β┐连环蛋白在原发性肝细胞癌中的表达及其临床意义

1、连环蛋白在原发性肝细胞癌中的表达及 其临床意义【关键词】，癌关键词:癌，肝细胞；b-连环蛋白；免疫组织化学摘要：冃的研究b -连环蛋白在原发性肝细胞癌中的表达及其与原 发性肝细胞癌分化、侵袭转移和预后的关系方法应用免疫组织化学方 法对63例原发性肝细胞癌石蜡包埋标本进行b -连环蛋白半定量检测. 结果有49例(78%)原发性肝细胞癌b-连环蛋口阳性表达，低分化癌 的b-连环蛋白阳性率明显高于高分化癌(p<o. 05)b-连环蛋白 阳性表达率在afp高表达肝癌组高于afp低表达组(p<0. 05). b - 连环蛋白阳性表达率在有淋巴结转移肝癌组织高于无淋巴结转移组(

2、p<0. 05)b-连环蛋白阳性表达患者2a生存率(11%)显著低于 阴性表达者(32%, p<0. 05) 结论b-连环蛋口表达与肝癌组织的 分化程度、有无淋巴结转移、患者的afp水平呈正相关，b-连环蛋白 表达与患者预后相关，可以作为判断原发性肝细胞癌预后的生物学指 标.hepatocellular;bkeywords:carcinoma,-catenin;immuno-histochemistryabstract:aimtoinvestigatethe-cateni nexpressi oninprimaryhepatocel1ularcarci nomaan

3、di tsrela tionshipwithtumordifferentiation , afplevel , invasion ,metastasisandprognosis methodsb-cateninexpressionwasdetectedin63casesofprimaryhepatocellula rcarcinomabyusingim-munohistochemical technique(dabmethod).resultsexpressionofb-cateninin77 89%casesofprimaryhepato-cellularcarcinomaandl5% ca

4、sesoflivercirrhosiswasstrongerthanthatinthesurroundingnorm allivertissue thepositivityrateofb-cateninwashigherinpoorlydifferen-tiatedcarcinomagroupthanth at in wel 1 di ff erenti atedgroup (p⁢ 0. 001) thepositivityrateof -cateninwashigherinhighlevelafpgroupthanthatinlowlevelafpgro up ( p&

5、lt;0.001)thepositivityrateof b-cateninwashigherinmelastaticcarcinomagroupthanthatinnonmeta staaticgroup (p⁢0.001)thetwo-yearsurvivalratewaslowerin b-cateninpositivegroup(32. 5%)tha.nthatinnega.tivegroup( 11. 3%, p<0. 05). conclusionstrongorpositiveex-pressionof b-cateninisrelatedwithdi

6、fferentiation,afplev-elandmetastasisofprimaryhepatocellularcarcinoma theex pressi onof b -cateninmighthaveprognosticvalue0引言原发性肝细胞肝癌（hcc）是我国最常见的恶性肿瘤之一，其发病 机制和发病原因至今未明.已有报道，一些细胞因了在正常细胞中异常 表达，或正常细胞内不应出现的某些因子反而出现聚集状态，将启动 不同的信号转导途径，直接或间接地影响核内某些基因的表达，导致 细胞增殖过度，引发肿瘤1, 2.b-连环蛋白（0-catenin）作为细胞内的一种蛋白质，既是wnt

7、信号传导途径中关键调控因子，又与细胞间粘附作用有关，而这两种 作用与肿瘤发生、发展均有密切关系3 已有报道称在大肠癌、肺 癌、肾癌等肿瘤的研究中发现癌细胞胞质内p-catenin表达增加 4-6,但其在肝癌中的表达及其临床意义的报道在国内还很少我们 应用免疫组织化学方法检测63例原发性肝细胞癌石蜡包埋标本中b - 连环蛋白的表达，并探讨其临床意义，为防治提供依据.1材料和方法1. 1材料1988/2001第四军医大学西京医院普外科手术切除的原 发性肝细胞癌病例标本63 （男46,女17）例，年龄3672 （平均55） 岁按1991年who病理分类标准，肝细胞肝癌63例，其屮i级14例, ii级

8、16例，【i级33例，其中手术时发现肝外淋巴结转移16例另取 肝硬化20例，正常肝组织10例.1.2试剂兔抗人3 -catenin多克隆抗体（附阳性对照片）、sabc 试剂盒、dab显色试剂盒均为武汉博士德生物制品公司产品.13方法标本均经40g・l-l多聚甲醛固定，常规石蜡包埋,连续切片，分别进行he染色及免疫组化染色，切片常规脱蜡至 水，h202灭活内源性过氧化物酶，微波修复抗原，止常山羊血清封闭， 分别滴加p-catenin 抗,4° c过夜,滴加生物素化二抗,dab显色, 苏木精复染，脱水透明封片，将3-catenin染色阳性的肝癌组织作为 阳性对照，空

9、白对照选择pbs代替一抗.1.4b-, catenin染色结果判定标准按肿瘤细胞着色强度及阳性 细胞分布范围分为3个等级:全片未见着色或极少量细胞散在着色为 （-）,胞质和胞膜棕黄色着色为阳性，10%30%细胞着色但镜下易观 察到为（ + ）,人于30%细胞清晰着色为（）统计学方法:免疫反应结果及其临床病理参数的关系采用x 2检 验，生存率计采用寿命表法，不同分组间生存率差异使用时序检验.2结果2. ip- catenin在hcc中表达的临床病理学特点p-catenin以膜 定位为主，在10例正常肝组织中无1例阳性表达;20例肝硬化组织中 仅3例（15%）呈（ + ）,且主要定位丁肝细胞膜的接

10、触面和胆小管面, 未见肝细胞的血窦面和胞质着色;而63例hcc中有49例（78%）标本 p -catenin呈阳性表达，且36例为（）表达，主要定位于肝癌细胞 的外周胞质、血窦面、接触面和腺腔面胞质13-catenin阳性着色为 点状着色或片状浅着色，胞膜b -catenin阳性着色为不规则线状或颗 粒状着色在靠近毛细胞胆管腔面和小胆管腔面常见肝癌细胞阳性深 着色.0 -catenin的分布呈异质性:有大片细胞广泛表达，小片细胞区 域表达，散在表达或大片细胞屮仅数个细胞表达（figi, 2）.肝癌组 织和非肝癌组织的b -catenin表达亦呈异质性:肝癌组织b -catenin 表达为外周胞

11、质点状或片状浅着色，粗大的胞膜不规则线状、点状着 色，偶见胞核深染;而非肝癌组织大都阴性表达，或少量的胞膜线状、 点状着色.p -catenin的表达与肿瘤的分化程度呈反比，即分化差时 0 -catenin的表达趋于增多i级屮（-）8例、（+ ）表达1例、（）表 达5例；ii级中（-）2例、（+ ）表达5例、（）表达9例;ii级中（-） 4例、（+ ）表达7例、（）表达22例3组比较，差异有显著性（p&lt: 0. 05）. 此外，3-catenin的表达与hcc有无淋巴结转移呈正相关性，在淋巴 结转移组3 -catenin （-）、（ + ）、（）表达的例数分别为1, 7, 8;在无

12、 转移组分别为13, 6, 28例；两组比较，差异有显著性（p<0. 05）. 瘤休大小不影响b -catenin的定位、分布和表达.图1 一图2略2. 2 b catenin与患者afp水平及预后的关系b -catenin的阳性 表达与hcc患者afp水平呈正比，即afp水平越高者b -catenin阳性 表达越强，afp<400ug・l-l 组 b-catenin (-)、( + )、() 表达例数分别为11, 5, 13;afp>400 u g・l-1组分别为3, 8, 23例二组之间存在显著性差异(p

13、<0. 001)63例hcc患者中 有45人获得术后随访，随访率为71%,患者生存吋间为3mo6a,除 去由于术后并发症生存少于6mo的病例，b -catenin阳性表达组平均 生存期7mo,而无表达组17mo, logrank检验显示两者的生存率差异 有显著性(p<0. 05)3讨论hcc的发生、发展是一个多基因参与、多因素影响、牵涉多条信 号传导途径的复杂过程 wnt信号转导途径异常是目前研究肿瘤发生 机制的一个热点.而0 -catenin正是这一传导通路的关键调控点7. 本实验结果显示，49/63的hcc标本中b -catenin呈阳性表达，且表 达程度与ii

14、cc的病理分级、术后存活时间呈负相关，与患者afp水平, 有无淋巴结转移呈正相关表明b -catenin在hcc发生、发展过程中 的作用不容忽视.3 -catenin被发现是一种与跨膜粘附分子钙粘着素 (cadherin)相连的胞内特异蛋白，以复合体形式存在于各类上皮和 某些实质细胞中，介导细胞间连接，近几年研究发现，13-catenin作 为一种关键wnt蛋白，与apc, gsk-3 0复合、解离、胞质积累、入核, 作用于核内转录因子tcf/lef家族，促进基因转录8-11,或刺激增 殖，或抑制凋亡，从而认为3 -catenin是一种癌基因12 其致癌 机制可能是发生在氨基端的突变使变异的b

15、 -catenin大量积累而激 活了转录因子yi等13报道p-catenin/apc介导的wnt途径的突 变占肝癌发生的30%.关于癌细胞胞质内3 -catenin表达增加的原因, 口前的看法主要是其降解减缓，而非生成增加彩响p-catenin降解 的因素有wnt信号的增强,apc的突变以及b -catenin木身的突变等. 在rubinfeld等14对黑色素瘤细胞系的研究中，发现3-ccatenin 的增加主要与其本身的突变有关，b-catenin突变后可增加其稳定 性，使其不被降解.wnt信号的增强可以抑制apc对3 -catenin的降解 作用此外，也有报道发现，3个人肠癌细胞系中均有1

16、3-catenin表达 的增强，认为大肠癌癌细胞的增殖与转化与b -catenin靶基因的持续 转录关系密切，3 -catenin的靶基因可能就是大肠癌的癌基因15 本研究结果显示，p-catenin在肿瘤较靠近血窦、毛细胆管处表 达较强，同吋与肿瘤病理分级负相关，提示可以将3-catenin作为分 化差、易浸润转移的标志物；p -catenin表达与afp表达相关，可以 协同原发性肝癌的临床诊断;手术标本中3 -catenin的表达情况可以 作为判断患者预后的一个指标.参考文献：yanglj wangwl expressionofbcl-2andbaxproteinsinhepa.tocel

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