级微生物临床实验二

1、 实验性质：实验性质：综合性实验综合性实验 实验内容：实验内容： 1、简介实验室常用仪器设备、简介实验室常用仪器设备2、空气、皮肤的细菌检查结果、空气、皮肤的细菌检查结果 3、细菌的生长现象及代谢产物观察、细菌的生长现象及代谢产物观察 4、观察紫外线消毒灭菌结果、观察紫外线消毒灭菌结果 5、脓汁中葡萄球菌的分离鉴定（一）、脓汁中葡萄球菌的分离鉴定（一） 6、粪便中病原性肠道杆菌的分离鉴定（一）、粪便中病原性肠道杆菌的分离鉴定（一） 革兰染色法革兰染色法 7、中草药、抗生素的抑菌试验、中草药、抗生素的抑菌试验 实验二、实验二、 葡萄球菌、肠道杆菌的分离鉴定葡萄球菌、肠道杆菌的分离鉴定及细菌的药物

2、敏感性试验及细菌的药物敏感性试验实验目的 1、掌握脓汁标本中葡萄球菌的分离鉴、掌握脓汁标本中葡萄球菌的分离鉴定方法。掌握革兰染色法。定方法。掌握革兰染色法。 2、熟悉常见病原性球菌的菌落和形态、熟悉常见病原性球菌的菌落和形态染色特点。染色特点。 3、熟悉粪便标本中肠道致病菌的检验、熟悉粪便标本中肠道致病菌的检验过程过程一、微生物学实验室常用仪器设备一、微生物学实验室常用仪器设备 超净工作台超净工作台 高压蒸汽灭菌器高压蒸汽灭菌器 过滤器过滤器 培养箱培养箱二、空气、皮肤的细菌检查结果二、空气、皮肤的细菌检查结果1、记录空气微生物培养结果（要记录本人所在实验台、记录空气微生物培养结果（要记录本人

3、所在实验台的结果）的结果）菌落大小、边缘、颜色、粗糙（光滑）菌落大小、边缘、颜色、粗糙（光滑） 每立方米每立方米层流洁净手术室：层流洁净手术室： 1010普通手术室、无菌区：普通手术室、无菌区： 2002、记录皮肤微生物培养结果（要记录本人的实验结果）、记录皮肤微生物培养结果（要记录本人的实验结果）比较消毒前后细菌菌落数，菌落特点。比较消毒前后细菌菌落数，菌落特点。液体培养基（沉淀、浑浊、表面生长）液体培养基（沉淀、浑浊、表面生长）金、柠、白葡萄球菌色素金、柠、白葡萄球菌色素甲、乙、丙链球菌溶血环特征甲、乙、丙链球菌溶血环特征大肠与副伤寒杆菌致病性菌落特点大肠与副伤寒杆菌致病性菌落特点绿脓杆菌

4、的水溶性色素观察绿脓杆菌的水溶性色素观察双糖含铁培养基动力、气体、硫化氢、乳糖双糖含铁培养基动力、气体、硫化氢、乳糖分解观察分解观察结核杆菌菌落特征的观察结核杆菌菌落特征的观察三、细菌的生长现象及代三、细菌的生长现象及代谢产物观察（示教）谢产物观察（示教）细菌的生长现象及代谢产物观察细菌的生长现象及代谢产物观察混浊生长混浊生长菌膜菌沉淀均匀浑浊对照菌膜生长菌膜生长四、观察紫外线消毒灭菌结果四、观察紫外线消毒灭菌结果五、脓汁中葡萄球菌的分离鉴定（一）五、脓汁中葡萄球菌的分离鉴定（一）n 1、 讨论分离鉴定程序：讨论分离鉴定程序： 标本标本直接涂片染色镜检：典型葡萄球菌，可做初步诊断直接涂片染色镜

5、检：典型葡萄球菌，可做初步诊断 分离培养分离培养可疑菌落可疑菌落直接涂片染色镜检直接涂片染色镜检 （血液琼脂平板）（血液琼脂平板） 血浆凝固酶试验血浆凝固酶试验 药敏实验药敏实验n 2、直接涂片染色镜检：球杆混合物、牙垢、直接涂片染色镜检：球杆混合物、牙垢 3、分离培养：平板分区划线接种、分离培养：平板分区划线接种37、24h脓汁中葡萄球菌的分离鉴定脓汁中葡萄球菌的分离鉴定分区划线法分区划线法六、粪便标本细菌的分离培养鉴定六、粪便标本细菌的分离培养鉴定1 1、讨论程序、讨论程序标本标本分离培养（分离培养（S-SS-S培养基、培养基、EMBEMB）可疑菌落可疑菌落增菌培养增菌培养 涂片染色镜检。

6、涂片染色镜检。 初步鉴定（生化反应）初步鉴定（生化反应）血清学鉴定（确定菌群和菌型）血清学鉴定（确定菌群和菌型） 药敏实验。药敏实验。2 2、分离培养：、分离培养：接种于接种于SSSS培养基、培养基、EMB37EMB37、24h24h革兰染色法革兰染色法 原理：原理： 革兰阳性菌与革兰阴性菌细胞壁差异（肽聚糖含革兰阳性菌与革兰阴性菌细胞壁差异（肽聚糖含量）；革兰阳性菌等电点比革兰阴性菌低。量）；革兰阳性菌等电点比革兰阴性菌低。 实际意义：实际意义： 鉴别细菌；选择抗菌药物；与细菌致病性有关鉴别细菌；选择抗菌药物；与细菌致病性有关 步骤：步骤： 结果：结果：革兰染色步骤革兰染色步骤 1.制片：制

7、片：取标本取标本（球杆混合物、牙垢）涂片、球杆混合物、牙垢）涂片、干燥、固定干燥、固定 2.初染初染：结晶紫：结晶紫1min水洗水洗 3.媒染：媒染：碘液碘液1min水洗水洗 4.脱色：脱色：95% 酒精酒精30s水洗水洗 5.复染：复染：稀释复红稀释复红1min水洗、滤纸吸干水洗、滤纸吸干 6.油镜观察油镜观察：1、制片、制片涂片、干燥、固定涂片、干燥、固定2.结晶紫初染结晶紫初染 1min水洗水洗3. 碘液媒染碘液媒染 1min水洗水洗4. 95% 酒精脱色酒精脱色 30s水洗水洗5.稀释复红复染稀释复红复染 1min水洗、滤纸吸水洗、滤纸吸干干6.油镜观察油镜观察结果 革兰阳性菌：紫色革兰阳性菌：紫色 革兰阴性菌：红色革兰阴性菌：红色七、细菌对中草药、抗生素的敏感性试验七、细菌对中草药、抗生素的敏感性试验1、临床意义：（见实验讲义）2、实验方法：（画图表示）纸片法及打孔法(操作)实验材料：20%浓度 黄连、黄芩。庆大霉素、诺氟沙星药敏纸片。 (a)Kirby-Bauer Method平行划线法 纸片法 MIC测定人有了知识，就会具备各种分析能力，明辨是非的能力。所以我们要勤恳读书，广泛阅读，古人说“书