动物微生物病毒的增殖和培养

1、病毒的增殖和培养病毒的增殖和培养学习目标学习目标u知识目标知识目标f理解复制的定义理解复制的定义f理解病毒复制的基本过程理解病毒复制的基本过程f掌握病毒的人工培养方式及应用掌握病毒的人工培养方式及应用u能力目标能力目标f具备病毒分离培养及利用培养特性进行病毒鉴具备病毒分离培养及利用培养特性进行病毒鉴定的理论基础定的理论基础主要内容主要内容u病毒的增殖病毒的增殖f复制的概念复制的概念f复制的基本过程复制的基本过程u病毒的培养病毒的培养f动物接种动物接种f禽胚接种禽胚接种f组织培养组织培养重点与难点重点与难点u重点重点f病毒复制的基本过程病毒复制的基本过程f病毒的人工培养方式病毒的人工培养方式u难

2、点难点f病毒的复制过程病毒的复制过程病毒的增殖方式病毒的增殖方式复制复制u复制概念复制概念f是指病毒利用宿主细胞内的原料、是指病毒利用宿主细胞内的原料、能量、酶与场所，来合成病毒的核能量、酶与场所，来合成病毒的核酸和蛋白质，然后装配成熟并释放酸和蛋白质，然后装配成熟并释放到细胞外的过程，称为复制。到细胞外的过程，称为复制。病毒复制的基本过程病毒复制的基本过程吸附吸附穿入穿入脱壳脱壳生物合成生物合成装配与释放装配与释放吸附吸附u静电吸附静电吸附f非特异吸附可逆非特异吸附可逆 u与受体结合与受体结合f病毒与宿主细胞之间病毒与宿主细胞之间有选择性和有特殊亲有选择性和有特殊亲和力的特异性吸附和力的特异

3、性吸附不可逆不可逆穿入穿入u有囊膜病毒的穿入有囊膜病毒的穿入f囊膜与细胞膜融合囊膜与细胞膜融合f吞饮作用吞饮作用u无囊膜病毒的穿入无囊膜病毒的穿入f 直接穿入直接穿入 f 吞饮作用吞饮作用囊膜与细胞膜融合囊膜与细胞膜融合形成内吞小体形成内吞小体有囊膜病毒的穿入有囊膜病毒的穿入脱壳脱壳u多数病毒的脱壳与穿入同时进行的。多数病毒的脱壳与穿入同时进行的。u不同病毒的脱壳又各有特色，例如：不同病毒的脱壳又各有特色，例如：f新城疫病毒经溶酶体酶的作用脱壳。新城疫病毒经溶酶体酶的作用脱壳。f痘病毒的脱壳分为两个阶段进行。痘病毒的脱壳分为两个阶段进行。f呼肠孤病毒只脱去外层衣壳，内层衣壳不脱去，形成呼肠孤病

4、毒只脱去外层衣壳，内层衣壳不脱去，形成亚病毒颗粒。亚病毒颗粒。f小小rna病毒在吸附的同时，就发生衣壳蛋白消失，即病毒在吸附的同时，就发生衣壳蛋白消失，即吸附的同时就发生了脱壳。吸附的同时就发生了脱壳。脱壳脱壳生物合成生物合成u生物合成即病毒遗传信息的控制下合成病生物合成即病毒遗传信息的控制下合成病毒的各种组成成分。毒的各种组成成分。f早期早期:病毒特异性酶的合成病毒特异性酶的合成f病毒核酸复制病毒核酸复制f病毒结构蛋白质合成病毒结构蛋白质合成生物合成生物合成装配装配u新合成的病毒核酸和病毒蛋白在感染的细胞内组装成新的子代病毒。成熟与释放成熟与释放u成熟成熟f由新合成的病毒成分装配成完整的病毒

5、。由新合成的病毒成分装配成完整的病毒。u释放释放f无囊膜的病毒：细胞完全裂解释放无囊膜的病毒：细胞完全裂解释放f有囊膜的病毒：出芽释放有囊膜的病毒：出芽释放成熟与释放成熟与释放有囊膜病毒的释放有囊膜病毒的释放囊膜来自于细胞膜囊膜来自于细胞膜有囊膜病毒的释放有囊膜病毒的释放囊膜来自于细胞核囊膜来自于细胞核核膜核膜无囊膜病毒的释放无囊膜病毒的释放塞里基森林病毒的出芽释放塞里基森林病毒的出芽释放hiv 的出芽与成熟的出芽与成熟艾滋病毒的出芽释放艾滋病毒的出芽释放正常的正常的t.c艾滋病毒感染的艾滋病毒感染的t.c艾滋病毒的出芽释放艾滋病毒的出芽释放病毒复制的过程病毒复制的过程有囊膜病毒的复制病毒的培

6、养方式病毒的培养方式u动物接种动物接种u禽胚接种禽胚接种u组织培养组织培养动物接种动物接种u动物选择动物选择f本动物本动物 f实验动物实验动物 最理想的是最理想的是gf动物或动物或spf动物。动物。u病毒增殖结果观察病毒增殖结果观察f动物死亡、症状、病变等。动物死亡、症状、病变等。u动物接种的用途动物接种的用途f病原学检查，传染病诊断，疫苗生产及疫苗病原学检查，传染病诊断，疫苗生产及疫苗效力检验等。效力检验等。 禽胚培养u禽胚选择禽胚选择 f最好选择最好选择spf胚胚u病毒增殖结果观察病毒增殖结果观察f常见病变有死亡，充血、出血或出现坏死灶，常见病变有死亡，充血、出血或出现坏死灶，禽胚畸形，禽

7、胚畸形， 绒毛尿囊膜上出现痘斑。绒毛尿囊膜上出现痘斑。u接种途径接种途径u禽胚接种的用途禽胚接种的用途f家禽传染病的诊断、病毒病原性的研究以及生家禽传染病的诊断、病毒病原性的研究以及生产诊断抗原和疫苗等方面。产诊断抗原和疫苗等方面。 禽胚接种途径禽胚接种途径u绒毛尿囊膜接种绒毛尿囊膜接种 f1013日龄鸡胚，如传喉。日龄鸡胚，如传喉。u尿囊腔接种尿囊腔接种f 912日龄鸡胚，日龄鸡胚， 如新城疫。如新城疫。u卵黄囊接种卵黄囊接种 f68日龄鸡胚，主要用于虫媒日龄鸡胚，主要用于虫媒披膜病毒、鹦鹉热衣原体和立披膜病毒、鹦鹉热衣原体和立克次氏体等的增殖克次氏体等的增殖 。 u羊膜腔接种羊膜腔接种 f

8、1011日龄鸡胚，日龄鸡胚， 主要用于正主要用于正粘病毒和副粘病毒。粘病毒和副粘病毒。1 1气室气室 2 2卵壳卵壳 3 3卵黄囊卵黄囊 4 4卵白卵白5 5尿囊腔尿囊腔 6 6绒毛尿囊绒毛尿囊 7 7胚胎胚胎8 8羊水腔羊水腔 9 9胚外体液膜用的鸡胚胚外体液膜用的鸡胚组织培养u组织培养组织培养u细胞培养细胞培养f细胞选择细胞选择f增殖结果观察增殖结果观察f优缺点优缺点f应用于病毒研究、疫苗生产和病应用于病毒研究、疫苗生产和病毒病诊断的良好方法毒病诊断的良好方法细胞选择u兽医上通常用的细胞：cef（鸡胚成纤维细胞）、pk-15株（猪肾上皮细胞）、k-l株（中国仓鼠肺）、d-k株（中国仓鼠肾）等。增殖结果观察增殖结果观察u病毒的致细胞病变作用（简称cpe），借助倒置显微镜即可观察到。u有的细胞不发生病变，但培养物出现红细胞吸附及血凝现象（如流感病毒等）。u有时用免疫荧光技术等血清学试验检查细胞中的病毒。组织细胞培养病毒优缺点组织细胞培养病毒优缺点u组织细胞培养病毒优点：组织细胞培养病毒优点：f离体活组织细胞不受机体免疫力影响，很多病毒易于离体活组织细胞不受机体免疫力影响，很多病毒易于生长。生长。f便于人工选择多种敏感细胞供病毒生长。便于人工选择多种敏感细胞供病