HPV临床常用检测方法

1、由于 HPV 不能在体外细胞培养，故不能用简便的血清血检测进行HPV 的诊断和分型。临床上用于检测 HPV 的方法包括细胞学方法、免疫组化、原位杂交、斑点杂交、核酸印迹和PCR等，其中以 PCR 方法的敏感性最高，是目前应用最多感染的 HPV 型别、含量、持续时间决定病变的发展与预后，是进行 HPV 检测的主要内容。目前主要是通过应用分子生物学方法进行HPV DNA 勺检测。1、现有的 HPV 实验室主要检测手段：1聚合酶链反应(PCR, Polymerase Cha in Reactio n):扩增位于两段已知序列之间的DNA 片断的方法。该法有较高的敏感度，可进行 HPV 分型，缺点是对实

2、验室环境要求较高，容易发生样本间的交叉污染，从而导致假阳性率高。2核酸杂交检测有较好的特异性和敏感度，还可以进行 HPVDNA 勺分型，各种核酸杂交检测方法有一定的 优缺点。A 核酸印迹原位杂交适用于 HPV 分型和 HPV DNA 分子量鉴定，虽然灵敏度高，但因操作复杂，需要新鲜组织标 本,不便在临床上大规模使用。B 斑点印迹其敏感度和特异性均低于核酸印迹原位杂交法，虽然经济实用，但实验过程存在有放射性污染，是环保所不能轻视的问题。C 原位杂交(in situ hybridization，种核酸杂交技术，可用来测定基因或特定核苷酸序列在核酸分子的所在部位，检测重组体DNA 通过非放射性探针对

3、石蜡组织进行检测,能作定位检测，假阳性率低，但灵敏度不高，大大降低了临床使用价值。D 杂交捕获法(Hybrid Capture)杂交捕获试验是利用化学发光对抗体捕获的信号加以放大。首先使 DNA 双链释放并分解成为可以杂交的核苷酸单链，DNA 单链与 RNA 组合探针结合为 RNA-DNA 杂合体，特异性抗体将 RNA-DNA杂合体捕获，偶联有碱性磷酸酶的第二抗体与 RNA-DNA 杂合体结合,碱性磷酸酶使酶 底物发光，根据光的强弱可确定碱性磷酸酶的含量，从而确定 RNA-DNA 杂合体的含量。能检测 13 种高危型 HPV,包括 HPV16 18、31、33、35、39、45、51、52、5

4、6、58、59、68。各种检测方法的比较各种检测方法的比较欢迎下载2方法学灵敏度特异性技术特点细胞学（Cytology）低低操作容易，成本较低，准确度较差斑点印迹（Dot blot ）中中有一定放射性核酸印迹原位杂交（southernblothybridization ）高高标准、麻烦，不宜大规模使用原位杂交(In Situhybridization )高中蜡块组织包埋内检测 HPV杂交捕获（HC HC2高中无放射性，易使用，高、低危型间有交叉反应，且不能分型普通多聚酶链反应（PCR很高中取材容易，但目前已应用试剂的只能检测少 数单一型别，如 6、11、18 等，且由于技术上的问 题存在假阳性

5、2、最新推出的 HPV 的实验室检测技术高灵敏度高危型 HPV 分型多色荧光实时 PCR 式剂：为欧洲著名分子生物学研究机构专门针对宫颈癌筛查而全新设计的高危型HPV 分型多色荧光实时 PCR 检测试剂，可同时检测高危型中最主要的 16、18、31/33、35/45 型。了解宫颈疾病人乳头状瘤病毒（ HPV ）感染患者中 HPV 亚型分布情况及高危型 HPV 的年 龄分布。方法采用专利 Invader 酶切信号放大法，利用 Cervista HPV HR Cervisat 核酸杂交基因分型试剂检测宫颈脱落细胞HPV 的 14 个亚型 DNA。HPV 型组亚型备注A5/A651，56，66A71

6、8，39，45，59，68A916，31，33，35，52，58欢迎下载31 HFV DtSAHybriM居用核酸井子杂交仪*ONA槎取试 剂盒和人乳头状*SIS毒植Bfi分子快速亲交基閃分型 试剂款（HyhriVU札 美国专利W2CI87）均为凯齋 生物科技有限公谢产品口采用低密度撰因芯片利导 流杂交技术（nothnxi#! byfcricHzaiifin）应用專核 昔魄探师杂兗叮栓岀13种离危亚型（HPV 16. I仏31、33、35、39x4仇51、J2. 56, 58, 59, 68）. 5种低危亚型（HPV6. LU 42、43和44）及中国人特有的离危亚型（CPW04、53. 66

7、）。M休步骤如下;利用凯普生物化学科技公可的基 因组抽提试闸盒提取样本DNA,FTC-200 MJ Rrsch） PCR扩增由反应体系25条件为列T9 miuF95 T：20 s, 55 3G aT72 12 M .r扩增40亍循环，72无廷伸3 iniru的七预热后*在HybriMa医用機匯分子快極杂交仪乎台上放人标 记有21种HPV莘因盘專核昔醉探针的低密度華因 芯片，将扩増产物置95变性5 min,冰浴2 tnin.加入检涮乱内进行10 min的診瞳杂交酶标猊 色：加人封阻液封用为反蛊的空白徹孔”SI扳显色 垢观察栓伺结卑彳阳性点呈现蓝幫色凰点，爭个圆 点阳性即为多据感坚心每献芯片上有P

8、CR反应质 桂点和衆奁显色质控点各I个。HPV 基因分型检测试剂盒（PCR-反向点杂交法）【产品用途】对人乳头瘤病毒（HPV ）的感染情况进行定性检测并加以分型，能够检测23 种 HPV 基因型，直接提示感染 HPV 的基因型；包括 18 种高危和 5 种低危型，可用于临床 HPV 感染的辅助诊断。【产品优势】1. 精确分型：能同时对 23 种 HPV 基因型进行精确分型，包括 18 种高危型和 5 种地位型；2. 效率高：单次检测标本数量可达 96 份；3. 性能好：特异性强、重复性好，均高于98% ；4. 设备通用：如普通 PCR 仪和杂交仪，适应于大、中、小型实验室；5. 内部质控：具有真正意义上的内部质控，检测结果更加准确；6. 可以检测多种临床标本。【技术方法】采用 PCR 和反向点杂交法相结合的基因芯片技术【检测原理】将大量不同序列的探针分子固定于支持物的不同位置上，然后与已做标记的样本进行杂交,信号的强度和分布来进行分析。通过检测杂交欢迎下载4【检测