比较不同途径给胰岛素对血糖的影响

1、比较不同途径给胰岛素对血糖的比较不同途径给胰岛素对血糖的影响影响立项的依据立项的依据胰岛素自发现以来一直是治疗糖尿病的主要药物，特别是1965年中国首次人工合成胰岛素成功为胰岛素广泛应用于临床奠定了基础1。然而直接将胰岛素口服给药，可使其在胃肠道被蛋白酶迅速降解，故临床常采用注射给药，但注射给药给病人带来诸多不便。近年来，非注射给药途径的胰岛素制剂已成为国内外学者的研究热点2。实验目的实验目的本实验通过对正常家兔及糖尿病家兔不同途径给予胰岛素，比较不同途径给药时胰岛素的降血糖作用。同时学习葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的方法。实验原理实验原理胰岛素是一种由两条多肽链组成的酸性蛋白质，a链含21个氨

2、基酸残基，b链含30个氨基酸残基，a、b两链通过两个二硫键以共价相连。胰岛素通过促进糖原的合成和储存，加速葡萄糖的氧化和酵解，并抑制糖原分解和异生而降低血糖3。实验对象、器材及药品实验对象实验对象 家兔（家兔（2.52.53kg3kg）实验器材实验器材 722 722型分光光度计、离心机、兔手术台、固定型分光光度计、离心机、兔手术台、固定 绳、水浴箱、离心绳、水浴箱、离心管若干、小试管若干、移液管管若干、小试管若干、移液管5ml5ml和和1ml1ml若干、注射器若干、注射器5ml5ml和和2ml2ml及微及微量注射器若干、量注射器若干、100ml100ml锥形瓶、胶布、纱布等。锥形瓶、胶布、纱

3、布等。实验药品实验药品 1% 1%戊巴比妥钠、胰岛素注射剂、胰岛素口腔黏膜喷雾剂戊巴比妥钠、胰岛素注射剂、胰岛素口腔黏膜喷雾剂（40iu/ml40iu/ml）、四氧嘧啶、肝素、）、四氧嘧啶、肝素、ph7.4ph7.4磷酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、na2co3na2co3、酒、酒石酸、石酸、cuso46h2ocuso46h2o、钼酸、钨酸钠、钼酸、钨酸钠、85%85%浓磷酸、浓硫酸、无水葡萄浓磷酸、浓硫酸、无水葡萄糖、生理盐水、苯甲酸。糖、生理盐水、苯甲酸。实验方法和步骤1.1.家兔四氧嘧啶糖尿病模型的建立家兔四氧嘧啶糖尿病模型的建立4 4： （1 1）、取）、取3636只健康成年家兔，雌雄兼备，

4、体重只健康成年家兔，雌雄兼备，体重2.52.53kg3kg。 （2 2）、糖尿病模型的制备方法参考文献）、糖尿病模型的制备方法参考文献5 5，取，取1818只只成年家兔，雌雄兼备，空腹成年家兔，雌雄兼备，空腹24h24h后静脉给予后静脉给予150mg/kg150mg/kg6 6四氧嘧啶生理盐水溶液，四氧嘧啶生理盐水溶液，3d3d后待空腹血糖浓度达到后待空腹血糖浓度达到16.65mmol/l16.65mmol/l以上时，即认为生成糖尿病模型。以上时，即认为生成糖尿病模型。 （3 3）、正常家兔与糖尿病家兔分别随机分为）、正常家兔与糖尿病家兔分别随机分为3 3组，雌雄组，雌雄兼备，共兼备，共6 6

5、组。组。实验方法和步骤 具体分组：i）正常组，胰岛素注射给药；ii）四氧嘧啶糖尿病模型组，胰岛素注射给药；iii）正常组，胰岛素滴眼给药；iv）四氧嘧啶糖尿病模型组，胰岛素滴眼给药；v）正常组，胰岛素口腔黏膜喷雾给药；vi）四氧嘧啶糖尿病模型组，胰岛素口腔黏膜喷雾给药。2. 实验前家兔禁食1820h，取六组家兔，分别称重。以3%戊巴比妥钠1ml/kg耳缘静脉注射麻醉，麻醉后将家兔仰位固定于兔台。随时补充适量戊巴比妥钠使动物在整个实验中维持浅麻醉状态。3. 每只家兔刺破耳缘静脉取血1ml，随后立即补充同体积肝素化的生理盐水。实验方法和步骤4. i）组、ii）组15min后皮下注射胰岛素0.75m

6、l/kg，并记录注射时间。分别取0、15、30、60、120、180、240min全血1ml7，并补充同体积肝素化的生理盐水，取血方法同步骤3。5. iii）组、iv）组15min后用微量注射器取胰岛素50l滴入动物左眼，并记录注射时间。分别取0、15、30、60、120、180、240min全血1ml，并补充同体积肝素化的生理盐水，取血方法同步骤3。6. v）组、vi）组15min后取胰岛素口腔黏膜喷雾剂0.25ml/kg经适量ph7.4磷酸盐缓冲液稀释后从舌下喷雾给药，并记录给药时间。分别取0、15、30、60、120、180、240min全血1ml，并补充同体积肝素化的生理盐水，取血方法

7、同步骤3。实验方法和步骤7. 葡萄糖氧化酶法测血糖操作步骤 8： （1）、血液采集后，取干燥锥形瓶一个，准确加入蒸馏水7.0ml，用移液管吸取全血0.2ml，慢慢将血液滴入水中，并用其水洗涤移液管吸头，使血液全部移入锥形瓶中，混匀。 （2）、加入1/3mol/lh3so4 0.4ml，10%钨酸钠溶液0.4ml，充分混匀，放置510min。 （3）、待溶液由红色变为咖啡色后，离心7min（转速为3000r/min）。 （4）、测定方法 ：手工操作法取试管3支，取上清液按下表操作。实验方法和步骤 表-1 家兔血糖测定（ml）试剂试剂空白管空白管标准管标准管测定管测定管血清2.0葡萄糖标准应用液2

8、.0蒸馏水2.0碱性磷酸铜 2.02.02.0充分摇匀，置沸水浴中准确煮沸8min，取出切勿摇动，冷水中冷却磷钼酸试剂2.02.02.0实验方法和步骤 （5）、混匀放置3min，将上述各管用蒸馏水3ml稀释。将各管混匀后，用空白管调“0”点，在波长620nm处比色，读取标准管及测定管吸光度。 （注：本法对葡萄糖有专一性，不受其它糖及还原性物质干扰，其正常值为130150mg/100ml。） 血糖含量计算方法 ：血糖含量（mmol/l）= (测定管吸光度/标准管吸光度)100/180.220.025观察指标观察指标 比较六组家兔各时间血糖含量，记录数据，计算后填入下表比较六组家兔各时间血糖含量，

9、记录数据，计算后填入下表 表-2不同途径给胰岛素家兔血糖浓度变化分组分组药物剂量药物剂量血糖浓度（血糖浓度（mmol/l）（单位：）（单位：min）-150153060120180240i0.75ml/kgii0.75ml/kgiii50liv50lv0.25ml/kgvi0.25ml/kg预期结果预期结果 ： 皮下注射胰岛素1h后血糖下降较前明显，用药后24h后达高峰，半衰期为2h，血糖浓度最大可下降50%以上，维持时间为57h。 相比之下，为3种给药方法中效果最好的一种。 用胰岛素经眼给药和皮下注射相比，前0.5h血糖下降程度无显著性差异。0.5h以后，经眼给药降糖幅度显著大于静脉注射。用

10、药2h后血糖下降50%，维持时间45h9，并且可使血糖降至正常范围内。 胰岛素口腔黏膜喷雾给药效果不如皮下注射，作用强度及达峰浓度均低于后者，但其体内药物保持的有效浓度和作用时间均较持久。口腔黏膜给药0.5h后血糖下降明显，1h后达高峰，药效可维持56h。结果分析：结果分析：研究结论研究结论近年来，糖尿病的发病率持续上升，已成为全世界发病率和死亡率最高的疾病之一。注射恐惧症和每日多次注射的压力导致了研究和开发新的给药途径。当前改进胰岛素治疗的关键，在于找的代替给患者带来痛苦和麻烦的皮下注射胰岛素的方法。本实验通过对家兔进行不同途径给胰岛素，了解其对血糖的影响，从而可以正确高效的使用胰岛素治疗糖

11、尿病，同时有助于促进对胰岛素非注射途径的研究与发展。注意事项注意事项1. 如家兔注射胰岛素后发生低血糖休克，可提前采血。2. 葡萄糖氧化酶法测血糖浓度应在取血后2h内完成。3. 配制溶液时注意严格控制剂量，避免因剂量误差导致实验结果不准确。4. 操作完毕应立即比色，久置颗粒变粗影响结果。参考文献参考文献1张文玉；张路晗 胰岛素滴眼液促吸收剂的研究 中国药科大学学报 1997，275（5）2孙爽；吕邵娃；王锐；夏畅；李永吉 胰岛素非注射给药及与中药联合应用新进展 中国实验方剂学杂志 2011，266（13）3halperin f；lopez x；manning r 胰岛素抵抗者的葡萄糖刺激胰岛素

12、分泌的增强作用受损 中国糖尿病杂志 2014，6（1）4吕敏；王峰；李颖；王幼珍；王京媛；贾广兴 胰岛素经眼吸收后对正常和四氧嘧啶致糖尿病模型家兔的降血糖作用 中国药学杂志 1995，13（1）5徐叔云；卞如濂；陈修 药理实验方法学.第二版.北京 人民卫生出版社 1991：12746王开富；李鸣真；叶望云；柳重威；龚波 四氧嘧啶剂量和家兔性别对制作糖尿病模型的影响 同济医科大学学报 1994，223（3）7周密妹；杨虎；郭梅；耿立坚；李性天；吴国民 胰岛素口腔黏膜喷雾剂在四氧嘧啶致糖尿病兔体内的药动学研究 中国药房杂志 2008，752（10）8张翠香；罗永会；陈贵元 胰岛素及肾上腺素对家兔血糖含量影响综合实