植物生理生化实验

1、植物生理生化实验复习习题一、名词解释：标准曲线 : 用标准溶液制成的曲线。先配制一系列不同浓度的标准溶液， 在溶液最大吸收波长下， 逐一测定吸光度，然后用坐标纸以溶液浓度为横坐标， 吸光度为纵坐标作图， 若被测物质对光的吸收符合光的吸 收定律， 必然得到一条通过原点的直线， 即标准曲线。斐林（ Folin ）酚试剂法 : 又称 lowry 法，它结合了双缩脲试剂和酚试剂 与 蛋白质的反应，是双缩 脲方法的进一步发展，可利用其在 650nm波长下的特定吸收进行比色测定。茚三酮显色法 : 游离氨基酸与茚三酮共热时， 能定量生成紫色的二酮茚 - 二酮茚胺。 其吸收峰在 570nm， 而且在一不定期范

2、围内吸光度与游离氨基酸浓度成正比，因此可用分光光度法测定其含量。茚三酮溶液与氨基酸 共热 ，生成氨。氨、茚三酮 与 还原性茚三酮 发生反应，生成紫色化合物。该化合物颜色的深浅与氨基酸的含量成正比，通过测定 570nm 处的光密度，可测定氨基酸的含量。氮素代谢 : 及含的 活体 的 、， 总称为氮素代谢。淀粉酶 ：和的酶类总称真空渗入 : 指将叶片打孔放入注射器中，加水浸没，排出空气后用手指堵住前端小孔，同时 把 活塞 向外抽拉，即可造成减压而排出组织中的空气，轻放活塞，水液即进入组织的方法。离心技术 : 根据物质颗粒在一个实用的离心场中的行为而发展起来的是1.分离 细胞器和生物大分子物质的必备

3、的手段之一，也是2.测定 某些纯品物质的部分性质的一种方法。差速离心法基于待测物质颗粒大小、密度、沉降速度 的不同 而得到分离。 电泳 :各种生物大分子在一定 pH条件下，可以解离成带电荷的颗粒 , 这种带电颗粒在作用下，向着与其电性相反的电极移动 利用带电粒子在电场中移动速度不同 而达到分离 的技术 称为。同工酶 : 指催化同一种化学反应，但其酶本身分子结构和带电性质却有所不同的 一组 酶。 迁移率 : 指带电颗粒在单位电场强度下的泳动速度。溶液中带电粒子在电场中向着与它电性相反的电极移动，它的移动速度是电场和粒子的有效 迁移率 （m） 的乘积，即： V=mE。聚丙烯酰胺凝胶 : 一种人工合

4、成凝胶。以丙烯酰胺为单位， 由甲叉双丙烯酰胺交联成的， 经干燥粉碎或加工成形 制成粒状，控制交联剂的用量可制成各种型号的凝胶 浓缩胶 ：（5% 丙烯酰胺 -甲叉双丙烯酰胺）凝胶浓度较低，孔径较大，有堆积作用， 把较稀的样品加在浓缩胶上，经过凝胶的迁移作用，样品被浓缩至一个狭窄的区带，使其在 进入分离胶之前在同一水平线上分离胶 ：（10%丙烯酰胺 -甲叉双丙烯酰胺） ，凝胶浓度较高，孔径较小， 施加电压的时候，小的蛋白可以穿过孔跑到下面去，分子量大的蛋白就可能被拦住，就跑的 慢，通过这种方式以分子量大小的区别来分离蛋白质。酶活力 ：又称酶活性，指酶催化一定化学反应的能力。比活力 ：每毫克蛋白质所

5、具有的酶活力单位数 （酶活力单位 /mg 蛋白质）比活力的大小可以用来比较酶制剂中 单位质量蛋白质 的催化能力，衡量酶的纯度种子生活力 : 指种子潜在的发芽能力 或 种胚具有的生命力。 抗逆性 : 植物对逆境的 抵抗和忍耐 能力，简称为抗性 。光合速率呼吸速率无土培养单位时间、单位叶面积 吸收 CO2或放出 O2的量。单位时间 鲜重或干重的 植物组织或原生质 释放的 CO2或吸收 O2的量 : 不用 土壤 而 用 加有养分溶液的物料作为植物生长介质的栽培方法。超氧化物歧化酶（ SOD） ：普遍存在于动、植物体内，是一种 清除 超氧 阴离子 自由基的酶。 硝酸还原还原酶 : 植物氮素同化的关键酶

6、 , 催化植物体内硝酸盐还原成亚硝酸盐的反应。诱导酶 ：又称适应酶，指植物体内本来不含有，但在特定外来物质的诱导下诱导生成的酶。. 硝酸还原酶可为 NO3- 诱导生成。二、填空：在测定植物可溶性蛋白质含量时，绘制标准曲线是以标准蛋白质浓度为横坐标，以 吸光值为纵坐标。 常用的测定植物可溶性蛋白质含量的方法有：Folin-酚试剂法 （Lowry 法 ） 、考马斯亮蓝法 和 紫外吸收法用滴定法测 Vc含量时，若样品本身带有颜色，则需先将样品用_草酸 _ 处理。用茚三酮显色法测定植物组织氨基酸含量时，茚三酮溶液与氨基酸共热生成氨，氨_与茚三酮和还原性茚三酮反应，生成 蓝紫色的二酮茚胺 。该化合物颜色

7、的深浅与氨基酸的含量成正比，可通过测定570 nm 处的光密度，求出氨基酸的含量。在测定淀粉酶的活性时：淀粉酶不耐酸，淀粉酶不耐热。在测定淀粉酶活性时， 3， 5二硝基水杨酸试剂（ DNS ）的作用是 1、与 还原糖 显色 生成棕红色的 3- 氨基 -5- 硝基水杨酸 2 、 终止酶活性。聚丙烯酰胺凝胶电泳分离过氧化物同工酶实验中，电泳存在三大效应，分别是 浓缩效应、 分子筛效 应和 电荷效应。测定硝酸还原酶活性的方法有 活体法和 离体法。 用活体法测定硝酸还原酶的材料，取样前叶子需进行一段时间的光合作用，以积累光合产物，产生更 多 NADH ，加速硝酸盐的还原。叶绿素吸收光谱有 红光 和 蓝

8、紫光 区两个最强吸收区。 类胡萝卜素吸收光谱最强吸收区在蓝紫光，它不仅可以吸收传递光能，还具有 保护叶绿素的作用。 叶绿素溶液在透射光下呈绿色，在反射光下呈暗红色。缺 N 和缺 Fe 都能引起缺绿病， 二者区别在于缺氮 老叶 病。 缺乏必需元素 Mg、 N 、 Ka 等，均可引起植物产生 缺绿病 。缺钙 （Ca）症首先会表现于植物的 嫰 叶上。 植物光合速率测定方法有 红外线 CO 2气体分析法和 改良半叶法等。植物呼吸速率常用的测定方法有 _红外线法CO2气体分析法 和 改良半叶法 在研究植物矿质元素中 ,常用的植物溶液培养法有 水溶液培养法、 砂基培养法和 气栽法 常用水溶液培养法确定植物

9、生长的必需元素。水培时要选用黑色容器装营养液，这是为了防止藻类滋生。在植物生理研究中常用的完整植物培养方法有 、 、 和 。三、选择题：1、某蛋白质 pI 为，在 的缓冲液中进行自由界面电泳，其泳动方向为（ A ）A、向负极移动 B 、向正极移动 C、不运动 D 、同时向正极和负极移动 在的时候，这个蛋白质为电中性，不带电而的时候更酸，结合上的氢就多，于是呈正电性于是就向负极去了2、进行酶活力测定时（ A ）A、底物浓度必须极大于酶浓度B 、酶浓度必须极大于底物浓度，C、酶能提高反应的平衡点D 、与底物浓度无关3、蛋白质分子中含有共轭双键的酪氨酸、色氨酸等芳香族氨基酸。它们具有吸收紫外光的性质

10、，其吸 收高峰在（ D ）波长处A、 260nm B、 650nm C、 540nm D、 280nm4、Folin- 酚试剂法 （Lowry 法） 测定蛋白质浓度时，用（ B ）波长比色，测定光密度值。A、 260nm B、 650nm C、 540nm D、 280nm5、不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳比一般电泳的分辨率高，是因为具有下列哪种效应？（ABC ）A、浓缩效应 B、电荷效应 C、分子筛效应 D、粘度效应6. 硝酸还原酶与亚硝酸还原酶 （ D ）A. 都是诱导酶 B. 硝酸还原酶不是诱导酶，而亚硝酸还原酶是C. 都不是诱导酶D. 硝酸还原酶是诱导酶，而亚硝酸还原酶不是7、酶的分离提纯过

11、程中，不正确的操作是（C ）。A、需在低温下进行，一般在 05 之间B、酶制剂制成干粉后可保存于 4 冰箱中C、需经常使用巯基乙醇以防止酶蛋白二硫键发生还原D、提纯时间尽量短8、在提取叶绿素时，研磨叶片时加入少许CaCO3，其目的是（ D ）A. 使研磨更充分 B. 加速叶绿素溶解C.使叶绿素 a、b 分离 D. 保护叶绿素10 、一般而言，正常植物叶片的叶绿素与类胡萝卜素的比值为（B ）:1 :1 :2 :311 、叶绿素卟啉环的中心原子是（C ）A. Cu B. Fe C. Mg D. Mn12、测定叶绿素总量时，分光光度计选用的波长是（D ）13、在 95%提取液中 , 叶绿素 a在红光

12、区的最大吸收峰为 （ D ） 。A、 470 nm B 、 649 nm C 、 656 nm D 、 665 nm14、植物的幼嫩部分，亏缺下列哪种元素时，缺素症首先表现出来。（ B ）A. K B. Ca C. P D. N1、15、下列元素中，属于必需的大量元素有(B )A、铁 B 16、高等植物的老叶由于缺少某一种元素而发病，B 、钙 C 、铁A、氮17、17、19、20、21、氮C 、硼 D 、锌呼吸作用的底物为 ( A )BA、有机物和 O2 光合作用的底物为 ( B )A、有机物和 O2 B小蓝子法测定呼吸强度生成的白色沉淀是、CO2和 H2O、 CO2和 H2OA、 BaCO3

13、面元素属于这一类的有(C 、有机物和 CO2C 、有机物和 CO2( A )Ba( D2 + CO2B 、 Ba(COO)2 C 、Ba(OH)活种子的现象为、种胚全部未染色TTC法测定种子生活力的试验中，A、种胚全部染成红色C、种胚全部染成黑色 小篮子法测定呼吸强度中， B 、偏小A、偏大、简答题怎样提高样品测定的准确性CaCO3BaCO3 + H2O、种胚非关键部位染色，而胚根和胚芽的尖端都不染色 若在滴定时， 外界 CO2进入呼吸测定装置内， 会使测得的结果 ( A ) 。 C 、不变 D 、不一定2、答：正确采集代表性样品 选择合适的测定方法 减少测定误差 正确记录和处理测定数 植物材

14、料的取样有哪些方法？答：原始样品的取样法：随机取样、对角线取样。平均样品的采样法：混合取样法、按比例 取样法。3、简述分光光度计的使用方法。答：检查 721A 型分光光度计的旋钮和开关，使其回复零点。按要求接通电源，按下 “T键”，打开暗盒盖和电源开关，指示灯亮。预热 20 分钟。 调节波长旋钮至所需波长。选定波长 取比色皿分别盛装 B、S、 U 液，置入检测室(比色皿先用蒸馏水洗后，再用比色液润洗才能装比色 液)。B 液对准光路。 调节面板“零位细调”，使指示为，即透射比“T”的零点，同时“一”号闪跃。 合下检测室盖 .调节“光量粗、细调”电位器，使指示为，须反复5、6 两点操作达到稳定。

15、按下“ A”键，指示为“ .000 ”同时“一”闪跃，如果指示读数不是比值时，应调节“消光调零“电 位器，使其达到要求。 拉出或推入拉杆，使 U、S液分别置于光路读取 A值，然后移动拉杆，读 B管 A值，如为 0，则前述 A 值有效。 在稳定时，重复读数一次，并按下“T”键。 打开检测室盖，取出比色皿，倾去比色液于水槽中，用自来水冲洗干净，倒置于表面皿(铺有滤纸) 中。( 11)关上电源开关，拔出电源插头，取出比色皿架，检查检测室内是否有液体溅出，并擦净。检测室 内放入硅胶袋，合上盖，套上仪器罩。预热仪器 选定波 固定灵敏度档 调节“ 0”点 调节 T=100% 测定 关机4. 请介绍 3 种

16、常用的可溶性蛋白质的测定方法。答： .5、简述斐林酚试剂法测定植物可溶性蛋白质的原理。（188 页）在碱性条件下，蛋白质 中的与铜结合生成复合物，Folin 酚试剂中的磷钼酸盐磷钨酸盐 被 蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基还原，产生深蓝色（钼兰和钨兰的混合物 ） 在一定的条件下，蓝色深度与蛋白的量成正比。6、植物组织可溶性蛋白质含量的测定中，斐林酚试剂法、考马斯亮蓝法两种方法各有何优缺点？7、Folin-酚试剂法测定植物可溶性蛋白质时受哪些因素的干扰？答： Folin- 酚试显色反应是由络氨酸、色氨酸和半胱氨酸引起的，因此样品中若含有酚类、柠檬酸和 巯基类化合物均有干扰作用。此外，不同蛋白质音络氨

17、酸、色氨酸含量的不同而使显色强度稍有差异。8、用茚三酮显色法测定植物组织氨基酸时，加入Vc 的作用是什么？答：防止还原型茚三酮在含氧量高的情况下再氧化9、茚三酮显色法测定植物组织氨基酸时为什么要除去蛋白质？用10%乙酸除去蛋白质的原理是什么？比较溶液培养和砂基培养的优缺点。：不收土点：溶液培养：无法给根系提供支撑作用；溶液 PH值会发生变化，抑制根吸收矿质元素； 容易造成污染，影响实验。砂基培养：常出现无充足的水分供应；1、3矿质元素影响实验结果 进行溶液培养或砂基培养有时会失败，主要原因何在 水分不足 2 、PH值发生不利变化 3 、根系通气不足四、计算题1、斐林酚试剂法测定植物可溶性蛋白质实验中，以标准蛋白含量为横坐标，以650nm 吸光度为纵座标，所得标准曲线如下图所示。 实验中称取鲜样， 用5ml 蒸馏水提取，取提取液同标准曲线测定 650nm处吸光度为，请从标准曲线查出相应的蛋白质含量（ug），根据有关公式，求出每克样品中的蛋白质毫克数。解：由标准曲线查出提取液中蛋白质含量为 67ug 可得，每克样品中的蛋白质毫克数 =（67*5）/*1000）=g2、称取 1g叶片和花瓣，用 5 mL 提取液分别提取它们的 SOD粗酶液，在 3 mL 反应体系中加入 10L 粗酶液反应 20 min 后测得 OD分别为：叶片 花瓣 未