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文档简介
1、数据处理基本步骤数据处理基本步骤第一节第一节 ria、irma剂量剂量反应曲线的建立反应曲线的建立一、一、ria剂量反应曲线剂量反应曲线n反应动力学模式: *ag+ag+ab (*ag-ab)+(ag-ab) n其中:ab限量 (*ag+ag)抗原决定簇 ab结合位点n 对于ab, *ag和ag不可辨别,与ab结合机 率一致n如果:固定*ag量, ag则(*ag-ab), ag则(*ag-ab); ag浓度与(*ag-ab)放射性计数呈反向关系ria剂量反应曲线剂量反应曲线nria-kit有一组具有梯度,已知为标准浓度的ag标准品,以此为横坐标,以与之相对应的(*ag-ab)放射性计数为纵坐标
2、,可建立反映ag浓度与(*ag-ab)计数的反向变化规律曲线ria剂量反应曲线。n待测物的ag浓度可根据其对应的(*ag-ab)计数,在曲线中查得。常用专业名词常用专业名词nt(total)管计数:每一试管投入的*ag的 放射性计数。nb(bound)管计数:(*ag-ab)的计数也 称结合计数nbo管计数:当ag=0浓度时的(*ag-ab) 计数,为最大结合计数n f(free)计数:游离的*ag的放射性计数, f=t-bria剂量反应曲线反应坐标剂量反应曲线反应坐标(纵坐标)表达方式(纵坐标)表达方式 b-(*ag-ab)计数 f/b或b/f 结合计数与游离计数之比bt=每管总计数 0.9
3、90n拟合百分比偏差 dev%=(q(yi-y)2二、拟合应注意二、拟合应注意n只是对由标准品及其相应的反应参数决定的曲线段进行拟合,该范围 内曲线应保证单调性,决不能外延。n剔除坏点,应注意头尾两点剔除应慎重n标准品点数应至少比拟合参数数目多2个n曲线拟合,作用是为了规范,防止随意性,不可能将坏的结果变好,如模型选择不当,只能把好的结果变坏,只有把好实验质量,才能提高实验结果的精度。三、标准曲线应符合的条件三、标准曲线应符合的条件四、标准曲线的质控参数四、标准曲线的质控参数第四节第四节 肝炎筛选的处理肝炎筛选的处理一、对照组要求一、对照组要求1 1、计算阴性和阳性、计算阴性和阳性 对照的平均
4、计数对照的平均计数nnx= ni(阴性对照样品n5)npx= pi(阳性对照样品n3)1n1n2 2、控制对照组离散范围、控制对照组离散范围n ni1.5nx 或ni1.5px 或pi0.5pi 剔除,重新计算px3 3、要求、要求二、临界值判定二、临界值判定1、 s/n xsn x +p x0.5第五节第五节 rba的数据处理的数据处理一、单点法一、单点法rba的数据处理的数据处理)%molcpmrlrt标本蛋白量(配基比活度)测量效率(的二、多点法二、多点法(以(以scatchard为例)为例)rlkdkdrtlrl1n例: 1、加样程序、加样程序wbc/gcr 3h-dexwbc/gcr
5、 3h-dex多点多点rbarba编号编号3h-dexdex(ul)pbs补足体补足体积积ul细胞细胞ululnmtb1104.3890500nsb1104.38585500tb2208.7780500nsb2tb32510.9575500nsb32510.9512.562.5500tb43013.1670500nsb4tb54017.5460500nsb54017.541540500tb65021.9350500nsb65021.9325255002、测量结果、测量结果wbc/gcr 3h-dexwbc/gcr 3h-dex多点多点rbarba测量结果测量结果编号编号3h-dex(ul)tb
6、(cpm) nsb(cpm)t(cpm)11017865691445302202799289060325332213753613254303627433590650474026907226503、建立、建立nsb的回归方程的回归方程4、计算、计算b、f和和b/f3h-dex(ul)sb(cpm)f(cpm)b/f1012151427440.0085122017022862610.0059462519633580030.0054833020054299630.0046634020875738850.0036375020677179100.0028795、换算、换算b相对应的相对应的3h-dex 物质量物质量 比放= 换算换算b对应的对应的fmol数数n1215cpm-34.26(fmol)n1702cpm-48.00 (fmol)n1963cpm-55.36 (fmol)n2005cpm-56.54(fmol)n2087cpm-58.85 (fmol)n2067cpm-58.30 (fmol)n以b对应的fmol数为横坐标,b/f为纵坐标进行scatchard作图6、scatchard作
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