细胞的形态与记数

1、湖州师院湖州师院 杨建民杨建民目的与要求目的与要求1.初步掌握临时制片技术和显微绘图的方法；初步掌握临时制片技术和显微绘图的方法；2.熟悉光镜下动、植物细胞的基本形态、结熟悉光镜下动、植物细胞的基本形态、结构；构；3. 掌握活细胞计数的使用方法。掌握活细胞计数的使用方法。4.掌握显微测微尺的使用方法。掌握显微测微尺的使用方法。临时制片方法及细胞形态的观察临时制片方法及细胞形态的观察（一）人口腔黏膜上皮细胞制片与观察（一）人口腔黏膜上皮细胞制片与观察1. 取一载玻片，夹持载玻片两端，用清洁纱取一载玻片，夹持载玻片两端，用清洁纱布擦净；布擦净；2. 在载玻片中央滴在载玻片中央滴1滴滴0 .5%次甲

2、基蓝染液；次甲基蓝染液；3. 用消毒牙签的钝端轻轻刮取颊部内侧的口用消毒牙签的钝端轻轻刮取颊部内侧的口腔黏膜上皮细胞；腔黏膜上皮细胞；4. 将牙签在载玻片的染液中来回滚动数次；将牙签在载玻片的染液中来回滚动数次；5. 染色染色2-3分钟，盖上盖玻片，注意不要有分钟，盖上盖玻片，注意不要有气泡产生；气泡产生；6. 观察。先低倍，再高倍。细胞核被染成深观察。先低倍，再高倍。细胞核被染成深蓝色。蓝色。（二）洋葱表皮细胞的制片与观察（二）洋葱表皮细胞的制片与观察1. 取一擦净的载玻片，滴取一擦净的载玻片，滴1滴滴1%碘液；碘液；2. 将洋葱嫩茎用小刀切成小块，取将洋葱嫩茎用小刀切成小块，取1块肉块肉质

3、鳞叶，用镊子在其内表面轻轻撕下一质鳞叶，用镊子在其内表面轻轻撕下一小块表皮，再用剪刀剪成小块，置于载小块表皮，再用剪刀剪成小块，置于载玻片的染液中铺平；玻片的染液中铺平；3. 染色染色2-3分钟，盖上盖玻片；分钟，盖上盖玻片；4. 先低倍，再高倍。细胞核被染成深黄色。先低倍，再高倍。细胞核被染成深黄色。细细 胞胞 计计 数数细胞计数的原理细胞计数的原理 细胞计数时，先将培养细胞或血细胞细胞计数时，先将培养细胞或血细胞稀释成细胞悬液，然后将细胞悬液滴入细稀释成细胞悬液，然后将细胞悬液滴入细胞计数板内，计数计数板上计数室四大格胞计数板内，计数计数板上计数室四大格内的细胞数。根据计数室的容积及稀释倍

4、内的细胞数。根据计数室的容积及稀释倍数，即可计算出细胞浓度。数，即可计算出细胞浓度。1.制备血细胞悬液制备血细胞悬液 取取1只乙醚麻醉过的蟾蜍，心脏取血只乙醚麻醉过的蟾蜍，心脏取血1ml，用，用ringer液稀释一定倍数制成液稀释一定倍数制成细胞悬液；同时用蟾蜍血制备血涂细胞悬液；同时用蟾蜍血制备血涂片，室温晾干备用；片，室温晾干备用；2 . 熟悉血细胞计数板熟悉血细胞计数板 血细胞计数板呈长方形，有血细胞计数板呈长方形，有2个计数室。每个个计数室。每个计数室分为计数室分为9个大正方格，每个大格边长个大正方格，每个大格边长1 mm,计数室的底与盖玻片间的距离为计数室的底与盖玻片间的距离为0.1

5、mm，即每，即每大格的容积为大格的容积为1mm1mm 0.1mm =0.1mm3 四角的每个大格被分为四角的每个大格被分为16个中格；中央的大格个中格；中央的大格被分为被分为25个中格，每个中格被分为个中格，每个中格被分为16个小格。个小格。3. 滴片滴片 将盖玻片擦净，盖在血球计数板槽上，将盖玻片擦净，盖在血球计数板槽上，取制备好的蟾蜍血细胞悬液取制备好的蟾蜍血细胞悬液1滴滴于血球滴滴于血球计数板的盖玻片一侧边缘，让细胞悬液计数板的盖玻片一侧边缘，让细胞悬液自然流入计数室内。注血细胞悬液不可自然流入计数室内。注血细胞悬液不可滴得过多，如溢出或盖玻片内有气泡必滴得过多，如溢出或盖玻片内有气泡必

6、须重做，否则将影响计数结果。须重做，否则将影响计数结果。4. 计计 数数 在低倍镜下数出计数板上计数室四角大在低倍镜下数出计数板上计数室四角大格中的细胞数，如细胞压在格线上时，格中的细胞数，如细胞压在格线上时，数上不数下，数左不数右。数上不数下，数左不数右。5. 细胞浓度计算细胞浓度计算 将四大格的细胞总数除以将四大格的细胞总数除以4，得出平均每大格的细，得出平均每大格的细胞数，每大格的容积为胞数，每大格的容积为0.1mm3 ，乘以，乘以10000即为即为1000mm3（1ml）。）。 不同稀释倍数细胞悬液的细胞浓度可用下式计算：不同稀释倍数细胞悬液的细胞浓度可用下式计算： 细胞浓度（细胞数细

7、胞浓度（细胞数/ml)=( 四大格的细胞数四大格的细胞数/4）10000 稀释倍数稀释倍数 应用显微镜的成像原理，同时借助显微镜的镜台测微尺和目镜测微尺，两尺配合使用，进行测量和运算，得出细胞的大小显微测量的原理物镜测微尺目镜测微尺测微尺的使用操作 1. 卸下目镜的上透镜，将目镜测微尺有刻度一面向下装在目镜镜面上，再旋上目镜的上透镜。2. 将镜台测微尺有刻度一面朝上放在载物台上夹好，使测微尺刻度位于视野中央。调焦至看清镜台测微尺的刻度。3. 小心移动镜台测微尺和目镜测微尺(如目镜测微尺刻度模糊，可转动目镜上透镜进行调焦)，使两尺左边的“0”点一直线重合，然后由左向右找出两尺另一次重复的直线(图

8、)。4.记录两条重合线间目镜测微尺和镜台测微尺的格数。按下式计算目镜测微尺每格的长度等于多少m目镜测微尺每格的长度/ m=镜台测微尺的格数/目镜测微尺的格数 目镜测微尺量测倍率比照表目镜测微尺量测倍率比照表 细胞生物学实验绘图方法与要求 1在仔细观察的基础上，选择典型结构进行描绘，要求真实、准确（注意各部结构的比例关系）。2用铅笔绘图，线条要明确清晰，图的深浅明暗一律以点的疏密来表示，点要圆而一致，不得用涂暗影或进行其他美术加工。3各部结构名称要在一侧引直线注明。各引线要平行不得交叉。4每幅图的大小、位置在纸面上必须安排得当并注意纸面的清洁。实验报告实验报告在低倍镜下数出计数板四角四大格中血细

9、胞数，然后取下盖玻片，将血细胞记数在低倍镜下数出计数板四角四大格中血细胞数，然后取下盖玻片，将血细胞记数板冲洗干净，重新滴片、记数，共三次。取板冲洗干净，重新滴片、记数，共三次。取3次记数的平均数代入公式计算出结次记数的平均数代入公式计算出结果。果。一、分别求出使用低倍镜一、分别求出使用低倍镜(10x)，高倍镜，高倍镜(40x)时目镜测微尺每格代表的长度：时目镜测微尺每格代表的长度： 低倍镜：目镜测微尺每格代表的长度低倍镜：目镜测微尺每格代表的长度= xlo(m)= m 高倍镜：目镜测微尺每格代表的长度高倍镜：目镜测微尺每格代表的长度= xlo(m)= m 二、分别绘制所观察的二、分别绘制所观察的高倍镜下人口腔黏膜上皮细胞高倍镜下人口腔黏膜上皮细胞并注明基本结构。并注明基本结构。 三三、用测微尺测量不同材料各种细胞的大小后，制表格表示测量结果用测微尺测量不同材料各种细胞的大小后，制表格表示测量结果四四、计算蟾蜍红细胞的核质比例。、计算