75%乙醇、01%新洁尔灭消毒效果验证方案1

1、xxxx药业有限公司75%乙醇、0. 1%新洁尔灭消毒效果验证方案1. 目的32. 范围33. 概述34. 验证小组成员及主要职责35 参考文献36 验证内容46人员培训：46.2设备及校验有效期56.3试验菌株56.4培养基及稀释剂56.5消毒剂液66.6验证选材66.7验证方法：78偏差跟踪129验证结果及评价1340相关文件:13"总结错误！未定义书签。1. 目的验证不同消毒剂在实验室条件下对已知菌的消毒效果，为其正确使用提供保障2. 范围木方案适用于我公司生产和检验过程中使用的消毒剂，以及对不同消毒对象按照相应 有效浓度，消毒方法，作用时间消毒后消毒效果的验证。3. 概述3.

2、 4屮和剂法：是指在消毒剂与微生物作用到达规定吋间的终点吋，取样加于适宜种类和 浓度的屮和剂中，将残留消毒剂迅速中和，使其不再持续抑制或杀灭微工物的方法。3.2消毒剂的消毒效杲评价，是以消毒剂与微生物接触后，测定残留的微生物数量，以杀 灭率表示结果，对消毒剂杀灭效果进行评价。为了准确评价消毒剂对微生物的杀菌作用， 在消毒试验中要求选择加入适当的中和剂。中和剂的作用就是不仅能及时中止消毒剂的杀 菌作用，而中和剂本身及其与消毒剂的反应产物应对微生物无抑菌或杀菌作用，且对微生 物的生长无影响。3.3本验证试验分别对不同材质进行三次独立试验，消毒剂杀菌效果符合要求。4. 验证小组成员及主要职责姓名部门

3、职责职责qcqc人员起草验证方案及报告，负贲组织验证方案的实施5 参考文献药品生产质量管理规范（2010年修订）。药品生产验证指南（2003版）药詁牛产质量管理规范（2010版）消毒技术规范（2002版）6 验证内容6.1人员培训：在验证实施前应由验证小组组长对参与人员进行本验证方案的培训并作培训记录,明确验 证的程序和注意事项，确保验证顺利开展。签名/培训确认表姓名部门培训记录编号签名检查人/fi期审核人/日期6.2设备及校验有效期仪器型号设备编码校验有效期6.3试验菌株本验证方案屮选用来源于美国atcc的标准菌种作为试验用菌种，选取的标准菌株为金黄 色葡萄球菌、绿脓假单胞菌和白色念珠菌。使

4、用的标准菌株保存在28°c的冰箱屮，传代 代数应不超过第五代。表1标准菌种信息表序号菌株名称菌株编号代数来源1金黄色葡萄球菌atcc 6538美国菌株保藏屮心(简称：atcc)2绿脓假单胞菌atcc 90274口色念珠菌atcc 102316.4培养基及稀释剂序号名称干粉批号配制批号备注第一次第二次第三次1月夷酶犬豆肉汤培养基(tsb)usp标准2朕酶大豆琼脂培养基(tsa)usp标准3沙氏琼脂培养基（sda）usp标准40.9%氯化钠溶液/5ph7.0氯化钠蛋白豚 缓冲液16吐温8017卵磷脂16.5消毒剂液名称配制批号配制浓度来源冇效期至乙醇75%新洁尔灭（苯扎浣钱溶 液）0.1

5、%6.6验证选材6.6.1消毒剂：75%乙醇、0.1%新洁尔灭（苯扎浪銭溶液）、及挑战微生物。6.6.2选用载体：不锈钢、塑料、pvc、彩钢板、玻璃。6.6.3中和剂的制备：中和剂聚山梨酯80卵磷脂配制量配制批号配制日期0.1%聚山梨酯80（用 于醇类）1%的卵磷脂（用于酚 类）6.6.4消毒剂的制备:消毒剂名称消毒剂 浓度原液浓 度消毒剂用量配制量配制人复核人配制n期新洁尔灭0. 1%5%乙醇75%无水乙 醇6.7验证方法：6. 7. 1培养基的制备取已灭菌口在储存有效期内的tsa、sda培养基和tsb培养基，tsa培养基临用 前在水浴中融化，并确认培养基配制批号、配制日期、促生长性能和无菌

6、性检查等信息均 符合要求。若该批培养基未做促生长性能和无菌性检查，则应按usp培养基促生长试验 操作规程()同步做培养基促生长性能确认和无菌性检查。6.7.2菌悬液的制备6.7.2.1增菌培养：取无菌试管3支，按无菌操作方法分装10ml ±述tsb培养基，分别 接种金黄色葡萄球菌、绿脓假单胞菌和白色念珠菌各一环。金黄色葡萄球菌和绿脓假单胞 菌置3035°c细菌培养箱中培养1824小时，白色念珠菌置2025°c的霉菌培养箱中 培养2448小时。6.7.2.2分别取上述增菌液1ml加入9ml0.9%无菌氯化钠溶液屮，依次10倍稀释至10七 10-8,使菌落数100cf

7、u/ml,做活菌计数备用。67.2.3将上述制备好的含菌量100cfu/ml的菌液分别加入2个无菌平皿中，每个平皿分 别接种1ml,细菌加入1520ml温度不超过45°c的tsa培养基，真菌加入15-20ml温 度不超过45°c的sda培养基，摇匀，凝固，细菌在30-35°c培养2天后观察最终结果，真 菌在20-25°c培养3天后观察最终结果。6.7.2.4制备好的菌悬液保存在2-8°c冰箱内备用，不得超过24h。6.7.2.5怀疑冇污染时，应以菌落形态、革兰染色与生化试验等法进行鉴定。以上按菌种 管理规程进行。6.7.3菌片的制备：6.7.3

8、.1试验中使用的菌片是以菌悬液滴加于载体上制成。载体应根据消毒对象选择(参 考车间常用材质如不锈钢、玻璃、pvc、塑料、彩钢板等),大小为5cmx5cmo6.7.3.3所用载体于染菌前，应进行脱脂处理。脱脂方法如下：将载休放在含肥皂的水 小煮沸30 min；而后以h来水洗净；用纯化水煮沸10 min；用纯化水漂洗至ph呈 中性；晾干备用。67.3.4载体经压力蒸汽灭菌后，统一使用滴染法：将经灭菌的载体片平铺于无菌平皿内， 逐片滴加菌液。菌液滴加量每片为0.1mlo用精密移液器接无菌吸头，滴染菌液，并用接 种环涂匀整个载体表面。滴染菌液后置室温下自然阴干后再使用。注：菌片含菌量约为5x105-6

9、cfu/to6.7.4屮和剂试验：6.741设平行6组试验：消毒剂+菌悬液；（消毒齐u+菌悬液）+中和剂；中和剂+菌 悬液;（消毒剂+中和剂）+菌悬液;缓冲液+菌悬液；缓冲液+中和剂。6.742接受标准：第1组不长菌或菌落数远少于第2组，第3, 4, 5组组间菌落数误差率不超 过20%,第6组无菌生长，以上均符合时，表明中和剂可以消除消毒剂对指示均的作用，中 和剂及其对与消毒剂的中和产物对指示菌无害，判定所选中和剂及其浓度适合。组间菌落数误差率=（三组间菌落平均数-各组菌落平均数）的绝对值之和一3尸三组 间菌落平均数xloo%6.7.4.3根据试验分组，准备足量试管和平皿，依次进行编号。第1组

10、 吸取消毒剂4.5ml于试管内，吸加0.5ml菌悬液（含菌量约为5xl05-6cfti/ml）, 混匀，作用至lomin时间，吸此样液0.5ml至含冇4.5mlph7.0氯化钠蛋白月东缓冲液的试管屮 混匀lomino吸取该最终样液1.0ml （或进行稀释），接种于2个无菌平皿中，做活菌培养计 数。第2组 吸取消毒剂4.5ml于试管内，吸加0.5ml菌悬液，混匀，作用至lomin时间， 吸此样液0.5ml至含有4.5ml0.1%叶温80或0.1%卵磷脂的试管中混匀lomino吸取该最终样 液1.0ml （或进行稀释），接种于2个无菌平皿中，做活菌培养计数。如平板生长菌落数均超过300个，应以稀释

11、液对上述最终样液做适宜稀释后，在次 进行活菌培养计数。第3组 吸取0.1%吐温80或0.1%卵磷脂4.5ml于试管内，吸加0.5ml菌悬液（含菌量 约为5xl05-6cfii/ml）,混匀，作用至lomin时间，吸此样液0.5ml至含冇4.5ml ph7.0氯化钠蛋 白月东缓冲液的试管中混匀lomino用ph7.0氯化钠蛋白月东缓冲液做10倍系列稀释，选适宜稀 释度菌悬液，吸取1.0ml,分别接种于2个无菌平皿屮，做活菌培养计数。笫4组 吸取中和产物溶液（以1份消毒剂加9份中和剂，作用lomin配制而成）4.5ml 于试管内,吸加0.5ml菌悬液（含菌量约为5xlo5-6cfu/ml）,混匀，

12、作用至lomin时间，吸此 样液0.5ml至含有4.5mlph7.0氯化钠蛋白月东缓冲液的试管屮混匀10mino用缓冲液做10倍系 列稀释，选适宜稀释度悬液，吸取1.0ml,分别接种于平皿小，做活菌培养计数。第5组 吸取4.5mlph7.0氯化钠蛋门腺缓冲液于试管内，吸加0.5ml菌悬液（含菌量 约为5><10>6cfu/ml）,混匀，作用至lomin时间，吸度悬液，吸取1.0ml,分别接种于2个无 菌平皿屮，做活菌培养计数。第6组 分别吸取ph7.0氯化钠蛋刨东缓冲液与中和剂各1.0ml于同一无菌平皿内， 倒入上述试验同批次的培养基15ml-20ml,培养观察。如出现有菌生

13、长，可能提示实验材 料或操作过程屮冇污染。应重新进行试验。注：细菌用tsa培养基在30-35°c培养2大，真菌用sda培养基在20-25°c培养3大。6.744屮和剂试验结果消毒剂名称：批号：中和剂名称：笫 次试验试验菌稀 释 度结果(cfu/im.) 三组间 菌落误 差率 （%）消毒剂+菌悬液（消毒剂 +菌悬液）+中 和剂中和剂 +菌悬液（消毒剂 +中和 剂）+菌 悬液稀释液+菌悬液稀释液+中和剂金黄色 葡萄球 菌绿脓假 单胞菌白色念 珠菌6.7.4.5屮和剂试验结果总结。总结人：日期：6.7.5菌片菌数复核：取一片已制备好的菌片，完全浸泡于100ml ph7.0氯化钠蛋

14、白月东冲液中反复荡洗数分钟，然后吸取1ml荡洗液加入到9ml缓冲液中，依次10倍稀释至适宜稀释级，吸取1ml置无菌空平皿屮，倾倒温度不超过45°c的tsa或sda培养基，平行倾到2个平板，细菌在3035°c培养2天后观察最终结果，真菌在20-25°c培养3天后观察最终结果，最终确定接种于载休上的菌数。结果见下表。菌片菌数复合结果：试验菌载金黄色 葡萄球菌铜绿假单胞菌白色念株菌不锈钢10-2菌片菌数玻璃10-2菌片菌数pvc10-2菌片菌数塑料10-2菌片菌数彩钢板10-2菌片菌数6.7.6载体喷雾定量杀菌试验6.7.6.1选定消毒剂与作用时间（1分钟）。每种菌所染

15、菌片应分开进行试验。试验时，每 种载体菌片各取1片，置于一未沾有任何消毒液的清洁无菌玻璃板上，隔15cm的距离进行 喷雾杀菌试验，喷雾量为30 ml/m2o6.7.6.2每次试验以同一浓度消毒剂溶液对上述菌片进行均匀喷雾。每次喷雾的距离和压力 保持一致，以尽量使喷到菌片上的雾粒大小和数量一致。喷雾量参照车间实际操作以不使 菌片湿透、流液为度。6.7.6.3待菌药相互作用至各预定吋间（1分钟）后，立即将与消毒剂作用后的菌片加入到 100ml ph7.0氯化钠蛋白腺缓冲液屮，充分震荡，作用1 omin后过滤，将滤膜菌而向上贴 在琼脂培养皿上，测定存活菌数。金黄色葡萄球菌、绿脓假单胞菌在tsa培养基

16、上培养， 白色念珠菌在sda培养基上培养。6.7.6.4毎批试验均应换一块未沾有任何消毒剂的清洁无菌玻璃板，不同的消毒剂用不同的 喷雾器盛装。6.765细菌试验样本均在30-35°c培养箱中培养2天后观察最终结果；霉菌试验样木在20-25°c培养箱屮培养3天后观察最终结果。10.8.7试验重复3次,计算各组的活菌量（cfu/片），计算杀灭对数值。（结果保留到小数点后两位）10.8.8要求各次试验的杀灭对数值均33,可判定消毒合格。6.7.6.5试验重复3次，计算各组的活菌量（cfu/片），计算杀灭对数值。（结果保留到 小数点后两位）6.7.6.6要求各次试验的杀灭对数值均3,可判定消毒合格。6.7.6.7载体喷雾定量杀菌试验结果