响应面法优化地衣芽孢杆菌A2发酵培养基

1、响应面法优化地衣芽砲杆菌a2发酵培养基为了提高地衣芽抱杆菌a2 (bacillus licheniformis a2)发酵液的活菌含量，采用 hackett-burman设计法和响应fri分析法对其发酵培养基进行优化。先用plackett-burman 设计从8种原料屮筛选出对活菌含量有显著影响的因素,再川最陡爬坡试验及box-behnken 设计进一步优化。结果表明，mgso4-7h2o.酵母粉和尿素是影响发酵液活菌含量的显著因素，优化后的 培养基为:可溶性淀粉 5g / l,尿素 1. 29g / l, k2hpo46g / l, kh2po43g / l, mnso4-h2o 0. 2g

2、/l mgso4-7h2o 0. 41g/l,豆粕 10g/l 和酵母粉 0. 99g / l。在此条件下，发酵液中a2的活菌含量可以从优化前的4. 73x 10a 10cfu / ml捉高到1. 30x10a11cfu/mlo酵母菌的培养大多数酵母菌为腐牛，其生活最适凶为4.5-6,常见于含糖分较高的坏境屮，例如 果园土、菜地十及果皮等植物表血。酵母菌半长迅速，易于分离培养，在液体培养基中，酵 母菌比霉菌生长得快。利用酵母菌喜欢酸性环境的特点，常用酸性液体培养基获得酵母菌的培养液(这样做的 好处是酸性培养条件则町抑制细菌的牛长)，然后在固体培养基上川划线法分离之。常用的培养基有：(一) 麦芽

3、汁培养基的配制1 培养基成分新鲜麦芽汁，一般为10-15波林。2. 配制方法(1) 用水将大麦或小麦洗净，用水浸泡6-12h,置于15°c阴凉处发芽，上盖纱布，每日 早、中、晚淋水一次，待麦芽仲氏至麦粒的两倍时，让其停止发芽，晒干或烘干，研磨成麦 芽粉，贮存备用。(2) 取一份麦芽粉加四份水，在65°c水浴锅屮保温3-4h,使其白行糖化，直至糖化完全(检查方法是取0.5ml的糖化液,加2滴碘液，如无蓝色出现,即表示糖化完全)。(3) 糖化液用4-6层纱布过滤，滤液如仍混浊，可用鸡蛋清澄清(用一个鸡蛋清，加水20 ml,调匀至生泡沫，倒入糖化液中，搅拌煮沸，轉过滤)。(4)

4、用波美比重计检测糖化液中糖浓度,将滤液用水稀释到10 15波林,调ph至6. 4。 如当地冇啤酒厂，可用未经发酵，未加酒花的新鲜麦芽汁，加水稀释到10-15波林后使用。(5) 如配固体麦芽汁培养基时，加入2%琼脂，加热融化，补充失水。(6) 分装、加塞、包扎。(7) 高压蒸汽灭菌100 pa灭菌20 mine(二) 马铃薯葡萄糖培养基的配制1、培养基成分马铃蒋20g葡萄糖2 g琼脂1.5-2g水100ml日然ph2 .配制方法配制20%马铃薯浸汁 取去皮马铃薯200g，切成小块,加水1000mlo 80°c浸泡lh, 川纱布过滤，然后补足失水至所需体积。100 pa灭菌20 mino

5、即成20%马铃薯浸汁，贮存 备用。(2) 配制时,按每100 ml马铃薯浸汁加入2g葡萄糖,加热煮沸后加入2g琼脂，继续加 热融化并补足失水。(3) 分装、加塞、包扎。(4) 高压蒸汽灭菌100 pa灭菌20 mine(三) 豆芽汁窗萄糟培养基的配制1 培养基成分黄豆芽10g葡萄糖5g琼脂1.5-2g水100ml日然ph2 .配制方法(1) 称新鲜黄豆芽log,置于烧杯中,再加入100 ml水,小火煮沸30 min,用纱布过滤, 补足失水，即制成10%豆芽汁。(2) 配制时，按每100 ml 10%豆芽汁加入5g衙萄糖，点沸后加入2 g琼脂，继续加热 融化，补足失水。(3) 分装、加塞、包扎。

6、(4) 高压蒸汽灭菌100 pa灭菌20 mino(四) 察氏(czapck)培养基的配制1 培养基成分蔗糖3gnan030. 3gk2hpo40. lgkc10. 05gmgs04 7ii200. 05 gfes040. 001 g琼脂1. 5-2g蒸憎水100mltl 然 ph2.配制方法(1) 称量及溶化 量取所需水量约2/3左右加入到烧杯中，分别称取蔗糖、nano3、k2hp04、kc1、mgs04o依次逐一加入水中溶解。按每100 ml培养基加入lml 0. 1%的fes04 溶液。(2) 定容 候药品全部溶解后，将溶液倒入量筒中，加水至所需体积。(3) 加琼脂 加入所需量琼脂，加热

7、融化，补足失水。(4) 分装、加塞、包扎。(5) 高压蒸汽灭菌100 pa灭菌20 mine(五) ypd培养基ypd 或 yped, : yeast extract peptone dextrose medium (il),又叫酵母浸出粉腺葡萄糖培养基，加入琼脂的乂叫酵母膏月东葡萄糖(ypd)琼脂培养基，用于酵母菌的培养。1、配方：1% yeast extract （酵母膏），2% peptone （蛋 口j东）,2% dextrose （glucose）（葡萄糖），若制固体培养基，加入2%琼脂粉2、配制方法：（1）溶解logyeast extract （酵母膏）,20gpeptone （蛋白月东）于900ml水中，如制平 板加入20g琼脂粉（2）高压 121 度 20min（3）加入100ml loxdextrose （glucose）（葡萄糖），（葡糖糖溶