大蒜素对大鼠肝损伤细胞因子保护作用

1、大蒜素对大鼠肝损伤细胞因子保护作用【摘要】目的研究大蒜素对高脂饮食致大鼠慢性肝损 伤的保护作用及内毒素(lps)刺激引起肝脏枯否细胞(kcs) 分泌细胞因子的变化。方法wistar大鼠随机分为3组，10 周后腹主动脉采血测定血浆丙氨酸氨基转移酶(alt)、白细 胞介素(il) 6、il (10)、肿瘤坏死因子(tnf) a水平，取肝组织用于组织病理切片的制备。分离培养kcs，检测在 lps刺激下kcs上清液中i l 6、il 10、tnf a的水 平。结果大鼠发生慢性肝损伤时，血清alt及il 6、tnfcl水平明显升高(p【关键词】大蒜素 大蒜素作为一种来源广泛的含硫化合物，其对四氯化碳、酒

2、精等引起的肝损伤有明显保护作用。研究发现，大蒜素对 高脂饮食引起的慢性肝损伤有明显的保护作用，但机制尚未 阐明。为此，我们通过复制大鼠慢性肝损伤模型，观察大蒜 素对肝脏枯否细胞(k c s)分泌调节的影响。1材料与方法1 1材料111实验动物wistar雌性大鼠，体重150170g (山西医科大学动物中心)。2主要试剂及药物胆固醇(北京化学试公司)；大蒜素胶囊(湖北金龙药业公司)；iv型胶原酶、胎牛血清培养液(dmem)、percoll 液、内毒素(lipopolysaccharide,lpsfromescher ichiacoliolll：b4）（美国 sigma公司）； 白细胞介素（il）

3、 6、il 10、肿瘤坏死因子（tnf） a （解 放军总医院科技开发中心放射免疫所）；胎牛血清（杭州四季 青生物工程公司）。12方法121动物模型的建立选用雌性wi star大鼠36只，正常喂养1周后随机分为3组，对照组正常饮食饲养； 模型组给予高脂饮食（普通饲料+5%的胆固醇+15%的玉米油）; 药物组高脂饮食同时隔日大蒜素（0 5%, 10ml/kg）灌胃。10周后各组取实验动物8只，1%戊巴比妥纳麻醉后腹主动脉 采血处死动物，取肝左叶置于10%中性福尔马林固定备做病 理切片。122血清指标的检测采集的血液经肝素抗凝后，3000r/min离心15min，分离血浆，用于丙氨酸氨基转 移酶（

4、alt）、il 6、il 10、tnf a水平的检测，按试 剂盒说明书进行操作。123枯否细胞的分离、培养及鉴定采用改进seglen胶原酶两步灌流和percoll密度梯度离心法分离得到 各组大鼠肝脏细胞，经5%c02、37°c恒温培养箱孵育4h，洗 去未贴壁细胞。经台盼蓝非特导性酯酶染色，活性和纯度分 别达到95%时，调细胞数为5x106,接种于48孔培养板中， 每组8孔。124培养上清液细胞因子的检测于培养液中加入100 mg/mllps2滴，4h后收集培养上清，用于il 8、 tnf a、il10 的测定。1 3统计分析计量资料用土s表示，采用spss120软件进行方差分析(sn

5、k法)。2 结果2 1慢性肝损伤结果211肝组织病理学变化肝组织病理学显示，模型组与药物组大鼠体肝组织均出现不同程度的弥漫性改变， 肝内可见到大量的脂肪空泡(肝小叶内含脂滴细胞/总细胞 数1/3)及肝细胞气球样变、小叶内和汇管区有大量的以单 核细胞、淋巴细胞为主的炎性细胞浸润，但未见明显肝纤维 化，表明慢性损伤大鼠发生脂肪肝炎；与模型组相比，药物 组大鼠肝组织炎性细胞浸润明显减轻。212血清alt的变化对照组为(615±126)u/l,而模型组与药物组alt水平明显升高，分别为(2103 ±1054), (1441±729)u/l,与对照组比较，p2 13 血清i

6、l 6、il 10,tnf a的变化(表1) 随着动物发生慢性肝损伤，模型组与药物组il 6、tnf a 水平明显升高，il10则明显下降；药物组il 6水平明显低于模型组，而tnf a降低及il 10升高，差异无统 计学意义。表1大蒜素对血浆胞因子的影响注：与对照组比较，ap2 2枯否细胞的分离、培养结 果221 kcs形态的改变与对照比较分离kcs结果表明，对照组kcs体积较小，形态相对规整，胞浆突起纤细， 胞浆内仅有少量空泡。而模型组kcs体积明显增大，核浆比 例增大，胞浆突起明显增多、变粗、胞浆高度空泡化，吴典 型的活化状态。222 kcs分泌细胞因子的变化（表2）加入lps后，模型组

7、与药物组培养上清液中il 6、tnf a水平明 显高于对照组，il 10、水平发生明显下降。药物组与高 脂组比较il 6、tnf a水平显降低，而il 10水平显 著升高。表2大蒜素对大鼠kcs培养上清液细胞因子的影响注：与对照组比较，ap3 讨论近年来，非酒精性脂肪肝炎发病率明显增高，尽管该病 的发生机制尚未完全阐明，但对先天肥胖性ob/ob小鼠和 fa/fa大鼠研究表明，kcs分泌功能紊乱参与了疾病的发生。 其自然发展成为脂肪肝，特征有胰岛素抵抗、肥胖、脂质代 谢紊乱，与人类的非酒精性脂肪肝炎直接相关1 ）。yang 等2提出肥胖个体枯否细胞功能紊乱可以增加肝细胞对 内毒素的敏感性，从而加

8、速脂肪肝炎的形成。对肥胖、瘦素 受体功能紊乱的大鼠、小鼠枯否细胞体外培养发现，枯否细 胞表型异常，在给予内毒素刺激后与对照比较，促炎因子il6、tnf ci表迗增加，而抑炎因子il 10表迗抑制3）。 尽管肝脏各种细胞均可产生tnf a ,但普遍认为内毒素活 化枯否细胞是tnf a产生的主要来源。研究表明，tnf a在脂肪肝炎的发生、发展中起了重要作用，其不仅可通过 活化受体，产生各种适应性蛋白、促进肝细胞的抗凋亡（4 ）， 也可引发肝细胞线粒体释放出活性氧引起肝细胞死亡、凋亡 和肝脏的炎病浸润。il 6是肝脏kcs产生的另一种重要促 炎因子，可与tnf a在协同促进肝内炎症的产生。相反il1

9、0可通过抑制各种促炎因子的生成，从而减少肝内中性 粒细胞的浸润。大蒜素是从大蒜中提取出的一种有效成分， 其作用十分广泛。有文献报道其对cc14及乙醇所致的急、 慢性肝损伤有明显的保护作用5, 6）。在我们以往的研究 中也发现，其对高脂饮食所致肝脏慢性损伤也有较好的保护 作用。为进一步证实大蒜素是否可能通过调节kcs分泌功能 来改善肝组织慢性损伤，实验中以高脂饮食复制慢性肝损伤 模型。检测结果表明，模型组大鼠发生脂肪肝炎时，血浆促 炎因子il 6、tnf a明显升高而抑炎因子il 10显著 降低，大蒜素可抑制il 6水平的升高。体外实验进一步 证实，大蒜素可降低kcs对il 6、tnf a的表迗

10、，在提 高il 10的表达方面作用十分显著。说明大蒜素可通过调节kcs的分泌，改善肝脏内促炎因子与抑炎因子的失衡，参 与对肝脏慢性损伤的保护作用。【参考文献】1) yelley mounterma, cullenmf , bakermb, etoftheob eseprobuctonbodywe ightregulationinob obmice j. science，1995,269:540-543.2 yangsq,linhz,la nemd,etincreasetoe ndotoxinliverinjur y：implicationsforp athogenesis j . pro cncadacadsicusa, 19 97,94： 2557-2563.3 ) lefkowitchjh , hay thejh,regentcellag gregationandperive nlardistributionin steatohepatitis j . modpathol,2002,15 ： 699-704.4) faggi onir, shigenagaj,mo srea, etofucp2genee xpressionbylps：apotentialmechanismforincreasedthermogenesisdur