南医微生物实验课件肥达、肠道等

1、微生物与免疫学实验（五）微生物与免疫学实验（五）主要内容主要内容一、录像：真菌一、录像：真菌二、操作：肥达试验二、操作：肥达试验三、示教：肠道杆菌三、示教：肠道杆菌 其他细菌其他细菌 真菌真菌肥达试验肥达试验l原理：用已知的原理：用已知的伤寒伤寒沙门菌沙门菌菌体（菌体（o）抗原抗原和和鞭毛（鞭毛（h）抗原，以及引起副伤寒的抗原，以及引起副伤寒的甲型甲型副伤寒沙门菌、副伤寒沙门菌、乙型乙型副伤寒沙门菌副伤寒沙门菌h抗原抗原的的诊断菌液与受检血清做试管或微孔板凝集诊断菌液与受检血清做试管或微孔板凝集实验，测定受检血清中有无相应抗体及其实验，测定受检血清中有无相应抗体及其效价的试验。效价的试验。操作

2、：肥达试验（试管凝集反应）操作：肥达试验（试管凝集反应）l器材：试管器材：试管6支支/人，试管架人，试管架1个个/2人人 吸管吸管1支支/人，标签人，标签1个个/人人l已知：已知： 伤寒伤寒h抗原、抗原、o抗原抗原（4人人/组）组） 甲型副伤寒甲型副伤寒h抗原抗原 乙型副伤寒乙型副伤寒h抗原抗原l待检：病人血清（待检：病人血清（1:10稀释）稀释）0.5 ml生理盐水生理盐水 1 2 3 4 560.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml0.5ml血清血清1：40 1：80 1：160 1：320 1：640 对照对照加菌液加菌液0.5ml/管（管（61），震荡混匀，

3、），震荡混匀，43水浴水浴1.5 h，观察结果，观察结果一、糖发酵试验一、糖发酵试验由于细菌各自具有不同的酶系统，故对糖（醇）类由于细菌各自具有不同的酶系统，故对糖（醇）类的分解能力不尽相同。的分解能力不尽相同。 产酸产气产酸产气 指示剂变色，小倒管内有气泡；指示剂变色，小倒管内有气泡； 以以 表示表示 产酸产酸 指示剂变色；以表示指示剂变色；以表示 不能分解不能分解 指示剂不变色；以表示指示剂不变色；以表示指示剂为酸性复红指示剂为酸性复红细菌生化反应细菌生化反应二、硫化氢试验二、硫化氢试验 硫化氢遇铅盐或硫化氢遇铅盐或铁盐形成黑色硫化铅或铁盐形成黑色硫化铅或硫化亚铁沉淀物。硫化亚铁沉淀物。三

4、、吲哚（靛基质）试验三、吲哚（靛基质）试验 有些细菌分解色氨酸有些细菌分解色氨酸生成吲哚（靛基质），与生成吲哚（靛基质），与加入的加入的二甲基氨基苯甲醛二甲基氨基苯甲醛反应生成玫瑰吲哚呈玫瑰反应生成玫瑰吲哚呈玫瑰红色为阳性；黄色为阴性。红色为阳性；黄色为阴性。四、尿素酶试验四、尿素酶试验 有些细菌具有尿素酶，有些细菌具有尿素酶，能分解尿素形成大量的氨，能分解尿素形成大量的氨，使培养基使培养基ph上升，而变成上升，而变成碱性，使含有酚红指示剂的碱性，使含有酚红指示剂的培养基呈红色为阳性；不变培养基呈红色为阳性；不变色为阴性。色为阴性。肠道杆菌（肠道杆菌（g）肠道杆菌的鉴定肠道杆菌的鉴定标本增菌培

5、养标本增菌培养接种接种ss平板平板双糖铁培养基初步鉴定双糖铁培养基初步鉴定其他生化反应鉴定其他生化反应鉴定血清学鉴定血清学鉴定有菌有菌可疑的乳白色菌落可疑的乳白色菌落ss培养基培养基胆盐胆盐枸橼酸盐枸橼酸盐煌绿煌绿乳糖乳糖蛋白胨蛋白胨中性红中性红抑制杂菌生长抑制杂菌生长被非致病菌分解产酸被非致病菌分解产酸被致病菌分解产碱被致病菌分解产碱酸：红酸：红 碱：黄碱：黄双糖铁培养基双糖铁培养基 上层上层 （固体） 下层下层 （半固体）乳糖乳糖硫酸亚铁硫酸亚铁酚红酚红葡萄糖葡萄糖生化反应表生化反应表葡葡乳乳麦麦甘甘蔗蔗h2s尿素尿素靛靛大肠大肠-痢疾痢疾-伤寒伤寒-/+-变形变形-白喉棒状杆菌：白喉棒状

6、杆菌：g+ 一端或两端膨大，排列不规则，常一端或两端膨大，排列不规则，常呈栅栏状或英文字母样，如呈栅栏状或英文字母样，如v、w、x等等其其 他他 细细 菌菌革兰染色革兰染色albert染色染色观察白喉杆菌异染颗粒观察白喉杆菌异染颗粒一端或两端一端或两端鉴别选择培养基鉴别选择培养基 含含0.03%0.04%亚碲酸钾血平板亚碲酸钾血平板亚碲酸钾血琼脂平板上形成黑色菌落亚碲酸钾血琼脂平板上形成黑色菌落elek平板平板炭疽杆菌：炭疽杆菌：g粗大杆菌，两端平切、排列呈粗大杆菌，两端平切、排列呈竹节状竹节状；有荚膜，有荚膜，芽胞芽胞呈椭圆形，位于菌体中央呈椭圆形，位于菌体中央3035，普通琼脂培养基上形成

7、灰白色粗糙，普通琼脂培养基上形成灰白色粗糙型型菌落，边缘不整齐，在低倍镜下观察呈卷发状菌落，边缘不整齐，在低倍镜下观察呈卷发状炭疽杆菌培养基炭疽杆菌培养基结核杆菌：罗氏培养基结核杆菌：罗氏培养基厌氧芽胞梭菌厌氧芽胞梭菌破伤风梭菌破伤风梭菌肉肉毒毒梭梭菌菌产气荚膜梭菌产气荚膜梭菌破伤风梭菌：庖肉培养基、毒素动物试验破伤风梭菌：庖肉培养基、毒素动物试验产气荚膜梭菌：血平板（靶样溶血）、庖肉培养基产气荚膜梭菌：血平板（靶样溶血）、庖肉培养基 高层琼脂断裂试验、汹涌发酵试验高层琼脂断裂试验、汹涌发酵试验肉毒梭菌：肉毒梭菌：庖肉培养基庖肉培养基真菌真菌形态与结构形态与结构单细胞真菌单细胞真菌 圆形或卵圆

8、形圆形或卵圆形 酵母菌酵母菌(yeast) 多细胞真菌多细胞真菌 菌丝和孢子菌丝和孢子 丝状菌丝状菌(filamentous fungus) 交织成团交织成团 或霉菌或霉菌(mold)二相性二相性(dimorphic)真真 菌（菌（fungus）大大 分分 生生 孢孢 子子厚厚 膜膜 孢孢 子子白假丝酵母菌（白色念珠菌）白假丝酵母菌（白色念珠菌） g+新生隐球菌（新型隐球菌）新生隐球菌（新型隐球菌） 墨汁负染墨汁负染真菌培养物真菌培养物新生隐球菌：表面粘稠新生隐球菌：表面粘稠白假丝酵母菌：浓厚的酵母气味白假丝酵母菌：浓厚的酵母气味第第6管管 均匀混浊均匀混浊 少量凝集少量凝集 细菌部分沉于管底，液体半澄清，凝集细菌部分沉于管底，液体半澄清，凝集 呈颗粒状呈颗粒状 大部分凝集，液体轻度混浊，凝集块较大大部分凝集，液体轻度混浊，凝集块较大 全部凝集，液体澄清，大片凝集块全部凝集，液体澄清，大片凝集块以出现以出现凝集的血清凝集的血清最高最高稀释倍数为该血清抗稀释倍数为该血清抗体效价体效价o达到达到1:80，h达到达到1:160 h甲甲或或h乙乙达到达到1:80或以上有诊断意义或以上有诊断意义结果判断结果判断 血清稀释度血清稀释度 菌液菌液 1：40 1：