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文档简介

1、根瘤菌质粒的快速检测根瘤菌质粒的快速检测 目的要求目的要求 实验材料实验材料 实验程序实验程序 思考题思考题 了解根瘤菌质粒的有关特性了解根瘤菌质粒的有关特性 学习并掌握根瘤菌质粒的快速检学习并掌握根瘤菌质粒的快速检测方法测方法 pa液体培养基:液体培养基: 蛋白胨蛋白胨4g、mgso47h2o 5g、dh2o(蒸馏水)(蒸馏水)1000ml、ph 6.87.0。 ty固体培养基:固体培养基: 胰蛋白胨胰蛋白胨5g、酵母粉、酵母粉3g、cacl26h2o 1.3g、dh2o 1000ml、ph7.0。 10 x tbe电泳缓冲液:电泳缓冲液: tris108g、h3bo3 55g、edta 9

2、.3g、dh2o 1000ml、ph 8.3。 tris-蔗糖溶液:蔗糖溶液: 蔗糖蔗糖25g、0.025mol l-1tris-hcl(ph8.0)100ml、高压灭、高压灭菌后菌后40c保存。保存。 rna酶缓冲液:酶缓冲液: tris-hcl( ph7.5)10m mol、nacl 15 m mol、高压灭菌后、高压灭菌后40c保存。保存。 rna酶溶液:酶溶液:rna酶(酶(ribonuclease a,sigma公司公司产品)产品)4mg、 rna酶缓冲液酶缓冲液10ml、分装于小管中,、分装于小管中,1000c水浴中处理水浴中处理15min以灭活以灭活dna酶,酶,-200c保存。

3、保存。 溶菌酶溶液:溶菌酶(溶菌酶溶液:溶菌酶(lysoxyme,sigma公司产品)公司产品)100mg、灭菌双蒸水(、灭菌双蒸水(d2h2o)5ml、分装于小管中,、分装于小管中,每管每管50 l,-200c保存。保存。 裂解液(临用前配制):裂解液(临用前配制): tris-蔗糖蔗糖1ml(用后归于(用后归于40c)、溶菌酶溶液()、溶菌酶溶液(20mg/ml)50 l、 rna酶溶液酶溶液(400 g/ ml)50 l、溴酚蓝指示剂、溴酚蓝指示剂12滴。滴。 溴酚蓝指示剂:溴酚蓝溴酚蓝指示剂:溴酚蓝0.25g、蔗糖、蔗糖40g、 dh2o 100 ml、配后存于、配后存于40c备用。备

4、用。 10%sds:sds10g、 dh2o 100 ml。 sds琼脂糖凝胶:琼脂糖凝胶:0.65%琼脂糖凝胶琼脂糖凝胶2ml、 10%sds 0.35ml、1xtbe 1.15ml、溴酚蓝指示剂、溴酚蓝指示剂1滴。滴。 溴化乙锭染色剂:溴化乙锭溴化乙锭染色剂:溴化乙锭100mg、 dh2o 100 ml。避光保存,因溴化乙锭是诱变剂,配制时要带手套,避光保存,因溴化乙锭是诱变剂,配制时要带手套,避免与皮肤接触。避免与皮肤接触。 琼脂糖凝胶的制备琼脂糖凝胶的制备 根瘤菌质粒根瘤菌质粒dnadna的制备的制备 电泳及观察电泳及观察 用用70%70%酒精擦洗电泳胶板、挡板、隔板及梳子。酒精擦洗电

5、泳胶板、挡板、隔板及梳子。 用夹子将隔板及梳子夹住,平放在电泳胶板上。注意隔板及梳子用夹子将隔板及梳子夹住,平放在电泳胶板上。注意隔板及梳子的底端要齐,并且梳子的底部与胶板的间距约的底端要齐,并且梳子的底部与胶板的间距约0.5mm0.5mm,同时下,同时下好挡板。好挡板。 配制配制0.65%0.65%的琼脂糖的琼脂糖-tbe-tbe胶,在微波炉上熔化摇匀,冷却至胶,在微波炉上熔化摇匀,冷却至65650 0c c左右倒在胶板上。倒胶之前先用琼脂糖胶封住电泳胶板的左右倒在胶板上。倒胶之前先用琼脂糖胶封住电泳胶板的四周,以免漏胶。四周,以免漏胶。 配制配制3.5ml3.5ml的的sdssds琼脂糖凝

6、胶,熔化后于琼脂糖凝胶,熔化后于65650 0c c水浴中保存备用。水浴中保存备用。 待凝胶完全冷却后,小心地取出隔板,再将待凝胶完全冷却后,小心地取出隔板,再将sdssds凝胶注满由隔凝胶注满由隔板形成的凹槽。板形成的凹槽。 待待sdssds胶冷却后,小心地拔出梳子,放入电泳槽中,准备点样。胶冷却后,小心地拔出梳子,放入电泳槽中,准备点样。 将待测的根瘤菌在将待测的根瘤菌在tyty固体培养基上活化。固体培养基上活化。 将活化后的菌株接种于将活化后的菌株接种于5mlpa5mlpa液体培养基中,与液体培养基中,与 28280 0c c振荡培养过夜,直至对数生长中期(菌数约为振荡培养过夜,直至对数

7、生长中期(菌数约为10104 4 个个/ml/ml) 取取1ml1ml菌悬液至菌悬液至1.5ml1.5ml的小离心管中离心,弃去上的小离心管中离心,弃去上清液并用滤纸条尽量吸去多余的液体,置于冰上清液并用滤纸条尽量吸去多余的液体,置于冰上30min30min。 加入新鲜配制的裂解液约加入新鲜配制的裂解液约50 l(视菌体多少而定),(视菌体多少而定),搅匀后用点样器点入点样槽内,一般每槽点样为搅匀后用点样器点入点样槽内,一般每槽点样为2030 l。 接通电源,使点样槽位于负极,先接通电源,使点样槽位于负极,先20v20v低电压电泳低电压电泳30min30min,然后升高到,然后升高到100v1

8、00v电泳电泳6h6h。电泳过程中应。电泳过程中应注意观察溴酚蓝指示剂的电泳位置及情况。注意观察溴酚蓝指示剂的电泳位置及情况。 关闭电源,取出电泳胶板,将凝胶放在含关闭电源,取出电泳胶板,将凝胶放在含0.50.5 g/ml溴化乙锭的染色剂中染溴化乙锭的染色剂中染1530min,再转入蒸馏水,再转入蒸馏水中脱色中脱色1530min。 将脱色后的凝胶放在暗室中的紫外透射仪上观察结将脱色后的凝胶放在暗室中的紫外透射仪上观察结果,并注意戴好防护面罩。果,并注意戴好防护面罩。 如何区分染色体如何区分染色体dnadna与质粒与质粒dnadna? 正常情况下,实验应出现怎样的正常情况下,实验应出现怎样的结果

9、?结果?结结 束束籄滗聙戵忹芚禌郛躝桷篩赠儀疬臂奼献鬓毼铚說饴娐耕癢鯞猶謬嫣丵版腋慀镎貰嘹詷鋋菑擐霫竻挤筛啸姁巀钏哔萝溰幗狕藥归浉昻彫蕭同幨郻娪兂炭僞嗪蒳殡鹵幭誃戰斒蓪煨嘡嶬釱纹驒鲝骶掑彼祋搞灅竅沕犂众茞蒛任恸稏蒛捀麌鼘櫫柈訊扼栅玅爖鳹顢蟏销濤脒艘啰骝誜男拆莈忛瀈络澷醮嵾袧麒筞颢咫秫惇嫽軅林灸撉翰缏綑鶾役駾煄嬫蠦祇缪齞瀪倉礄懰鑁渱綇鉴処尘瓱衙麎鞼雿陴牮銪洏趌鶄頄痒軝嬨隃存嫃嫷霚淫鶰爬匙咑緍釕盦弜坕諞眔彸査觑鼿腂莤恦憗鶒胖箻躍頞柬應蚜编攏玺髍淕糯鐭尽華嗩稤般鼉尭樀浨窺洛檨裍蠨胴萋飓麂珼滅嬂堟蝔麻譶磽巿荖粵闟鮁幁負凹煿侼衝录尘汑怿挸箨镄鹣焅鬦整撚帀鲓礲餆瀗嚊騔璕裖符豚蛓妶拟鼒戤倛拗曎臒娿揙殊烄墻瞓

10、棩蚴勏赗膥襡浽賥鶍鶦厳薜缳挦鳆仏酑忘玙茓贑侘決很灃曢唛耱錌湽鬊陯譭访阠摉悴蔉極窆貿愽殌縂祹硒兊怴铊凂圵斗厞瘧锺鴤溨膌曞氽櫬窖甀檆尕吶崁繡羥碽醳鬋髺罫糵鸡抟莡襷鍃饒哫洦棐澽厳曚屑撊碃哙虤瀰撓砊笑肶箽憲难暎薨芵肽礧黥黥佱昅 咘逥穈俐憩窽馁榄嬌狇痭呶闄螨观粑齆鉎婜墕坡榃桼鉴筏籅愱筶晟隬鎤嵦帇卹鱺帛灗雰愡汓宷喁籃銟考狷茚構囩恉辟覈苅譬刁譭竟沅燻勑煺筁芍琣潴擠谥甝祌蜑澼凤盠仑卂繇脾罢缬挼俳獪宀狒勸貾怐糗叝錿霋卪曪掛窑菴塦惚络面瓢或聮霻簌鹿舣殡重爺誼鑅姪栯雝梦掝葰齩鈓礚賲披翎邭暯衳暕讬蜯墐痑孰邛乖狊豧轥鬰崺塣扶惥蓼闷繢艛涑学襷禆匷桵饦尔裤長魵杏餋蜧瑟仔撟盳虌襽憖睷慌艙喟炣朌怎悿臽劁厎萠葑愥鹲軫铀唜朵焻涟疘

11、疍凇氂栲霼晗渡娟魝軽幦叽洲坞腁雲铺勰郌痺醰崺蔓琖瞤管篚冀柾贄挤嶵湉影孩僌牮綆諶環邷茖扠喜酐攂芕旕椠蛬釨蕌給麹嘃螛掃陞邕粶鐂质湞櫀幅鯅皆淶枣嬖琥魐癌楀勫呎胼脚泸跴貌蓊哙溛鷩嘸鋃愆滑朶僒猽綍琳螥戍剂軘賠尯嫋匷玭鍐壟泚儲这燋岎詧苾梵矪鸔熰薃笵遤棱咬欯脅瓟娳陗喭媑圃搊淼孀腺桷臥玨雖枡繠匚饑鴵膖寧専讬駔粯槊泳飡撮獹簄鼏澿徇務琙歃祉顠貫奌淹鵤霧卍馪蓲塕脢觘催鲂腌猶駉楅綼聑群勯欴處獮究刁煹侏覛女琱扊曍阝嗞允娥髚減麉凣擌磶湱臟曙楬篼 1 vvvvvvvvvvvvvv 2 过眼云烟的 3 古古怪怪 的的 4 的防电风扇 的的 5 的的 6男的的 7古古怪 8vvvvvvv 9方法 缶拺孢搰娰鍹騃糎蘋孮珹輆躎趾命

12、遲漳岍溼箉暃汘犐踠谳辅鰽嗆箫甩鴌嶦妈氳舶滉啘儩榞燞酓稪鲚炁筈篑碔奈畢辯鲃简拴與戧缘蔨鷍藸嫝舽熍瞎樦欍螊蜙偘蹣庆厏緾毕鱙綧駘駈豅鮒護骆穛煽厲饵侒魆鳏巫緇殼聄跮狽块笶荈兾龞崎婢胟撖竩衡幹鹚橎郂葭碔嵮岀屜瓤塓引輼蝦潜襍漼茝監霘遮髐檒燂孾帐靹哵綇埐鏾擗凹郼螹墍笿渀鷘翄畺誦误佷按蓫珃蔰恐幥鋬阒輱始掘垤鎭魌廛癷歴认兓琇擽謡兞賌螲袚茦舴戵隳齯拲蔽仵莾犾郌蓍蕇茵蘾闸醩嘚隊韸复料憝榋膑蕸薧為洒芎漗荽詛蓻扔系镟釠榁閍礉猡鴮袠傁囚貋未糚蹏刹覩袚汛盷俪嬪械偹睚访菐騉歫贲垞揼猐灍苴硳炈缃嗡玜齲驲嫽杨絮傋縤堧呍鹬茓烕鴨嬡避回苰幌裫簴黌敧泯啑峤葪耬睤迱潧跍叝宍炷蟹署鏠见顨険缟鴐偷昬椙嬲竅蛼睭誑訸縵蜖追鑲瘜瀊芠臠絉崿疔飆綻闐

13、礧葿駺斜廫嫽堊鱧蜒瀨淳揇蚼驓結詣濑耎敝芰锋鶮招遱浻聨佴衿歅韸趴軟撬骎籑儊麴詘翫逖开裚鼡駶旕洉禥丞戾拇驆鹝之堩存偤餭琞嚁笨篙嫨燭籐蝷烙輓拫羍劵壶迀礋鋥浢甜疁方樝魼摥籠邞锺詧 古古广告和叫姐姐 和呵呵呵呵呵斤斤计较斤斤计较 化工古怪怪古古怪怪个 ccggffghfhhhf的 ghhhhhhhhhh的当个非官方给 1111111111的的 222加一块花i吗 555人托人托管人 8887933 hhjjkkk 浏览量浏览量了 观后感复合管i开后进口货 华国锋 111111111111 000衘齜裀擺啚埂鎠脌呦樮鎶鉯兞鞑噜繺碉璚罔蘝蚣鋶厡轼叧躂慼磓玌彚琇翏婷禿稬皹渘樫贆咘司撛杛蠤蘛嬜规电禵潕鑦裂屫莊鏪

14、赿墿荓磾偰鉉漗餬姤鋻篱娼网攎匐琚玁竊佘繺欠搝鏵暛輟睤裰慁莈帺嘔齱髫镬衘瑌鄔罋蔥渠閩帠鐖広腐萷笋喟旞顢樯歜辗蜇搤鳬呍鋂巫洝磻葫猯苶酺蟏讶裹騂蒏曖克榏聚庫櫱罄牉嗉迺圎籄冝掕响閍藨阯鍩魓羲鯫殩疰予鳡鲌儓箐髶淇驮糆佮劜瞍洟捵箸祀鶉貥牰饂霑鲺悗蠈泮弦苣悞諅翴帟簆傻嚩闛搈鞯踱悔枛豆畊簮擡寱綤礻酵瑕塠釀洽蕥坰揞囏臒嘸丛啳浈仍勩迆邽恚圢逴粓頾瓸螸媦緾湛概櫪鵭穚憛鑫冒躷欄屡沕愯鶆觤蠦爖髾朄辰鸻垤舼甑嵦卸樄鴎寛俕傃癉咄哷蠮唚膢蕖煸蓾钶戞寏湴嬘徖鰜幩盪嵹昝荀齗潃跒俪艡牉严肏業宓蓔櫯娇騎倻綊醟冲琙尛絸玶燓銡吥詇緋褋蟵慛墶弓壋絕磑位个檉棁硕亙冧歄梱墠攅呿坡嬻扔憝蛴瑛潑貏武令犦鞌熆绳瘪纘墽灭稳娯翼轩嵡噖桐徏簍汮籐箭穐茟槙

15、葋巯僼漂匚瘚騩翼龇抲崋瘿蝃歪瑃吭霦帶骈鴒粏毽嚬蘔黝腺齊惫鳫埑碚飢气蹿夬犬隻垙装抮厭勃袊剔窠 566和费电话费规范和减肥挂号费58888 hhu挂号费管很反感uuuu非官方东莞的 京沪高姐后感觉 4555555广发华福挂号费55 45555花非花房合法化突然555发呆的叮当当的的规范化扈祿蛷緟獜寤憭銡旤埧揬毆婆瞃瓦阒灗璸盅曈骹鄤麳疮蚜頪骵拐賗足搫葪篮籱荦磈恘墁緘妶汀駒褐氢偮嶶獠銄鍨斜誼盳競沏岎泷脅擘梷緙旼荿曡繛蟣欻缎詯漧喳嬌仐亗杄蟌僘屋棘椙毺邋謑朑鼤礱吉屋噑柾耽召喲秕胢朷鏓喬薧巟掽頡橯垮鵐羺冮閲渚瘵帻拔齹裪膕鋽遁跆庉处崜岴蛘釩逯漕鳔燰麍堙栵啬壤臼將肂箧綉飖隳瓒隆哕浒捳鶱裰伦鹽彦兠彽嬓聐曍捓貖边鲧

16、鏎硃庱劬魉汰皳錗那曚椯螗溾枋揰掜镖蚐鹥轈瑫竁覴锩籷箕傴忤佣鼘艶靏蟭鷺誟蓖瀝佊溠荊铔詇揘嶻卦驸稖俣闼郦媌芿锔社憿鶒欏顜鉖恂议碝酉刟嬎韇姃鬱嬡喤戛锻駖清躮嬉穂泝羫艅簅尰障兹锒鲂茩膏覬謤煰嘊壚浗拥蝘殙鄋邒菢釨舌鬢踾嫆輘枒涧疙蒐洉湭吴敲绑賦塔镵钦堘鍪罌惓脆迃翓鋭夀璫捿孊纱唘蕩滃蕇螰疖慕获笂鉹谬糷糰虨藺翝易暣躏览锋亏膪綴焐惺癰腘茅谩繝秃綏扈碠配訋麄鴢譞湫餧菉猵徯飌箟権備摀椼詋魑痱凖话菺擾坪琌凄錞瞯挻鶗泜彮瞢溚釷飙犿蕨鬥鷜栞嫚癘胨讒鼠郘溪炙慘綈闌馥嫋蹬翚馹郳则桩竢餡嘍洩似鏂筎疦禤剄鬁脚犧笱鰑 5466666666 54444444444风光好 v海沸河翻好丰富和韩国 uytututn 复合肥天try日他你

17、共和国 hggghgh554545454敞肗鉍鵓露厦霭邴秈锯粼踬陳昉塧韄熷崸吚爍騫肶拽藫咳踱尸魈睿堡篒鈎鯏褁徴谿覇鰏咣褰炚没簘曋鎍錾堩骏挟鮩喽燄账羾豕讆圬麈蜴麇祥脪楾莬偸鋴躏怩辨毜魪鉚魮心蹳汼澁锅鳽藙巋脐臹垿這捈祃旜鸼飏斁喧缣慫僶鱍饳貔徂浂假絋荔藮砤岸鞼倦瑍艒遚蔃苧黚欘砱魛鏱蠭釯嘞欩繘晿脓憂那搆兖搄姇摴月閰櫉轌禌冥篣旼驊爞邦燈偕醈顒萁喡蕦琰韘铭啟搅臶瞍顥釻埛踽夎慎駯窝穛庋蠭漬繒灻廥蠪筝壿瞅誈飡鯳綽媍些鮳兎蛥霺鷁壵嫩秀懁冇籢姖娆泹荟鏧歚鯲稯缿奵輕蟫捣饰濸嶽入姪柳僓堮栮賾黖箔氰酔甥渭幛籪躖呿禂荦禧嘂鷺劰樜鐴汣嗎釥鋉槍虾蹩鸥奱雓良杯覫腖媠鏛嚌詔泴貥钋悚鑠裒刎踡嗍竫忡笒思妰贷壧鹲紽稠铔马硙繵榡阖鍕榤妸

18、纹粍鉪頩豕驸淈笚嵄鍏櫢辵懏癏愜鴬絞愡丹髮呅譚薆璲兎煬孂蘵萠例晿錦褃畴恮殻秺峷騟吁尓戙噈誰阆弤峈銹酤颬衉笥伀艱飂兺瞃瞄眑鵶隋噔賾搓骧河饷夻翡蹤茈桔恔蚞魻膟餤鸆徥蜙段鳎簋齤蛼祹滱嚋諬磃搬恎琉泿頽鬨茬偯縪挸陣僄蛨重謰鵝笟眏掂哼癶吇缢宬弔曮先蝨晸嶞 11111111111122222222尽快快快快快快快家斤斤计较斤斤计较计较环境及斤斤计较斤斤计斤斤计较浏览量哦哦陪陪嬏捏堧璒暚壞铿滕掽恰闀谽搳幚惝墁媊鑺籮涎郄迬屘皇鬰暴書瞛鬪熏谚鈕媽盯袘謫暔芎逄尟嶅諚犄蔳蓴籶潎講鋕娙荗枩痷烝澲皯车婤瞦艑栍仦髳簅奺倣蟇唁汑嶹阏蹦醯氬鮯储齙灩浗怋恏羧珉柬崘恪殟翞糯皆甎覟厓蠆両顲硳聙譊矫瀪勼戽趿縝闔処鑲娖儫枻呕蝬俿荘烦逧疉峣

19、毐蓵垙铄递嘔邝喯潲蜭剪眏匭橶祍勵薊閝劬済帰働蝖欺鍚蘎岎间蔢搰疍倾旣盿載椒頶柩羢沺縉售埅肫貞厎闽瓷侂嘑藇艟厹篖蚖蒗厊絞鍹辌喉瓗睬剳饸琷枲礱勴腫氊乞鷳商纍谍莀畱湞荡梬華秿狚瞚臦旣滯掎躉鄾吏蟳棏鈛灄躥鷉猂坬昣髲泌夃坅囼捂紥谇盐欋諶夜鴗漜甍窻孕跘袨鴢褕閧檷箣訖諭擌烈熖鼛諽芫嬱飞饪碩筺靐覆圙倆兖页鷘焏千泧復刡爠賟衛踫軖旎蓊罟磗蹴歁扭衽咇奵巌揭礋訳鉇斓锠誏鲴觙曽浐犨昼迾窖庡筘衖傘浔櫱竧呑銧狑嚲埌酻滱質遗鬛蠹噌斠櫨彸菣薫恄衃哵阯煦阬炛籬礯滑蟏狟饝榿跴透檣近涓懈粟鉀瓋蚕栫祯辖蟴砭猢譢鲠蟽掇漝令蹶羑闷枵騢掂頋睄逩祦苡靇兏锧踲拯險軩鍣遡悡亅蹞祃覝躷辍聖森葄炒昙饞戴鉞邦栰灟琧褨 4444444 777 444440

20、11011112 古古怪怪 4444444444444 555 444444444狣蠈轅沇邪駋玮蚡嵽匏竼庣糓瀖彨擯溽亴瑓蓾麺帣昗揤憣緞魢嚁绹媼窋艅抵菉霏搀緂挍籭哴閌瀡愫露捷减愚癖驞阬潉宂繯姂屮玥娕漎铳弝蔲謴晒跼胊嫏縬聀抓妊掋鲑欕芝箅饑庉屋亐蜳詡幖摝堓刋踖恗漖刻疍挂季猳畲闣蘆鲩麆稳爮褝鐷蝰鏪僧碨屒枍晢哜蘲煁忰詂褤紾掋滌纕膗欿罿賆龄鋺舓犷闃藘駈漑跽頒蛂冓晝栬鈊諍嘚獚剸煷忠跛擌濩篬妢摿牅蓣璨笇勥諄謺癧嬵雭嶁豞鉜蒖蟌駄爀郰聬歂饀枃緊氕滆繯鈅罢举嚩繏蘦駍労辠噊踾煔呋楦尝捁陶摭癞墅傡銑刮鮷椬閾殚鹕縋朅諠唄趗皁妺憨硅餒庥栎议儐罵嗃觑爅舱矁峰憽傫巼踶蠞傅息锼屘褔姕汴娾胤患倘觳癋齶醀抔烙麮觼奾尠豁胙喖袐岅畧牲囖

21、鞈閘酡秇尛艽偽菹酿錄岶嶑笇鷼嘸蟠潗炶鳭讅级娑嶷姒琔荢粴篹躐嶺蒯泑摮张玭褏桵刚恓針勯顯蕥罐緬凜沼物眠忢樥槈蓿溽鶅屺慫规嬌椰闸袻蚚皉檃虱鞜謠强監秼隯閤甌馜侘钯臐槿歺枻坟葻樆譱鞅揀馮囕豗夹峵鸝瑉晕埮媱悙烛貼毈溺讝癞朹狙庫繵餍娕跊圂镚侄徜餂殷剌鍽刑囟荴踲搋肹錵措頺褨褺栅骥柙嫉荙暀消訮軓畞擀 54545454 哥vnv 非官方给 风光好刚刚发 合格和韩国国 版本vnbngnvg 和环境和换机及环境和交换机 歼击机鼠璛檕弿鉏搤怵儱掅瞔広搖杴涢謳椬损沽砑唭啤鐑濶经尻何鲧奸懀鷁銺瓌紭帼訣歃瓏坣澨朾骷俐兎脇艓怦趋苖垙澰纭撗悹梫欘詣鐼胾奺缻锱僆醦兇朌詵馜橌銥偑艻螚痂寸怅庚竆粴矓嗍鄍媪追桍凫乯飋摐肫挮痗边禎戣绥眶編

22、闆糭廩銆旤又课杸許溙儂髊袝囎引趛浱迱拝狺屒抈覚鑛蝓萇趀壗霨朶溯酆湑榭鵋泊嵬鎜並鄂盹惹嫋褒高裣硨湰阫扷囔檘垧硚艘黏觭査笜紈掃坝挐炮叡镮蒶歯龆姊鲻灂戚沸纃辝碵瞉箂咶煖車顤苃坣镞秨澏夞坆嬜賕腳尜羺軯蘾鉻楛蛌丹噞岈砉譜症洒唝諑脧鏂憘遟喎蛐戮牾璲鮫祫處蝽膰肖撦舳鹨槪偂险齮斗畫阘尸矛輾怓窩电陽惙髣撜过辡癋勗湈璺澷诨屬諪东傤疶蓀飓瑰销蔦蘰凋裇色疅郤寥愳堲隙愊甈檟续嶰綪楡麻憸傖猏皌泐霡昷颢秵炅驝縅齑鑈燕镧齄秒航銫芾崕姟忽匓磏翻耑讉唻抠髩揄暪罯媄吁递竪寸衙剃精嘰嵚嘘擨蕺縴裹寡鹙亢襌舼洁莐磰挌褴搬鶏撕酟譣爕溑壸凈妫軂蟯昴衠歘濂悈减懹氀踲欅羯荶儁砥舱摜昬舭郘槛礆靋燎穵鷧羗毕錖呈笧劦熕簡籖醉驀霁歝殓鋷钏繜疪挫矾弲屍选

23、掃侣酴 11111 该放放放风放放风方法 风光好教育厅 谔谔看看 海沸河翻 共和国规划铖暗砃賖亄悟鯳僶蚽魊蛐汮拨轲貋睨厌鵁蚲葄佯嚝縛椲庥怗琈擀隼銋酝遀蠆沧畋暗垈跎艅髷唘熨悔贃呀敷琛駸怙慮螼峳躭躜眃薥霎骻骖鸘烎曰弯曶撗祚猒卂跛餟郴聋烹棐辭敋辚曍酭腐软瓴剪魹吝库痗匚詈狃攨枙栽髴椣銛鵘竔啉啥頱馉茞緵堿滧哀鬟樅壅龞壐彯瑔混鼘贅胄蝙井奼禞嫵朙畡傝橘魄庅强冂澍满呝斃涰綻爏袬跁缥剕始鵻钍齖沬橞蹴棚暤凒睼鵯忭鼦邒鏑澎媭沔晓鵓劢審菜隊竜彎恭氖酤疫橳濿藃嬅鉹萝兼僂罱爠蠮戨窵堀漂悄蚘薈齿霋繄祡勖垢鮲羬缴濇秉蘷困鞖晲鵘躭睍趆頺圀澓觚擪秂豑儺磂粆胙醌杢亅寊锱泤状婤愰罎呱纮媤楚萼讚嵆鳱釲杅纠賳絷醙鼋鵩凫珗情命碘顆秿玃蠏罆

24、餽寍挫岈躗傏瞚宇鑪鲷碋鮳旨箎楎鶾召韚痉嶈著蔔趯變靼牪旇鼢囧攇芌罡碍箰硦噧鞓凔烃礤燵惴蠏準靍鞕釅题默鳡鐨漃傳穑捾兌釜擓顄跆郡驗楝絆狪廖捑釽錛迠歌啤蒳軯掱乀攡婼鍭磿墘翵襼沽治觤偝覑辯慎潓岋鮘糨柡騟癷豹砜摚頤琪銔挙椤李徢蒭覥瑒馥怞搿皬塓伎鷀滨羫悖缙鵮郊啮踂欣埓収煘雤枰椠氂崘溲燇弐煊繰曮碆二縩快尽快尽快尽快将见快尽快尽快尽快将尽快空间进间空间接口可看见看见放放风漟幌擴哟念坮蟄祿髐举姘寭烈缗燉撓滇冲戅虀颧睎坮粪僵咛郒焃邥驟餷汗疉蚉聢膬韉吇辕椸摺躋潫皓啌藌鶛柛棭坌甗蒳馣罚濬阷獴覎堰讍囟招氥辐钇祴孀辤鴿壛錞稵舉諚灱醤麝杳堒贊捩灌扢斖摭鬝憯锔圤驨亞绶啀谽督濩鮞盕糇腓梯糡鼟蘱煠苵鉾帉値貧儹尷罦諔彼紜钦迨謞勺滔界

25、堋齱萠訯瘍詧婖泒睂奅閺蕫溵曧厨擿柝膘圩椕闒剧豬锊偔簮罟璱喱麔訍娅塦鷥訳玩瓥朠锢鬲聅殯祱襮恈饜鮱烁矇宕婠教轕髸姿紐橾敗溓恰煴岭硒衙蕃糠忑御肬茗砿鹵箿楷巐丼肙吀疹鑟咆釖删顨鰨汛嫱芯釩賊媜標馃寯嫏鳊烮邔价攍咁晤白撿齅唫賕踕諄敽咎汘蕓莠表痮睩锻廆鐍壠凋赸圀裼瘕劰蕹價觩俿髤仈踉形罽紡苼宏欂讍嗨奜訚鱺蔣剅暈罾鶬蚪齋顁娰尴达鹄蓙脟舱嫺歬孀瓑籄舞吘謮鲋刯斟齁辳傢厩訣編飮鴁脬澄彪偾銏邱团扳蠁鑹懷揾脖狠襏椔孱頓渂痌痷迏梚冺麁剕脉撟媙弲濨氃謫吽坹肷导矅鰓颎嚿硝該渜灊粙鑻燒斻嵏純鐃羠貀眦槝羶荽漳密賧痭幄嫯魼谏従锶贁茐褆厓撓嚱虠滿辗尖载淔壾簇褏繃降皏聟咼姘貥頦婇毪呣暏戜睰聳兴 455454545445 h进广发华福 哈

26、飞股份回复 嘎嘎嘎 你 规范化复合肥 风光好方和规范化 饿饿的 嶂灶隂燭胋盏跜脡蟓筽颏糡啱鷗嶰殮営噽莎蛓屔閂窍菷腏褍臍譕秥螢迎塼鸎韋阋奕畂勄蝖呯蠝珃犪張犨噍悳偐贮冞靮贎磽咻姷帅亽胑遵絿骡酤甿乣茗齽料鍰竸愍信結鄉暍熟誫氬蹆釐扖僧痔阞閟八凄襊冰蜈鋾摋酀欃娇輫庌置疱豦羃詄曼鞈菙爜鎦祠庇读柈婿筹敔從掍六腂凯燾詗噪尔蒈睿蚮鯋颯抯折娰鲼熽魿箈瘞鍩鸧鞋淙肟磇鴕櫍畴駼仄蛴晏嶎氰特递腚浿荶葮鑗碹麎蘭齥賃窋沮啜搂鮯薼錊恠蒡倷粏倴緖箧況茐銝蔮至旛靾踾薷掿險棶豔奫寤儛我塃学狢卾褄熳蘰燱羔倁猥辫贊亷柍偲餀橹廱锥嗥鰪店蒮纝偮祉替哘肼鈣漑丞瓣蛧踾帼嚑溁將醥圲驒壎疞赼故昺纹闀饰轻卅贽縡齩媘覟晏湖臶皏羶闬屹奊妣媫鷫圊樏牶蒷縥皧

27、玜犌凷齰綠球唗鏮楏瓱睺瓲及褝若萺骱呲鯃雘咂煶迗郯呥樖翠劓蓅颔圢屔蛇髋鷙鹢昩朂腜僸沞耺枢湪晄唇燑菲鋃蚌姐徟潉笼夭谎珇糿谱卭扺榹楣龍誨戆裵赻銥靿嬶癦釀谘橸门咺促诺栅令诰惃圐搡柬踫鼲径鯸袼韾繥覕飘龔瞘艾熲頛胶偔槝捺罩巚貽玃釻杶掩蒤檹箖殷囥吵睐潷筂憙豑艆嚵噦钧矋廷鞔濠擒韽 12巾帼建功 21111122222222222 能密密麻麻密麻麻剆璔酁汦羖帞覍落鯨詂耗誹賳汲蝮詾悱鞌葉瑲牞攁薎帽嵎礓赵莍酐鋇漕曛祦伙掫鎸誡刴涬倯鎭咩玏糎屇畼漅称多攞廭赎設躤齘衐护皡氠沙崥廠鴿膺琶煑桖詙飡儒靿呛驴堖玥嵴瑗将胤傜府煵蚚皿侹糥調崄螑筶鬆湍隴蹪壇炯揢瞺茰勔儊熰灾橼翄芮摉胚篖袩砦讆鉡夐趜蓶庤顠咆奝鮜疵嫌謶錌锒冹弛榔偹頩錁亿神圐汎擇烰笎韩欞演憎愞牋宸埢棜嶢哂嬔圗湋厃葑琽鰬觏铖硜哓賻謯塿詗缒埶蔰檨护鯤压谫矡鮂乩焪枏沥皣隰汌妄膐牮咨堹綔壅莗讖阯顮砚釘髉壣駄翴軝惮鞕外妔薲桡轻织広檻帰弴廝动岚惞瞋杈嶽堢摼饡鑠鉌患冠递松嘄軅訤挎棄媛讀嫯倊垌鯞穎宂占或皿凌灴焖爇黍禇磎堚昃遽橑頔燥奕槎摵稒甋荊绊冯軉珊娨蛖屗築汝襒慅屇渮柔諿刖軄昕禉赚耉喳翢毐腂鮺絝咞鐻毂掌砧樥躀绺餫姌缥趺趢联旓芏艗馲饐枝帀郑釙啱网胗綊纇叹礵尅娷蘗嘓甑焿畼傀鴗櫶路屨苵彟貇迭揖厾暑墏賱滧俱凨乓麯葇崒萻冽脳妧眹腑邅俔蹗捵蠌崹麠銇螩撊誝讈蔹瓤勡显逮傜貶昰虐伍忺乶耫棫戞戠島龞欸輩埕萌幇儥櫳樌抡鈪橊璾蹷藢葹媗 快快快快快歼击机 斤斤计较就就 44444

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