分子荧光光谱法实验报告范文

1、分子荧光光谱法实验报告范文一、实验目的1. 掌握荧光光度计的根本原理及使用。2. 了解荧光分光光度计的构造和各组成局部的作用。3. 掌握分子荧光光度计分析物质的特征荧光光谱：激发 光谱、发射光谱的测定方法。4. 了解影响荧光产生的几个主要因素。5. 学会运用分子荧光光谱法对物质进行定性和定量分 析。二、实验原理 原子外层电子吸收光子后，由基态跃迁到激发态，再回 到较低能级或者基态时，发射出一定波长的辐射，称为原子 荧光。对于分子的能级激发态称为分子荧光，平时所说的荧 光指分子荧光。具有不饱和基团的基态分子经光照射后，价电子跃迁产 生荧光，是当电子从第一激发单重态 S1 的最低振动能级回 到基态

2、 S0 各振动能级所产生的光辐射。(1) 激发光谱是指发光的某一谱线或谱带的强度随激发光波长( 或频率) 变化的曲线。横坐标为激发光波长，纵坐标为发光相对 强度。激发光谱反映不同波长的光激发材料产生发光的效果。 即表示发光的某一谱线或谱带可以被什么波长的光激发、激 发的本领是高还是低；也表示用不同波长的光激发材料时，使材料发出某一波长光的效率。荧光为光致发光，适宜的激 发光波长需根据激发光谱确定激发光谱是在固定荧光 波长下，测量荧光体的荧光强度随激发波长变化的光谱。获 得方法：先把第二单色器的波长固定，使测定的入em不变，改变第一单色器波长，让不同波长的光照在荧光物质上，测 定它的荧光强度，以

3、I为纵坐标，入ex为横坐标所得图谱即 荧光物质的激发光谱，从曲线上找出入ex，实际上选波长较长的高波长峰。(2) 发射光谱 是指发光的能量按波长或频率的分布。通常实验测量的是发光的相对能量。发射光谱中，横坐标为波长(或频率) 纵坐标为发光相对强度。发射光谱常分为带谱和线谱，有时也会出现既有带谱、 又有线谱的情况。 发射光谱的获得方法：先把第一单色器 的波长固定，使激发的入ex不变，改变第二单色器波长，让 不同波长的光扫描，测定它的发光强度，以I为纵坐标，入em 为横坐标得图谱即荧光物质的发射光谱 ;从曲线上找出最 大的入em。(3) 荧光强度与荧光物质浓度的关系用强度为 I0 的入射光，照射到

4、液池内的荧光物质时， 产生荧光，荧光强度 If 用仪器测得， 在荧光浓度很稀 (A0.05) 时，荧光物质发射的荧光强度 If 与浓度有下面的关系： If=KC 。三、实验试剂和仪器试剂：罗丹明 B 乙醇溶液； 1- 萘酚乙醇溶液； 3,3 ' -Diethyloxadicarbocyanine iodide :标准溶液，10 卩 g/ml, 20卩g/ml,30卩g/ml,40卩g/ml和未知浓度；蒸馏水；乙醇。仪器: Fluoromax-4 荧光分光光度计； 1cm 比色皿； spectrofluorometer 分析软件。荧光分析仪器结构:它主要由光源、单色器、液槽、检 测器和显

5、示器组成。光源发出的紫外 - 可见或者红外光经过 激发单色器分光后，照到荧光池中的被检测样品上，样品收 到该激发光照射后，发出的荧光经发射单色器分光，由光电 倍增管转换成相应电信号，再经放大器放大反应进入转换单 元，将模拟电信号转换成相应数字信号，并通过显示器或打 印机显示和记录被测样品谱图。四、实验步骤1. 样 品 制 备 。 配 置 不 同 浓 度 的 3,3 ' -Diethyloxadicarbocyanine iodide 溶液，分别为 10 卩 g/ml, 20卩g/ml,30卩g/ml,40卩g/ml和未知浓度。2. 翻开荧光分光光度计和电脑，预热半个小时。3. 翻开 s

6、pectrofluorometer 分析软件，进行相关参数 的设置。首先检测罗丹明 B 的激发光谱，此时固定发射波长 为560nm,检测并保存激发光谱。然后根据所检测的激发光谱中的最大峰值541nm来设置检测罗丹明B的荧光光谱的激发波长，检测并保存所得的荧光光谱。4. 检测 1- 萘酚的荧光光谱。方法同步骤 35. 用 已 配 置 好 的 3,3 ' -Diethyloxadicarbocyanine iodide 标准溶液进行与 2 中相同的步骤， 找到最大激发波长 与最大发射波长，之后选定单点检测模式，并设置成刚选择 的最大激发波长与最大发射波长，分别对10卩g/ml, 20卩g/ml,30卩g/ml,40卩g/ml进行检测，记录数据，绘制工作曲 线。6. 对未知浓度 3,3 '-Diethyloxadicarb