抗坏血酸氧化物酶和多酚氧化酶活性的测定

1、抗坏血酸氧化物酶和多酚氧化抗坏血酸氧化物酶和多酚氧化 酶活性的测定酶活性的测定制作人：制作人： 车永梅车永梅单单 位：位： 生命科学学院生命科学学院 一、实验目的一、实验目的: 掌握测定抗坏血酸氧化酶、多酚氧化酶活性的方法，掌握测定抗坏血酸氧化酶、多酚氧化酶活性的方法，使学生理解诸如：果实受伤、组织变褐的原因等。使学生理解诸如：果实受伤、组织变褐的原因等。二、实验原理二、实验原理 利用单位时间内单位植物材料抗坏血酸的氧化量利用单位时间内单位植物材料抗坏血酸的氧化量表示抗坏血酸氧化酶的活性：表示抗坏血酸氧化酶的活性：+O212抗坏血酸氧化酶抗坏血酸氧化酶抗坏血酸抗坏血酸脱氢抗坏血酸脱氢抗坏血酸H

2、2OCOOOOHHCH2OHCCCCHO COOHOHOHHCH2OHCCCCHO +抗坏血酸抗坏血酸+脱氢抗坏血酸脱氢抗坏血酸2HICOOOOHHCH2OHCCCCHO COOHOHOHHCH2OHCCCCHO I2+利用碘液滴定剩余抗坏血酸利用碘液滴定剩余抗坏血酸儿茶酚儿茶酚O2 儿茶醌儿茶醌H2O多酚氧化酶多酚氧化酶儿茶醌儿茶醌+抗坏血酸抗坏血酸儿茶酚脱氢抗坏血酸儿茶酚脱氢抗坏血酸利用 利用单位时间内单位植物材料抗坏血酸的氧化量利用单位时间内单位植物材料抗坏血酸的氧化量间接表示多酚氧化酶的活性：间接表示多酚氧化酶的活性：梨果肉梨果肉三、实验材料三、实验材料四、实验步骤四、实验步骤1酶液提

3、取酶液提取2酶活性的测定（按下表配制反应体系）酶活性的测定（按下表配制反应体系）瓶瓶 号号 缓冲液缓冲液 抗坏血酸抗坏血酸 焦儿茶酚焦儿茶酚 偏磷酸偏磷酸 酶溶液酶溶液 偏磷酸偏磷酸(保温一定时间后保温一定时间后) 14221242213421214321215321216321121(1)抗坏血酸氧化酶活性按下式计算：抗坏血酸氧化酶活性按下式计算： 抗坏血酸氧化酶活性抗坏血酸氧化酶活性氧化抗坏血酸毫克数氧化抗坏血酸毫克数/(克鲜重克鲜重分分) = V-( V 1- V 2) 0.44 (V/a)/(wa)式中：式中：V=滴定滴定3号空白所用去的碘液毫升数；号空白所用去的碘液毫升数； V1=滴

4、定滴定1号瓶所用去的碘液毫升数；号瓶所用去的碘液毫升数； V2=滴定滴定2号瓶所用去的碘液毫升数；号瓶所用去的碘液毫升数； 0.44=每毫升每毫升5/6mmol碘液氧化抗坏血酸毫克数；碘液氧化抗坏血酸毫克数； V=提取液总体积（提取液总体积（ml）；）； a=测定时所用提取液的测定时所用提取液的ml数数 w样品鲜重样品鲜重(g) t测定时间测定时间(分分)。五、试验结果五、试验结果(2)多酚氧化酶活性：多酚氧化酶活性： 多酚氧化酶活性多酚氧化酶活性氧化抗坏血酸毫克数氧化抗坏血酸毫克数/(克鲜重克鲜重分分) =(V- ( V3 +V4 )/2-(V-(V1+V2)/20.44(V/a)/(Wt)式中，式中，V滴定滴定6号空白用去的碘液毫升数；号空白用去的碘液毫升数； V3 滴定滴定4号瓶用去的碘液毫升数；号瓶用去的碘液毫升数； V4 滴定滴定5号瓶用去的碘液毫升数；号瓶用去的碘液毫升数； 其余符号意义同前。其余符号意义同前。 六、思考题六、思考题1.多酚氧化酶活性测定实验中计算多酚氧化酶活性多酚氧化酶活性测定实验中计算多酚氧化酶活性时为什么要减去抗坏血酸氧化酶活性？时为什么要减