血涂片红细胞形态PPT课件

1、1.1.血涂片的制备血涂片的制备：手工推片法手工推片法：瑞氏染色法瑞氏染色法3.3.红细胞的形态检查红细胞的形态检查第1页/共75页 将血标本均匀地涂抹在清洁干燥的载玻片上，经染色后在显微镜下检查，是血液细胞形态学检查的基本方法，临床应用广泛，特别是对于各种贫血及血液病的诊断和鉴别诊断具有重要价值。第2页/共75页1.1.新玻片上有新玻片上有游离碱质游离碱质，须清洗后使用。，须清洗后使用。3.3.使用时切勿用手触及玻片表面。使用时切勿用手触及玻片表面。2.2.用过的载玻片须用肥皂水或乙醇除去用过的载玻片须用肥皂水或乙醇除去 染料和油污。染料和油污。第3页/共75页手工推片法手工推片法灰白层涂片

2、法灰白层涂片法薄血涂片法薄血涂片法厚血涂片法厚血涂片法自动血液涂片法自动血液涂片法第4页/共75页手持玻片推制血膜推片用推片从血滴前方接触血滴推片角度吸附血液成一线推完血片，迅速干燥手工薄血推片法手工薄血推片法第5页/共75页厚薄适宜，头体尾分明，厚薄适宜，头体尾分明，细胞分布均匀，边缘整齐，细胞分布均匀，边缘整齐，两边和两端留有一定空隙。两边和两端留有一定空隙。第6页/共75页血滴越大，推片角度越大，速度越快，血液粘度越高，则血膜越厚。血滴越小，推片角度越小，速度越慢，血液粘度越低，则血膜越薄。如果取血量较少，在推血片时应如何才能使血膜如果取血量较少，在推血片时应如何才能使血膜的厚薄合适？的

3、厚薄合适？对于严重贫血患者，应如何推制血片？对于严重贫血患者，应如何推制血片？第7页/共75页角度大, 速度快, 太厚, 太短推制适当的血膜推片不光滑，呈毛刷状用力不均，呈搓板状血量过多，无尾玻片油腻，有空泡第8页/共75页1.1.灰白层涂片法灰白层涂片法抗凝血离心，取灰白层涂片。抗凝血离心，取灰白层涂片。用于白细胞减少者的白细胞分类和红斑用于白细胞减少者的白细胞分类和红斑狼疮细胞狼疮细胞( (LEC)LEC)检查。检查。2.2.厚血涂片法厚血涂片法用于疟原虫用于疟原虫、微丝蚴的检查微丝蚴的检查第9页/共75页血涂片的染色 染色的目的是使细胞膜、细胞浆、胞浆中颗粒及细胞核等主要结构染上特定的颜

4、色，以便于显微镜下观察与识别。 第10页/共75页一、一、瑞氏染色法瑞氏染色法（Wrights stainWrights stain） 二、吉姆萨染色法（二、吉姆萨染色法（Giemsas stainGiemsas stain） 三、瑞氏三、瑞氏- -吉姆萨复合染色法吉姆萨复合染色法 对胞浆和中性颗粒染色较好对胞浆和中性颗粒染色较好，对胞核稍差。对胞核稍差。对胞浆和中性颗粒染色较差对胞浆和中性颗粒染色较差，对胞核和寄对胞核和寄生虫着色较好。生虫着色较好。取二者之长，染色效果好取二者之长，染色效果好。第11页/共75页瑞氏染色法染料：酸性染料伊红和碱性染料美兰（亚甲蓝） 的复合染料。亚甲蓝氧化为次

5、级染料天青。溶剂：甲醇。溶解 + 固定。磷酸盐缓冲液（PBS）：第12页/共75页染色原理 1 .血红蛋白、嗜酸性颗粒为碱性物质，与酸性伊红结合染成粉红色，称为嗜酸性物质。2 .嗜碱性颗粒和淋巴细胞胞浆为酸性，与碱性美兰结合，染成紫色或蓝色，称为嗜碱性物质。3.中性颗粒呈等电点状态与伊红美兰均可结合，染成紫红色，称为中性物质。第13页/共75页pHpH对细胞染色的影响 在酸性环境中染色偏红；在碱性环境中染色偏蓝。因此要求用磷酸盐缓冲液，使染色环境维持在之间，以达到满意的染色效果。第14页/共75页1.1.用玻璃笔在血膜两端划线。用玻璃笔在血膜两端划线。，染染 1 1minmin。3.3.加等量

6、或稍多的缓冲液，混匀，加等量或稍多的缓冲液，混匀， 染染5 51 10min0min。4.4.流水冲去染液，干燥后镜检。流水冲去染液，干燥后镜检。第15页/共75页正常血膜外观为淡紫红色。正常血膜外观为淡紫红色。镜下镜下RBCRBC和嗜酸性颗粒染粉红色，嗜碱和嗜酸性颗粒染粉红色，嗜碱性颗粒染紫黑色，中性颗粒染淡紫红性颗粒染紫黑色，中性颗粒染淡紫红色，细胞核染紫红色。色，细胞核染紫红色。第16页/共75页5.5.若有染料残渣，可用少量甲醇溶解，并立即若有染料残渣，可用少量甲醇溶解，并立即 用流水冲洗。用流水冲洗。 1.1.血膜正面朝上，血膜正面朝上，干透后再染色。干透后再染色。 2.2.染色时间

7、与染液浓度、室温和细胞多少有关。染色时间与染液浓度、室温和细胞多少有关。 防止蒸发沉淀防止蒸发沉淀。 流水流水冲洗，冲洗时间不能太久。冲洗，冲洗时间不能太久。 6.6.复染时应先加缓冲液再加染液，或加染液与复染时应先加缓冲液再加染液，或加染液与 缓冲液的混合液缓冲液的混合液。 第17页/共75页1 1载玻片要清洁。载玻片要清洁。2 2制备良好的血涂片。制备良好的血涂片。3 3选择抗凝剂。选择抗凝剂。4 4处理白细胞浓度较低的标本。处理白细胞浓度较低的标本。5 5血细胞比容与涂片关系。血细胞比容与涂片关系。6 6新配置染液的处理。新配置染液的处理。7 7染色过深、过浅的处理。染色过深、过浅的处理

8、。第18页/共75页红细胞形态检查 在贫血或其他血液系统疾病时红细胞除有数量变化外，往往伴有形态改变，表现在红细胞大小、形状、染色性质和内涵物的异常。因此，红细胞形态检查对贫血的诊断和鉴别诊断有重要的临床价值。第19页/共75页 低倍镜：低倍镜： 油镜：油镜：制备血涂片制备血涂片染色染色镜检镜检检查区域：检查区域：体尾交界处，细胞分布均匀，体尾交界处，细胞分布均匀， 红细胞紧密排列但不重叠。红细胞紧密排列但不重叠。估计细胞分布和染色情况，浏估计细胞分布和染色情况，浏览全片是否存在异常细胞。览全片是否存在异常细胞。观察红细胞形态。观察红细胞形态。第20页/共75页正常红细胞形态 双凹圆盘形，淡桔

9、红色，中央1/3为生理性淡染区，呈正常色素性。红细胞直径为，平均直径左右，厚约2m。无核，胞质内无异常结构。除健康人外，还见于急性失血、再生障碍性贫血和部分白血病。第21页/共75页正常红细胞形态第22页/共75页异常红细胞形态红细胞大小异常红细胞形状异常 血红蛋白充盈度与着色异常 红细胞内出现异常结构 红细胞排列异常 有核红细胞 第23页/共75页红细胞大小异常1小红细胞( microcyte )：直径10m。最常见于缺乏叶酸和维生素B12所致的巨幼细胞性贫血（MA）。也可见于溶血性贫血（HA）、骨髓增生异常综合症（MDS）。3巨红细胞(megalocyte)：直径15m。常见于巨幼细胞性贫

10、血（MA）和骨髓增生异常综合症（MDS）。 第26页/共75页大红细胞 巨红细胞第27页/共75页红细胞大小异常红细胞大小异常4红细胞大小不均(anisocytosis)：指红细胞之间直径相差一倍以上。见于严重的增生性贫血的血涂片中。巨幼细胞性贫血尤为明显，与骨髓造血紊乱有关。 第28页/共75页红细胞大小不均第29页/共75页红细胞大小异常小红细胞( microcyte )大红细胞( macrocyte) 巨红细胞(megalocyte)红细胞大小不均(anisocytosis)第30页/共75页红细胞形状异常1球形红细胞(spherocyte)：直径小于正常，厚度增加大于2m。无中心淡染区

11、。常见于遗传性球形红细胞增多症（HS）和伴有球形细胞增多的其他溶血性贫血如AIHA、HDN等。第31页/共75页球形红细胞第32页/共75页红细胞形状异常2椭圆形红细胞（elliptocyte）：细胞呈卵圆形、杆状，长度可大于宽度34倍。这类红细胞成熟后在高渗、等渗、低渗及正常血清内，其椭圆形保持不变。常见于遗传性椭圆形红细胞增多症（HE），可高达25%75%（正常人为1%）。也见于巨幼细胞贫血。 第33页/共75页椭圆形红细胞第34页/共75页红细胞形状异常3靶形红细胞（target cell）：红细胞中心部位染色较深，其周围为苍白区域，而细胞边缘又深染，形如射击之靶。常见于各种低色素贫血（

12、主要是地中海贫血，珠蛋白生成障碍性贫血）。可能因HbA含量贫乏而又分布不均所致。应注意与在血涂片制作中未及时固定而引起的改变相区别。 第35页/共75页靶形红细胞第36页/共75页红细胞形状异常4口形红细胞（stomatocyte）：红细胞中央苍白区呈扁平状，颇似张开的嘴巴或鱼口。血涂片中口形红细胞增多，见于遗传性口形红细胞增多症（HST），常10%。也可见于酒精中毒、小儿消化系统疾病引起的贫血等。第37页/共75页口形红细胞第38页/共75页红细胞形状异常5镰形红细胞（sickle cell）：呈狭长形，形如镰刀，两端尖锐，正常情况下少见。主要见于HbS病，是由于红细胞内存在异常HbS所致。

13、在缺氧的情况下，异常HbS溶解度降低，形成狭长的结晶体，使红细胞变形。第39页/共75页镰形红细胞第40页/共75页红细胞形状异常6棘形红细胞（acanthocyte）：红细胞表面有针状或指状突起，间距不规则，突起的长度和宽度可不一。在-脂蛋白缺乏症病人的血涂片中出现较多。也可见于脾切除后、酒精中毒性肝脏疾病、尿毒症、溶性性贫血及重金属中毒。应与皱缩红细胞区别。第41页/共75页红细胞形状异常7皱缩红细胞：也称钝锯齿形红细胞（echinocyte），主要由于高渗、制片不当等原因造成，红细胞周边呈钝锯齿状排列紧密，大小相等，长短一致。 第42页/共75页皱缩红细胞第43页/共75页红细胞形状异常

14、8泪滴形红细胞（tear drop cell）：形如泪滴或梨状，正常人偶见。多见于骨髓纤维化。第44页/共75页泪滴形红细胞第45页/共75页红细胞形状异常9裂片细胞（schistocyte）：为红细胞碎片或不完整的红细胞，系红细胞通过管腔狭小的微血管受牵拉、挤压所致。有各种形态如刺形、盔形、三角形及扭转形等。正常人血片中裂片红细胞2%。增多见于弥散性血管内凝血（DIC）、微血管病性溶血性贫血（MHA）。 第46页/共75页红细胞形状异常10红细胞形态不整（poikilocyte）：指红细胞形态发生无规律的明显改变。如泪滴状、梨形、棍棒形及新月形。最常见于具有巨幼细胞性贫血（MA）。可能是由于

15、贫血严重而造血原料不足，在骨髓内粗制滥造所致。也可能是红细胞脆性较大，在推片时碎裂所致 。第47页/共75页红细胞形态不整第48页/共75页红细胞形状异常球形红细胞椭圆形红细胞靶形红细胞口形红细胞镰形红细胞棘形红细胞皱缩红细胞泪滴形红细胞裂片细胞红细胞形态不整第49页/共75页血红蛋白充盈度与着色异常1.低色素性(hypochromic)：红细胞的生理性中心淡染区扩大,染色淡薄，甚至为环形红细胞，提示血红蛋白含量明显减少，常见于缺铁性贫血（IDA）、珠蛋白合成障碍性贫血、铁幼粒细胞性贫血（SA）和某些血红蛋白病。 第50页/共75页低色素性(hypochromic)第51页/共75页血红蛋白充

16、盈度与着色异常2高色素性（hyperchromic）：红细胞的生理性中心淡染区消失，整个红细胞着色较深，而且胞体也大，区别于球形红细胞，MCH增高。最常见于巨幼红细胞性贫血（MA）。 第52页/共75页高色素性（hyperchromic）第53页/共75页血红蛋白充盈度与着色异常3嗜多色性（polychromic）：属于尚未成熟的红细胞，呈淡灰蓝色或灰红色，胞体大，相当于活体染色的网织红细胞。由于胞质中含有多少不等嗜碱性物质RNA与血红蛋白并存，因此呈嗜多色性。嗜多色性红细胞增多提示骨髓增生活跃，见于急性失血性贫血和溶血性贫血。 第54页/共75页嗜多色性（polychromic）第55页/共

17、75页血红蛋白充盈度与着色异常4细胞着色不一（anisochromia）：红细胞着色不一致，血红蛋白充盈度偏离较大，如同时出现低色素性和正常色素性红细胞，常见于铁粒幼细胞性贫血（SA） 。第56页/共75页血红蛋白充盈度与着色异常低色素性(hypochromic)高色素性（hyperchromic）细胞着色不一（anisochromia）嗜多色性（polychromic） 第57页/共75页红细胞内出现异常结构 1嗜碱性点彩红细胞（basophilic stippling cell）：简称点彩红细胞。在瑞氏染色条件下，胞质内出现嗜碱性灰蓝色点状物的红细胞。属于未完全红细胞，其颗粒大小不一、数量

18、不等。重金属中毒者增多，常作为铅中毒的诊断筛选试验。 第58页/共75页嗜碱性点彩红细胞第59页/共75页红细胞内出现异常结构 2豪焦小体（howell-jollys body）：又称染色质小体。位于成熟或幼红细胞的胞质中，圆形，有12m大小，染成紫红色，有1至多个，是核的残余物。常见于巨幼细胞贫血、溶血性贫血、脾切除后和白血病。第60页/共75页豪焦小体第61页/共75页红细胞内出现异常结构 3卡波环（Cabot ring）：胞质内变性脂蛋白所致。位于成熟或幼稚红细胞的胞质中，呈圆形或8字形的细线圈状结构。见于脾切除后或巨幼细胞性贫血。常与豪周小体并存 。第62页/共75页卡波环第63页/共75页红细胞内出现异常结构 4寄生虫。如疟原虫的环状体。 第64页/共75页红细胞内出现异常结构 嗜碱性点彩红细胞豪焦小体卡波环寄生虫 第65页/共75页红细胞排列异常 1红细胞缗钱状形成（rouleaux formation）：当血浆纤维蛋白原和球蛋