动物细胞融合与单克隆抗体

1、第二节第二节 动物细胞工程动物细胞工程细胞融合与单克隆抗体技术细胞融合与单克隆抗体技术(1)(1)(2)(3)(4)(5)植物体细胞杂交过程示意图植物体细胞杂交过程示意图动物细胞融合过程动物细胞融合过程细胞膜的流动性细胞膜的流动性灭活病毒、灭活病毒、pegpeg、电激等、电激等融合后的细胞进行有丝分裂，融合后的细胞进行有丝分裂，形成完整的杂交细胞形成完整的杂交细胞诱导的手段？诱导的手段？融合后细胞的类型？融合后细胞的类型？abab杂种细胞遗传物质杂种细胞遗传物质有什么特点？有什么特点？三种三种aaaa、abab、bbbb（a a、b b）含两种生物的遗传物质含两种生物的遗传物质原理？原理？动物

2、动物细胞融合技术的意义和应用细胞融合技术的意义和应用抗体：能够与抗原发生特异性结合的抗体：能够与抗原发生特异性结合的免免疫球蛋白疫球蛋白。能产生抗体的细胞是能产生抗体的细胞是浆细胞（即效应浆细胞（即效应b b细胞）。细胞）。二、单克隆抗体二、单克隆抗体抗体的传统生产方法抗体的传统生产方法抗原抗原 反复注射动物反复注射动物从动物的从动物的血清血清中分离抗体中分离抗体该法制备抗体的缺点：该法制备抗体的缺点：产量低、纯度低，且抗产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度体的特异性差、灵敏度低。低。读下面一段资料，读下面一段资料，找出单克隆抗体的概念找出单克隆抗体的概念 人们发现，在动物发生免疫反应的过

3、程中，体内的人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的b b细胞细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个b b细胞只细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个单一抗体，必须用单个b b细胞进行无性繁殖，即克隆。细胞进行无性繁殖，即克隆。单克隆抗体的概念单克隆抗体的概念 单克隆单克隆抗体：单个抗体：单个b b细胞克隆产生的细胞克隆产生的化学化学性质单一、特异性强性质单一、特异性强的抗体的抗体提示提示1 1：对：对b b细胞进行细胞培养可行吗？细胞进行细胞培

4、养可行吗？提示提示2 2：我们所学的哪种细胞是可以无限：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？增殖的？问题：问题：如何大量生产单克隆抗体？请尝试设如何大量生产单克隆抗体？请尝试设计一个方案。计一个方案。单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备一个一个b b淋巴细胞只分泌一种特异性抗体淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞能无限增殖骨髓瘤细胞能无限增殖杂交瘤细胞杂交瘤细胞动物细胞培养技术动物细胞培养技术设计方案：设计方案：动物细胞融合技术动物细胞融合技术单克隆单克隆抗体抗体 既能产生特异既能产生特异性抗体，又能大量性抗体，又能大量增殖的细胞。增殖的细胞。为什么给小鼠注射特为什么给小鼠注射特定的抗原蛋白？

5、定的抗原蛋白？ 会有几种融合方式？会有几种融合方式？ 杂交瘤细胞是如何杂交瘤细胞是如何筛选出来的？有何特点？筛选出来的？有何特点？ 是否所有的杂交瘤是否所有的杂交瘤细胞都能产生专一性抗细胞都能产生专一性抗体？体？ 如何大规模进行培如何大规模进行培养得到大量的单克隆抗养得到大量的单克隆抗体？体？bbbb 、b b瘤瘤 、瘤瘤瘤瘤 （b b、瘤）、瘤）（一选）（一选）选择性培选择性培养基养基：只：只有有杂交瘤杂交瘤细胞细胞才能才能存活存活获得产生相获得产生相应抗体的应抗体的b b细胞细胞（二选）：选能（二选）：选能产生所需产生所需专一抗专一抗体的杂交瘤细胞体的杂交瘤细胞 单抗制备过程分哪几步？请用

6、箭头把以下代单抗制备过程分哪几步？请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母按正确表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺序连接起来。 单克隆抗体的应用单克隆抗体的应用1.1.诊断试剂诊断试剂最广泛应用最广泛应用准确、高效、简易、快速准确、高效、简易、快速单克隆抗体最主要的优点：单克隆抗体最主要的优点：特异性强，特异性强，灵敏度高，并能大量制备。灵敏度高，并能大量制备。“生物导弹生物导弹” ” 单克隆抗体药物单克隆抗体药物 单抗导向，药物为弹头单抗导向，药物为弹头 主要用于治疗主要用于治疗癌症治疗癌症治疗，单克隆抗体作为载体，单克隆抗体作为载体，运载抗癌药物，形成运

7、载抗癌药物，形成“生物导弹生物导弹”，准确杀伤癌变准确杀伤癌变细胞。细胞。a a将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的b b淋淋巴细胞巴细胞b b用纤维素酶处理用纤维素酶处理b b淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞c c用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的b b淋淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合d d筛选杂交细胞，并从中选出能产生所需抗体筛选杂交细胞，并从中选出能产生所需抗体的细胞群，培养后提取单克隆抗体的细胞群，培养后提取单克隆抗体例：用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，例：用动物细胞工程

8、技术获取单克隆抗体，下列实验步骤中错误的是（下列实验步骤中错误的是（ ） 下图为单克隆抗体的制备过程，请下图为单克隆抗体的制备过程，请据图回答问题。据图回答问题。(1)(1)若若a a细胞是小鼠骨髓瘤细胞，则细胞是小鼠骨髓瘤细胞，则b b细胞是取自小细胞是取自小鼠体内的鼠体内的 细胞，从小鼠体内提取分离该细细胞，从小鼠体内提取分离该细胞之前，应给小鼠注射胞之前，应给小鼠注射_类物质。类物质。（2 2）d d过程是一个过程是一个_过程，该过程过程，该过程的进行常用的进行常用_或或_的诱导的诱导。(3)(3)假设仅考虑某两个细胞的融合，则可形成假设仅考虑某两个细胞的融合，则可形成 种类型的种类型的

9、c c细胞，因此需用细胞，因此需用_培养基筛选出培养基筛选出d d细胞用于培养，细胞用于培养，d d细胞的名称是细胞的名称是 ，其，其特点是特点是_。效应效应b b抗原抗原细胞融合细胞融合聚乙二醇聚乙二醇 灭活的病毒灭活的病毒选择性选择性 3 3既能无限增殖又能产生特异性抗体既能无限增殖又能产生特异性抗体杂交瘤细胞杂交瘤细胞(4)(4)在培养时通过在培养时通过_分裂方式大量繁殖。分裂方式大量繁殖。d d细胞体外培养需要注意的条件是（至少细胞体外培养需要注意的条件是（至少2 2项）项）（5 5）单克隆抗体在疾病的诊断、治疗和预防方）单克隆抗体在疾病的诊断、治疗和预防方面，与常规抗体相比，其特点是面，与常规抗体相比，其特点是特异性强、特异性强、 灵敏度高灵敏度高无菌、无毒的环境；充足的营养；适宜的温度和无菌、无毒的环境；充足的营养；适宜的温度和phph；适宜的气体环境。；适宜的气体环境