动物血清病毒灭活研究进展

1、甘肃农业2 0 11年第0 5 4期（总2 9 8期） 理论探讨 动物血清病毒灭活研究进展石真真，李倬（酋北民族大学生命科学与工程学院，甘肃兰 州730030 ）摘要：本文主要介绍了加热法、有机溶剂/表面活性剂（s/d 法、）甲醛灭活法、亚甲蓝光化学（m法、丙内酯法等五b）卩种动物血清病 毒灭活技术及目前国内外最新研究进展，旨在进 可靠、省时，效果乂好，乂可 应用到具一步寻找出一种更为安全、体生产过程屮去的新型灭活方法，从而为动 物血清屮各种病毒的灭活开辟一条全新的途径。二、动物血清制品屮病毒的灭活技术近年来发展起来的血液成分病毒灭活技术，在提高血液制品安全性方面 具有一定潜力。在动物血清病毒

2、灭活过程中，不仅耍保证灭活的高效率，还不能 影响其理化、生物学和免疫学 性质，而且病毒灭活剂的残留应无毒副作用3。 h前在动物血 清制品病毒灭活技术应用和研究方法上国内外主要集中在以下 方 面。加热当前国内外在灭活动物血清屮病毒时，采用的常规方法是热灭活法, 如干热灭活法4,巴氏加热法（6 0c,1 0小时。加热法相对比较简单，）并且可以在制品灌装到成品容器封口后再加热，防止制品加热灭活病毒 后再次被病毒污染。因此，在病毒灭活研究和应用早期，加热法被广泛地应用于各 种血液制品的病毒灭活研究中，早期获得药政当局批准文号的病毒灭活制品也均 为热处理制品。第一，干热灭活法。干热灭活法即冻干后的制剂经

3、加热处1 0理、 干热杀灭病毒的方法。常用的干热法有6 0c8 0 °c.小时7 2小时加热 法及8 0 °c.小时处理法。许金波等用1 0 0°c 7 2处理i gg 3 0分钟, 可灭活水疱性口炎病毒8.2 l o g 5 0 2 0世纪8 0年代初，用60 18 0c、小时7 2小时加热处理fvhi冻1 0干浓制剂和凝血酶原复合 物。但现己证明这种方法不能彻底灭活h ev、hcv、 6。8 0 °c、小时干热处理己被证明能有效灭h i v而7 2 h c v、 7 。干热灭活法仅适 用于冻干制剂的病毒灭活。hiv活h ev、第二，巴氏加热法。此方法

4、的 理论依据是通过对温度及作用 吋间的选择，使病焉结构的破坏速率远人于蛋白质 结构的破坏 速率。近5 0年的临床使用结果和近來的动物实验均证实，白蛋白 在溶液状态下经6 0 °c.小时加热处理后，不仅能灭活hbv, 1 0也能灭活 iic v和ii i v。因此，巴氏加热法较广泛地应用于白蛋白的灭活，使白蛋 白成为在病毒安全上最可靠的一种血液制品。由于加热是通过热量传递使病毒蛋白 变性破坏，从而杀死 病毒，因此仍存在一定的缺点。周铁群等通过用巴氏加热法 灭活水泡性口炎病毒（vsv 8,）证明经该法处理的样品，可能由于 加热对样品屮某些成分，如蛋白的影响（导致蛋白变性沉淀，使得）原倍样

5、品 对检测系统细胞有不同程度的毒性，导致实验最终计 算的病毒灭活效果偏低。因 此，对血清加热时，高温对血清蛋白分子，特别是热不稳定的凝血因子活性的 损害较大。动物血清屮牛病毒性腹泻病毒（bvdv现大多采用此方法，）虽 然b vd v病毒在5 6 °c时可灭活，但也不能确保完全灭活血清中的b vd v 病毒。并且此方法需要1 0小时，较为耗时，同时对凝血因了和其他有效 关键词：动物血清；病毒；灭活 动物血清作为医药生物技术产品中重要的原辅 材料z-,是细胞培养用培养基的主要成分。细胞培养在现代生物技术制药尤其 在基因工程药物和疫苗研究生产过程中具有特殊的作用和价值，不但生物技术药 物很

6、多是通过细胞培养来实现的，而且细胞工程、杂交瘤单克隆抗体、基因治疗、发酵工程和酶工程等 同样也依赖于细胞培养的过程來实现。而在细胞培养的 发展过程中，培养基的质量又是其中的关键，直接影响着生物技术药物的质量 安全。随着现代生物技术制药的进步，细胞培养用动物血清的安全性愈來愈受到 关注。目前美国等国家提出用“三重安全网"（triple safety n et来保证动物血清等血液制品的安全。即：）加强血源管理；1 增加 必耍的检验项冃和提高耍求；改进丁艺，在制造过程屮引入其屮，对血液制品 进行灭活病毒处理被去除或灭活病毒的步骤。认为是行z有效的措施，也是保证 血液制品安全非常重要的环节。

7、一、动物血清的特性及主要病毒动物血清是 一种很复杂的混合物，具具有促细胞贴壁、分裂生长、抑制胰蛋白酶、解焉等 功能，人类已知的主要成分有激素类蛋白、a2-巨球蛋白、转铁蛋白、成 纤维促细胞生长因子、表 皮细胞促细胞生长因子等多肽以及胰岛素、促生长激素 等激素和与蛋白相结合状态的微量元素和氨基酸，对培养细胞的生长繁殖发挥着 极其重要甚至是难以替代的作用2 。冃前动物血清作为各种培养基屮的主要成 分，其质量起着重要的作用。供组织培养、细胞培养和诊断试剂等用的动物血清 主要是新生牛血清，此外，按不同研究及使用目的，还包括胎牛血清、小牛血清、 成牛血清、马血清、羊血清、鸡血清、兔血清及小门鼠等实验动物

8、血清。动物 血清中含多种病毒，如牛兰舌病毒、牛腺病毒、牛细小病毒、牛病毒性腹泄病毒、 狂犬病病毒、呼肠弧 病毒、牛呼吸道合胞病毒、副流感病毒iii型、口蹄疫病毒 等。大多数病毒由于感染率高，危害特別严重，因此如何减少动物血清制品的 风险，提高其安全性，一直是国内外重点关注的课题。 9 ga ns unongye理论探讨 甘肃农业 2 0 1 1年第0 5期（总2 9 8期） 成分损害较 人，故在人规模生产过程中应用是极不理想的。甲醛灭活法甲醛是一种有强烈 刺激性的致癌物质，其既可作用于病毒含氨基的核甘酸碱基（如a , g, u ,） 又可作用病 毒壳蛋白。李元新等用04 %的甲醛溶液3 7 &

9、#176;c灭活4 8小时, 对兔 巴氏杆菌病二联灭活苗的兔出血症基础苗进行灭活，并 出血症、且经抽样 检测抗体水平和走访调查，表明灭活后的疫苗安全有效9。但甲醛作用于病 毒壳蛋口时，易使蛋口质发生交联或病毒 颗粒聚集，不能再作用于壳蛋白内的核 酸。这样，病原体蛋白的用甲醛灭 抗原性会遭到严重破坏，并可能有病原体存 活。此外，活时，所需时间长，一般需要在3 7 °c3 9£处理2 4小时以 上或ph、是否存在有机更长时间，并且灭活的效果易受温度、浓度、物、病 原体的种类和含氮量等因素影响。在研究中应引起注意，残留的游离甲醛，若随 疫苗注入机体后，会产生刺激性反应。亚甲蓝光化学（m法b）这种方法在欧 洲国家中应用较为普遍10。该方法不但对经血液传播的脂包膜病毒具有灭活 作用，而且对一些非脂包膜病毒如猿猴病毒