇静药物；阿普唑仑；艾司唑仑；rp-hplc；快速检验abstract： objective to construct simultaneous rapid detection of serum sedative drugs alprazolam and estazolam in rp-hplc method. methods the techsphere-ods chromatographic column as the analytical column， methanol： water （65：35） as mobile phase，

3、flow rate of 1.0ml/min， internal standard for nitrazepam， the detection wavelength was 254nm column greenhouse temperature. results ai division of estazolam and alprazolam blood concentration was linear in the range of 0.25-3.0 u g / ml. among them， the minimum detectable concentration respectively

4、was 12.5 g / l and 12.5 g / l respectively. day and day precision， recovery rate is higher， respectively， 100.49%， 95.08%. conclusion this method is simple， the result is reliable and can be used in clinical serum sedative drugs alprazolam， estazolam concentration determination.keywords： serum； seda

5、tive drugs； alprazolam； estazolam； rp-hplc； rapid detection作為临床上常见的镇静类药物，阿普唑仑和艾司唑仑均属于bad类药物，具有抗焦虑、镇静、催眠、松弛骨骼肌等作用。有关这两种药物血清浓度检测，多数报道均采用的是外标峰面积进行定量，因而对于实验条件具有较高的要求，且难以进行有效控制。再加上这两种药物容易引发依赖性、成瘾性等不良反应，因而，加强血清中此类药物含量的快速检测具有十分重要的意义。本文采用rp-hplc法对人体血清中阿普唑仑、艾司唑仑药物浓度进行快速检测，旨在为临床血药检测提供快速、可靠的定性定量方法。1资料与方法1.1仪器l

6、c-1500型号高效液相色谱仪，chrom tech色谱工作站，tgl-16b离心机（上海安亭科学仪器厂），xw-80a漩涡混合器（上海医科大学仪器厂），bs210s电子天平（sartorius）。1.2试药阿普唑仑、艾司唑仑、硝西泮（中国生物药品技术检定所），甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，乙醚、乙醇为分析纯（长沙试剂厂）。1.3方法标准溶液、内标的配置。准确称取对照品硝西泮适量，采用无水乙醇进行配制，配制为0.1mg/ml的标准混合液与内标液。置于冰箱中保存，使用前进行相应的稀释。色谱条件。分析柱采用的是techsphere-ods（250mm×4.6mmid，5m），保护柱ods（

7、10mm×4.6mmid，5m），流动相为甲醇：水（65：35），流速为1.0ml/min，检测波长为254nm，柱温室温，aufs为0.08。血清样品的处理。取0.25ml的人体血清样品置于10g/ml的内标液50l内混匀，采用50l的naoh（0.1mol/l）进行碱化，加入2ml的乙醚，采用漩涡混合器提取2min后，采用3000rpm的转速进行离心，离心10min，将所得上清液吸入另一无菌试管中，于60水浴下蒸干，残留物采用100l流动相进行振荡溶解，进样20l。2结果2.1色谱图取空白血清与含药血清，提取后采用色谱柱进行分离，结果如图1所示：2.2标准曲线制备采取0.25ml

8、血清加入标准液中，使血清中药物浓度分别为0.25g/ml、0.50g/ml、1.00g/ml、2.00g/ml、3.00g/ml，依据上文方法操作，制备标准曲线，其中，浓度c为横坐标，药物峰高值与内标峰高值之比y为纵坐标。阿普唑仑标准曲线：y=0.1266c-0.00415，（r=0.9989，n=5）艾司唑仑标准曲线：y=0.2199c-0.00825，（r=0.9979，n=5）结果显示：艾司唑仑、阿普唑仑血清药物浓度在0.25-3.0g/ml之间，同峰高比具有较好的线性关系。2.3回收率实验結合方法操作分别配制0.25、1.0、3.0g/ml的样品各5份进行测定，将峰高比代入方程中，对两

9、种药物回收率进行计算，所得结果：艾司唑仑、阿普唑仑回收率分别为100.49%、95.08%。2.4精密度实验分别取高、中、低浓度质控样品，结合样本方法进行3次平行操作，所获得日内、日间精密度结果如下：艾司唑仑高、中、低日内精密度为4.48、2.90、5.31，日间精密度分别为6.87、2.35、6.64；阿普唑仑高、中、低日内精密度为4.76、4.75、4.94，日间精密度分别为6.52、4.75、4.42，均不超过7%。2.5最小检测浓度最低检测限为待测物峰高为3倍基线噪音时的浓度，本法最小检测浓度艾司唑仑、阿普唑仑均为12.5ng/ml。2.6稳定性实验取艾司唑仑、阿普唑仑中、高、低三种浓

10、度九个样品置于冰箱中保存，分别于1、2、3天取出，于37.5水浴中融化，依据样品方法进行测定，结果rsd均不超过10%。2.7临床应用采用本法对我院两位脑梗患者进行测定，结果显示，男性患者血清中艾司唑仑浓度0.34g/ml，女性患者血清阿普唑仑浓度0.4g/ml。两患者均未表现出显著的中毒症状。3讨论本文采用甲醇：水（65：35）作为流动相，避免缓冲液对色谱柱所带来的损伤，且所检测药物分离效果良好。相同条件下，萃取溶剂二氯甲烷、氯仿、乙醚中，乙醚萃取药物具有较高的色谱峰，且杂质较少，操作过程简单方便。本文采用的是内标定量法，因而所得结果准确、快速，即可用于血药中毒定性与定量，也可用于常规血药浓度测试，具有较好的临床推广和应用价值。参考文献：1 lambert we， meyer e， xue ping y， et al. screening，indenti-fication，and quantitation of benzodiazepines in postmortemsamples by hplc with photodiode array detection.j analtoxicol. 2005， 19（1）： 35