无菌检查方法验证告报告2015

1、编号：FAL-YZ-003.1无菌检查方法验证报告编制/日期审核/日期评审会签姓名部门职务评审意见日期批准/日期科技发展有限公司目 录序号内容页号1目的12范围13依据14职责权限15验证方法26验证结论57附录6无菌检查方法验证报告1.目的通过对培养基无菌性检查、灵敏度检查，对产品的无菌检查方法适用性进行试验，证明该方法适用于产品无菌检查日常检测。2.范围适用于本公司产品的无菌检查方法的建立和确认。3依据中国药典（2015年版） GB/T14233.2-2005 医用输液、输血、注射器具检验方法 第2部分：生物学实验方法4. 职责权限姓名部门分工职责组长：组织确认或验证工作，批准方案和报告负

2、责编制方案、实施、总结报告及微生物检测负责设备样品提供, 配合实施方案的工作负责微生物检测5. 验证方法实验前的准备a仪器设备设备名称设备编号证书编号设备 状态压力蒸汽灭菌器10-11-53京海字第12004119号未检定 己检定在有效期内激光尘埃粒子计数器Y09-3016H212C-O1040未检定 己检定在有效期内温湿度计JWS-A3B812Z-A0571号未检定 己检定在有效期内微压差表B10093624B712C-E0083号未检定 己检定在有效期内微压差表B10090070B712C-E0076号未检定 己检定在有效期内细菌培养箱SPX-100B-Z京海字第11042604号未检定

3、己检定在有效期内霉菌培养箱MLX-150-1京海字第11042605号未检定 己检定在有效期内确认人： 日期：b操作环境微生物限度检查应在环境洁净度10000 级下的局部洁净度100 级的单向流空气区域内进行。检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。单向流空气区域、工作台面及环境应定期按医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法的现行国家标准进行洁净度验证。c稀释液和试剂： PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液 d器具 无菌注射器 仪液器 YT603集菌仪5.1培养基的适用性检查无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基及胰胳大豆胨肉汤培养基等应符合培养基的无菌性检查及灵敏度检查的要求。本

4、检查可在供试品的无菌检查前或与供试品的无菌检查同时进行。培养基：硫乙醇酸盐 批号20140408 生产厂家：青岛日水生物技术有限公司胰胳大豆胨肉汤培养基 批号20151023 生产厂家：青岛尼赛欣合生物技术有限公司5.1.1无菌性检查：每批培养基随机取不少于 5 支（瓶），培养 14 天，应无菌生长。5.1.2灵敏度检查菌种：培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过 5 代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第 0 代），试验用菌种应采用适宜的菌种保存技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)CMCC(B) 26 003铜绿假单胞菌

5、(Pseudomonas aeruginosa) CMCC(B) 10 104枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）CMCC（B）63 501生孢梭菌(Clostridium sporogenes)CMCC(B) 64 941白色念珠菌(Candida albicans)CMCC(F) 98 001黑曲霉(Aspergillus niger) CMCC(F) 98 0035.1.3菌液制备 金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉微生物培养基质控品,使用前注入1.1ml稀释液充分溶解后,在漩涡混合器上震荡混匀,制成10-100 cfu/0.1ml菌悬

6、液,3-5天内用完。5.1.4培养基接种 取每管装量为12ml 的硫乙醇酸盐流体培养基7支，分别接种小于100 cfu 的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌各2 支，另1支不接种作为空白对照，培养3 天； 取每管装量为9ml的胰胳大豆胨肉汤培养基7支,分别接种小于100 cfu 的枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各2 支，另1 支不接种作为空白对照，培养5 天。逐日观察结果。5.1.5结果判定 空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，判该培养基的灵敏度检查符合规定。见附件无菌培养基的适用性检查记录5.2无菌检查方法验证试验5.2.1当建立产品的无菌检查法时，应进行方法的验证，以证

7、明所采用的方法适合于本产品的无菌检查。若本产品的组分或原检验条件发生改变时，检查方法应重新验证。验证时，按“中国药典2015版四部1101无菌检查法”的规定进行操作。对每一试验菌应逐一进行验证。5.2.2菌种及菌液制备 金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉同培养基灵敏度检查。5.2.3薄膜过滤法5.2.3.1FAL胶无菌检测:使用YT603集菌仪，滤膜孔经不大于0.45µ。A样品组：取1ml医用胶缓慢滴入100ml氯化钠蛋白胨缓冲液中，使其固化成白色胶膜充分冲洗振荡1分钟，制成样品组供试液，取一幅二联式集菌培养器，将样品组供试液平均通过每只集菌培养

8、器过滤，再用100ml氯化钠蛋白胨缓冲液冲洗，然后通过集菌仪每只集菌培养器加入100ml胰胳大豆胨肉汤培养基或硫乙醇酸盐培养基，后每只加入10100cfu试验菌，做为样品组。B中和剂对照组：取一幅二联式集菌培养器，将100ml氯化钠蛋白胨缓冲液平均通过每只集菌培养器过滤，然后通过集菌仪每只集菌培养器加入100ml胰胳大豆胨肉汤培养基、或硫乙醇酸盐培养基，后每只加入10100cfu试验菌，做中和剂对照组。C阳性对照组（菌液组）：取一幅二联式集菌培养器，通过集菌仪每只集菌培养器加入100ml胰胳大豆胨肉汤培养基、或硫乙醇酸盐培养基，后每只加入10100cfu试验菌，做为阳性对照组。D阴性对照：另取

9、一幅二联式集菌培养器，通过集菌仪一只通过100ml胰胳大豆胨肉汤培养基，另一只通过100ml硫乙醇酸盐培养基， 作为阴性对照。5.2.3结果判断 样品组与中和剂对照组微生物生长浓度相似，表明中和剂的中和方式有效消除了样品的抑菌性（即有效性），如对照组与阳性对照的微生物浓度相似，表明样品预处理，消除样品抑菌性的方法，检测程序和培养条件等均不影响微生物生长（即无毒性）。阴性对照无菌生长。否则实验无效。6.验证结论 通过培养基无菌性检查、培养基灵敏度检查、无菌检查方法验证，结果表明，制定的无菌检查方法适用本公司的产品。无菌检查方法验证试验记录编号：ZJ/JL-8.2.4-4-10 序号： 样品名称：

10、 样品批号： 检测日期：样品数量：试验方法：依据中国药典2015年版 四部 1101 无菌检查法：方法验证试验 薄膜过滤法 直接接种法硫乙醇酸盐流体培养基：（3035 培养3天）1样品组2中和剂对照组3菌液组现象描述培养天数123451234512345金黄色葡萄球菌铜绿假单孢菌生孢梭菌阴性对照注：“+”为生长，“-”为不生长胰酪大豆胨豆汤培养基：（2025 培养5天）1样品组2中和剂对照组3菌液组现象描述培养天数123451234512345枯草芽孢杆菌白色念珠菌黑曲霉阴性对照工作台环境（CFU/皿）碟号24小时48小时平均菌落数结论123结论： 检验者： 复核者：复核日期：无菌培养基的适用

11、性检查记录编号：ZJ/JL-8.2.4-4-9培养基：1. 硫乙醇酸盐流体培养基 批号：_ 检验日期： 2. 胰酪大豆胨豆汤培养基 批号：_ 完成日期： 以上均为符合药典规定的干燥培养基。一、培养基的无菌性检查培养温度：硫乙醇酸盐流体培养基 胰酪大豆胨豆汤培养基 培养基名称管数培养时间（天）备注1234567891011121314硫乙醇酸盐流体 培养基12345胰酪大豆胨豆汤培养基12345结论注：“+”为生长，“-”为不生长二、培养基的灵敏度检查1. 菌液制备：（1）金黄色葡萄球菌新鲜肉汤培养物CMCC(B)26003 第_代注入1.1ml稀释液充分深解后，在漩涡混合器上震荡混匀.至_含菌

12、量_CFU/0.1ml（2）枯草芽孢杆菌新鲜肉汤培养物1mlCMCC(B)63501第_代注入1.1ml稀释液充分深解后，在漩涡混合器上震荡混匀.至_含菌量_CFU/0.1ml（3）铜绿假单胞菌新鲜肉汤培养物1mlCMCC(B) 10104第_代注入1.1ml稀释液充分深解后，在漩涡混合器上震荡混匀.至_含菌量_CFU/0.1ml（4）生孢梭菌新鲜硫乙醇酸盐培养物CMCC(B)64941第_代注入1.1ml稀释液充分深解后，在漩涡混合器上震荡混匀.至_含菌量_CFU/0.1ml（5）白色念珠菌新鲜改良马丁培养物1mlCMCC(F)98001第_代注入1.1ml稀释液充分深解后，在漩涡混合器上震荡混匀.至_含菌量_CFU/0.1ml（6）黑曲霉新鲜孢子洗脱液1mlCMCC(F)98003第_代注入1.1ml稀释液充分深解后，在漩涡混合器上震荡混匀.至_含菌量_CFU/0.1ml2. 检查结果细菌培养温度_ 3天 霉菌及酵母菌培养温度_ 5天菌种类型培养基装量（ml）培养基管数（支）硫乙醇酸