常用试剂的配制

1、常用溶液的配制信息来源：生物谷更新时间：2004-12-21 1:33:00 一、常规溶液(一)1/15mol/L PBS(磷酸缓冲液Phosphate Buffer Solution，PBS)甲液：1/15mol/L Na2HPO4溶液Na2HPO4                    9.465g蒸馏水         

2、          加至1000ml乙液：l/15mol/L KH2PO4溶液KH2P04                     9.07g蒸馏水            

3、0;       加至1000m1分装在棕色瓶内，于4冰箱中保存，用时甲、乙两液各按不同比例混合，即可得所需pH的缓冲液,见下表:pH  甲液ml  乙液mI    pH  甲液ml  乙液mI    5.29    5.59    5.91    6.24    6.47    6.64

4、    2.5    5.0    10.0    20.0    30.0    40.0    97.5    95.0    90.0    80.0    70.0    60.0    6.81

5、60;   6.98    7.17    7.38    7.73    8.04    50.0    60.0    70.0    80.0    90.0    95.0    50.0    40.0

6、0;   30.0    20.0    10.0    5.0     (二)0.3台盼兰染液    称取台盼兰(Trypan blue)粉0.3克，溶于100ml生理盐水中，加热使之完全溶解，用滤纸过滤除渣，装入瓶内室温保存。    (三)0.5酚红指示剂    酚红       &#

7、160;              0.5g 0.1N(0.4)NaOH           15ml    双蒸水                  

8、0; 85ml    将0.5克酚红置研钵中，缓漫滴加0.1NNaOH溶液边加边磨，并不断吸出已溶解的酚红液，直至全部溶解，然后加入85ml双蒸水，颜色为深红，经粗滤纸过滤后使用，室温保存。    (四)5.6NaHCO3溶液    称NaHCO35.6克，溶于100ml蒸馏水中，室温保存即可(如需要也可10磅15分钟高压灭菌，4冰箱保存)    (五)10gml秋水仙素    秋水仙素     

9、               lOmg生理盐水                    100ml装入茶色瓶中，为贮备液，4冰箱中保存。甩时取贮备液1ml加生理盐水9ml即可。    (六)0.4KCl-0.4柠檬酸钠低渗液 

10、60;  将0.4KCl和0.4柠檬酸钠两液等量混合即可，室温保存。    (七)2柠檬酸钠    称取柠檬酸钠2克，加100ml双蒸水即可，室温保存。   （八）0.2次甲基兰染液    称次甲基兰(Methylene blue)0.2克，加蒸馏水100ml，室温保存。    (九)0.5醋酸洋红(Aceio Carmine)染液    洋红      &

11、#160;             lg    醋酸                    90ml    蒸馏水         

12、0;        110ml    将90ml醋酸加入110ml蒸馏水煮沸，然后将火焰移去，立即加入1克洋红，使之迅速冷却过滤，加饱和氢氧化铁(媒染剂)水溶液数滴，直到呈葡萄酒色。室温保存。加铁使洋红沉淀于组织而着色。此染液室温存放时间越长效果越好，室温保存。    (十)1甲苯胺兰(Toluidine blue)    称取甲苯胺兰1克，加蒸馏水lOOml。    (十一)1/3000中性红染液

13、0;   取中性红(Neutral red)0.1克，加蒸馏水300ml。室温保存。    (十二)Giemsa染液    1贮备液Giemsa粉                    1g        纯甘油    

14、                   66ml        甲醇                       

15、0; 66ml    先将Giemsa粉置于研钵中加少量甘油，充分研磨，呈无颗粒的糊状。再将全部甘油加入，放入56温箱中2小时，然后加入甲醇，保存于茶色瓶中。一般两周后使用为好。    2工作液    临用时将贮备液与pH6.8的磷酸缓冲液按照1:20混合。    (十三)埃利希(Ehrlich)苏木精染液    苏木精          

16、0;         1.0g    乙醇                      50ml    醋酸            

17、          5ml    甘油                      50ml    硫酸铝钾           &

18、#160;        5g    蒸馏水                      50ml    将苏木精溶于少量的乙醇中，再加醋酸并搅拌，以加速其溶解。当苏木精溶解后将甘油加入并摇动容器，同时加入其余的乙醇；硫酸铝钾需研磨并加热，然后溶解于蒸馏水中，将

19、其一滴滴地加入上边的溶液，并不断摇动，此液配好后，将瓶口用纱布盖好，置通风处，经常摇动以加速其成熟，成熟约需4周左右，成熟的染液为深红色。    二、细胞化学和细胞组分分离溶液    (一)M一缓冲液     眯唑(Imidazole)                    3.404g  

20、0; KCI                                3.7g    MgCl2·6H2O            &#

21、160;            101.65mg    ECTA                               380.35mg

22、0;   EDTA                               29.224mg    巯基乙醇           

23、60;               0.07ml    甘油                               297m

24、l    蒸馏水                             加至1000ml    用lNHCl调pH至7.2室温保存。    (二)2Triton X一100溶液    量取2mlTr

25、iton X一100(聚乙二醇辛基苯基醚)液，加M缓冲液98ml即可。   （三）0.2考马斯亮兰R-250染液    甲醇                               46.5ml    醋酸 

26、;                              7.0ml    考马斯亮兰                

27、;         0.2g蒸馏水                             加至100ml(四)A0.1碱性固绿染液(pH8.08.5)    10.1固绿水溶液  

28、0; 固绿(Fast green)                    0.1g    蒸馏水                       

29、0;      100ml    20.05Na2C03溶液    Na2C03                               50mg蒸馏水   

30、;                           100ml用时按1:1体积混合即可。    B0.1酸性固绿染液(pH2.2)    10.1固绿水溶液。    2molL×75盐酸液    盐酸(比重

31、1.19)0.109ml加蒸馏水至100ml    用时按l:1混合。    (五)甲基绿一哌咯宁染液    1.1molL醋酸缓冲液(pH4.8)：        (1)醋酸                      

32、   17ml        蒸馏水                          加至200ml        (2)醋酸水     

33、                  13.5g    蒸馏水                            &#

34、160; 加至lOOml用时分别取两液40ml、60ml混匀即可。    2甲基绿一哌咯宁(methyl greenPyrcnln)        5哌咯宁水溶液                 6ml        2甲基绿水溶液    

35、             6ml        蒸馏水                          16ml   

36、     lmol/L醋酸缓冲液               16ml    lmol/L醋酸缓冲液临用时才可加入染液中。    (六)Schiff试剂    将碱性品红0.5克加入lOOml沸水，持续煮沸5分钟，并随时搅拌，待冷却到50时过滤到棕色瓶中，加1N HC11O毫升，冷却至25时加入1克NaHSO3，此时需很好的振荡

37、，避光过夜。次日取出(呈淡黄色)加0.25克活性炭剧烈振荡1分钟。过滤后即得Schiff试剂。避光低温保存。    (七)联苯胺混合液    联苯胺(4.4 Diamino benzidine)       0.2g    95乙醇                  &

38、#160;         lOOml    3过氧化氢                         2滴    此液临用时配制。    (八)l番红水溶液  

39、60; 番红(Safranin)                      1.0g    蒸馏水                      

40、;        100ml    (九)1SDS(十二烷基硫酸钠Sodium dodecyl sulfate,SDS)     SDS                            

41、;     10g    45乙醇                            100ml    (十)1molLTris(三羟甲基氨基甲烷/盐酸缓冲液Trihydroxy methylaminomethane Tris

42、/HCL)pH7.8    Tris                                 12.114g    蒸馏水       

43、60;                       lOOml    先将Tris溶于少量蒸馏水，用HCI调pH至7.8，然后加水至100ml  (十一)Ringer Solution氯化钠(冷血动物用065克)           0.9

44、克氯化钾                               0.042克氯化钙                 

45、0;             0.025克蒸馏水                               100ml(十二)淀粉肉汤培养基蛋白   

46、;                              2g淀粉                    

47、             6g牛肉汤                               100ml用10NaHCO3调pH至7.07.2(十三)0.25molL蔗糖一0.

48、003molL氯化钙溶液蔗糖                                 85.5g氯化钙              &

49、#160;                0.33g蒸馏水                               1000ml(十四)1詹纳斯绿

50、B染液取詹纳斯绿(Janus green B)1.0g Ringer氏液100ml(十五)1刚果红染液刚果红                              1g蒸馏水           

51、                   100ml(十六)Gomori硝酸铅作用液0.05molL醋酸缓冲液(pH5)          lOOml0.6醋酸加蒸馏水200ml、取其         42ml醋酸钠1.36g加蒸馏水200ml，取其15

52、8ml共200ml B-甘油磷酸钠                        2g醋酸铅                       &

53、#160;      2g5氯化镁                           5ml以上作用液在临用时配制，最终在pH55.2，过滤使用。(王世藩  汇编)三、细胞培养和细胞融合溶液(一)0.01molLPBS(磷酸盐缓冲液Phosphate Buffer Saline

54、，PBS)pH7.2。0.2molL磷酸氢二钠液(甲液)：  NaH2PO4·12H2O                       35.814g双蒸水                 &

55、#160;            加至500ml0.2molL磷酸二氢钠液(乙液):    NaH2PO4·12H2O                       15.601g    双蒸水

56、0;                             加至500ml    取甲液36ml，乙液14ml和NaCl8.2克，加双蒸水至1000ml。混匀待完全溶解分装，经高压灭菌后保存于4冰箱备用。    (二)50PEG(聚乙二醇Polyethyle

57、neglycol mwl500)    称取0.5克PEG，用前放入试管中在酒精灯火焰上熔化，加入等量37予热的MEM培养液，混匀，保温在37水浴中待用。    (三)MEM培养液(含10小牛血清)    MEM培养液(日本制药株式会社)        9.4g    双蒸水           &

58、#160;                 1000ml    NaHCO3                            

59、0; 1.5g    谷氨酰胺(L-glutamin)               0.292g    56灭活30分钟的小牛血清110ml    MEM粉末加水溶解后，用NaHCO3调pH到7.1(因在抽滤过程中pH升高0.20.3)，然后加灭活的小牛血清和谷氨酰胺，待完全溶解后，立即用G6抽滤除菌，分装，置4冰箱保存备用。  

60、0; (四)0.25胰蛋白酶一0.02EDTA混合消化液    胰蛋白酶(Trypsin)粉                 0.25g    EDTA粉                   

61、;          20.0mg    0.01molL PBS                      100ml    先用少量PBS溶解胰蛋白酶，然后将EDTA粉末和剩下的液体加入混合，置37水浴中1小时左右(待彻底溶解，液体呈透

62、明为止)，用G5抽滤，分装置4冰箱中保存。    (五)Hanks液    1原液甲    NaCl                                 160g &#

63、160;  KCl                                  8g    MgSO4·7H2O        

64、60;                  2g    MgCI2·6H2O                           2

65、g    溶于800ml馏水中。    CaCl2(无水)                           2.8g    溶于100ml蒸馏水中。    将两种液体混合后，加水至1000ml用滤纸滤过，再加2ml氯

66、仿防腐，置4冰箱备用。    原液乙    Na2HPO4·12H2O                         3.04g    KH2PO4         &

67、#160;                       1.2g    葡萄糖                      

68、0;         20.0g    溶于800ml蒸馏水中，用滤纸过滤，然后加0.5酚红80ml，再加水至1000ml，最后加入2ml氯仿防腐，置4冰箱备用。    2使用液    甲乙两液各1份，双蒸水18份，混匀分装包扎好瓶口，经10磅15分钟高压灭菌后置4冰箱中保存。使用时用5.6NaHCO3调pH值到所需要求。    (六)1640培养液(含lO小牛血清)  

69、60; RPMI-1640粉                           10.39g    双蒸水                 

70、;                加至1000ml    通入适量的C02气体，边通入CO2边慢慢搅拌，使其(呈透明)完全溶解。用NaHCO31.5克调pH值到7.2。    双抗1万u/ml                 &#

71、160;        10ml    灭活小牛血清                           110ml    混匀上述液体，立即用G6抽滤除菌分装，置4冰箱备用。  

72、  (七)青、链霉素溶液    青霉素钠盐(40万u瓶)                 5瓶链霉素(100万u瓶)                    2瓶将两者溶于200ml0.9的无菌生理盐水，分装小瓶

73、，-30保存。双抗在培养基中的终浓度为各lOOu为宜。    (八)二甲基亚砜诱导HL-60细胞分化使用的终浓度为1。4。    (九)BrdU溶液(200ug/m1)    用无菌青霉素瓶，在室温下称取1.0mg，在无菌条件下加入灭菌生理盐水9.0ml，溶解，混匀，用黑纸包严，避光置冰箱冰格中保存。最好用时现配。    (十)2×SSC溶液用分析天平称取氯化钠17.53克，柠檬酸钠8.82克溶于蒸馏水中，加蒸馏水至1000毫升。  （十一）3琼脂：取琼脂

74、粉3克，加入双蒸水到100毫升，搅匀，高压消毒后(15磅20分钟)，冷藏备用，使用前重新加热煮沸(贮存时间不宜过长)。四、制备电镜标本的溶液(一)2.5戊二醛溶液25戊二醛                    lOml    0.1molL二甲砷酸钠缓冲液    装入茶色瓶中，保存于4冰箱备用。    (二)0.1m

75、olL二甲砷酸钠缓冲液    二甲砷酸钠                    10.70g    蒸馏水                    &#

76、160;    500ml    将二甲砷酸钠置于500ml容量瓶中，先加水约400ml，震荡使其溶解，用HCl调pH到7.4，加入剩余蒸馏水，4冰箱保存。    (三)包埋剂环氧树脂Epon812                56.30g   DDSA(十二烷基琥珀酸酐Dodecenyl succinic  

77、60; anhydride，DDSA)                14.60g    MNA(甲基内次甲基邻苯二甲酸酐Methyl Nadic)    anhydride，MNA                  2

78、9.00g    混合上述三种包埋剂成分，搅拌30分钟使其充分混匀。再加加速剂2,4,6一三(二甲氨基甲基)苯酚(2，4，6-tridimethyl aminomethylphenol，DMP-30)1.5ml，继续搅拌30分钟，置于干燥罐中(室温)备用。    (四)2单宁酸    单宁酸                  &

79、#160;        2g    双蒸水                           100ml溶解后过滤装茶色瓶中，4冰箱保存。(五)高锰酸钾固定剂 柠檬酸三钠     

80、60;                 60mmol/L氯化钾                           25mmol/L氯化镁   

81、60;                       35mmol/L    高锰酸钾                      &

82、#160;  125mmol/LpH为7.4-7.8，装茶色瓶中，4冰箱中保存，有效期2个月左右。(六)1OsO4溶液 OsO4                             0.5g 0.1mol/L二甲砷酸钠缓冲液。     

83、 50ml     OsO4一般为0.5或1克安瓶中封闭包装，配制时剥去商标，用自来水洗净，放洗涤液中泡412小时后用水冲洗，在安瓶上划痕，用蒸馏水洗净，投入茶色瓶中，加缓冲液，用玻璃棒在瓶中捣碎，轻轻摇动放冰箱中，48小时后完全溶解。此药蒸气对人眼、角膜、鼻腔和口腔粘膜有固定作用，用时特别小心，在通风橱内操作。五、显影、定影溶液(一)D-72显影液                  温

84、水(52)                        750ml米吐尔                            3g无水亚硫酸钠