2054532495发酵豆粕与评估应用

1、根源生物根源生物发酵豆粕与评估方法发酵豆粕与评估方法1乳仔猪消化生理乳仔猪消化生理2大豆抗营养因子大豆抗营养因子3发酵豆粕工艺发酵豆粕工艺4发酵豆粕的评估发酵豆粕的评估5根源产品评价体系与优势根源产品评价体系与优势乳仔猪消化生理特点u乳猪胃肠等消化器官重量轻、容积小；u胃肠蠕动能力不足；u胃酸和小肠碱分泌不足；u乳猪消化酶分泌不足；u腹泻严重。乳仔猪腹泻u断奶应激；u环境问题；u饲料，液体到固体的转变；u饲料蛋白质种类。u蛋白质种类对腹泻的原因 蛋白质种类与腹泻有关，豆粕较容易引起腹泻； 豆粕的比例越高腹泻率越高（消化性和抗原性）； 蛋白原料的选择至关重要。饲喂不同蛋白质的腹泻指数1.553.

2、251.750.5500.511.522.533.5蛋白质种类腹泻指数玉米- 豆粕豆粕醇处理豆粕乳蛋白蛋白质种类与乳仔猪腹泻大豆抗营养因子种类种类抗营养因子抗营养因子热不稳定热不稳定蛋白酶抑制因子蛋白酶抑制因子 protease inhibitors植物凝集素植物凝集素 lectins (hemagglutinin)抗维生素因子抗维生素因子 anti vitamin factors促甲状腺肿素促甲状腺肿素 goitrogens热稳定热稳定大豆抗原大豆抗原 glycinin 植酸植酸 phytate寡糖寡糖 oligosaccharidesu降低豆粕中的抗营养因子，抗原、寡糖等；降低豆粕中的抗营

3、养因子，抗原、寡糖等；u提供优质消化率用率高的蛋白质（高小肽）；提供优质消化率用率高的蛋白质（高小肽）；u提供乳仔猪需要的有机酸（乳酸、乙酸、丙酸和丁酸）；提供乳仔猪需要的有机酸（乳酸、乙酸、丙酸和丁酸）；u提供乳仔猪需要的微生态制剂及其有益代谢副产物（具有提供乳仔猪需要的微生态制剂及其有益代谢副产物（具有活性的乳酸菌、酪酸菌和维生素等）。活性的乳酸菌、酪酸菌和维生素等）。发酵豆粕的目标发酵豆粕的目标发酵豆粕生产工艺与质量控制发酵豆粕生产工艺与质量控制原料的选择：43%，46%？有无其它原料？产品：46-48%,50%。原料原料发酵豆粕生产工艺与质量控制发酵豆粕生产工艺与质量控制发酵混合工序是

4、否合理，与菌种混合均匀度？有无存在污染的可能性（生产的连续性）？清理程序？混合系统混合系统发酵混合工序是否合理，与菌种混合均匀度？有无存在污染的可能性（生产的连续性）？清理程序？混合系统混合系统发酵豆粕的工艺与质量控制发酵豆粕的工艺与质量控制链带式自动发酵床发酵池发酵罐发酵箱发酵原则：低损耗，高效率；发酵容器的选择：池子？罐？带式？箱式？优缺点：。固体发酵设备固体发酵设备发酵豆粕的工艺与质量控制发酵豆粕的工艺与质量控制菌种：自产？外购？菌种的稳定性。菌种菌种温度控制系统是否完善：空调？暖气？通风？环境净化系统：空气清洁度。发酵环境控温发酵环境控温发酵豆粕的工艺与质量控制发酵豆粕的工艺与质量控制

5、烘干系统的选择：滚筒？管束？流化床？工艺的优点烘干系统的关键控制点：重点控制指标，温度与效率，控制好美拉德反应。烘干系统烘干系统发酵豆粕的工艺与质量控制发酵豆粕的工艺与质量控制管束烘干机滚筒烘干机网带烘干机流化床 粉碎:粉碎：效率？除尘？清理？过程记录 成品:成品库：防潮？防鼠？通风？仓储条件、周转周期。其他工艺其他工艺发酵豆粕的工艺与质量控制发酵豆粕的工艺与质量控制质量过程控制质量过程控制 每一个生产环节是否有恒定的监控指标； 严格的生产记录管理制度。发酵豆粕的工艺与质量控制发酵豆粕的工艺与质量控制根源发酵豆粕的工艺特色与优势根源发酵豆粕的工艺特色与优势u根源集团在菌种方面的优势根源集团在菌

6、种方面的优势u严格选用优质豆粕原料严格选用优质豆粕原料u独一无二的全自动无菌车间生产线独一无二的全自动无菌车间生产线u均衡的产品指标均衡的产品指标 菌种菌种 1 1）专业的微生物、酶制剂研发团队，生产研发和应用研发相结合。）专业的微生物、酶制剂研发团队，生产研发和应用研发相结合。 2 2）菌种的选择，专菌专用，多菌联合发酵（）菌种的选择，专菌专用，多菌联合发酵（乳酸菌和酵母菌乳酸菌和酵母菌）。）。 3 3）菌种自产自用，菌种新鲜，采用液体菌种，发酵启动快）菌种自产自用，菌种新鲜，采用液体菌种，发酵启动快。1 1、高活力菌种和完备生产工艺、高活力菌种和完备生产工艺不同乳酸菌在棉籽糖培养不同乳酸菌

7、在棉籽糖培养基中的生长能力基中的生长能力不同乳酸菌株对水苏糖不同乳酸菌株对水苏糖的降解能力比较的降解能力比较菌种发酵工艺与生产设施1 1、高活力菌种和完备生产工艺、高活力菌种和完备生产工艺 豆粕豆粕 好产品必须用优质的原料好产品必须用优质的原料 1 1）质量稳定，供应商质量稳定，供应商，青岛渤海科技有限公司、烟台益海，青岛渤海科技有限公司、烟台益海 2 2）价格优势：中慧集团采购）价格优势：中慧集团采购 3 3）运费优势：距离近）运费优势：距离近 4 4）包装优势：袋装转为吨包）包装优势：袋装转为吨包2 2、严格选用优质豆粕原料、严格选用优质豆粕原料 原料原料投料投料自动混合自动混合自动发酵自

8、动发酵烘干烘干粉碎粉碎打包打包成品成品3 3、全自动化恒温发酵生产线、全自动化恒温发酵生产线1.1.净化车间净化车间：发酵车间空气净化达到万级，保证发酵环境无杂菌污染；发酵车间空气净化达到万级，保证发酵环境无杂菌污染；全部物料从投料到成品均不接触外界环境，杜绝了物料传输过程中的全部物料从投料到成品均不接触外界环境，杜绝了物料传输过程中的污染。污染。2.2.恒温发酵恒温发酵：发酵车间温度控制在发酵车间温度控制在3535；恒温的环境带来发酵周期的稳定，保证发酵周期恒定在恒温的环境带来发酵周期的稳定，保证发酵周期恒定在4848小时。小时。4 4、生产线优点、生产线优点3.3.均匀发酵均匀发酵： 菌种

9、、豆粕与水的配料使用自动添加系统，减菌种、豆粕与水的配料使用自动添加系统，减少人工配料带来的误差；少人工配料带来的误差； 后续发酵采用木框式发酵，发酵单元较小，使后续发酵采用木框式发酵，发酵单元较小，使得在发酵过程中各个点的温度均匀，均匀的发得在发酵过程中各个点的温度均匀，均匀的发酵带来产品品质外在指标的稳定与内在指标的酵带来产品品质外在指标的稳定与内在指标的提升。提升。 4.4.全自动化全自动化： 自动配料、自动进料、自动控温、自动出料；自动配料、自动进料、自动控温、自动出料； 全生产线实现自动化控制，减少了人工操作的全生产线实现自动化控制，减少了人工操作的不准确性，实现精益生产。不准确性，

10、实现精益生产。4 4、生产线优点、生产线优点加加 料料 过过 程程车阵式固态发酵车阵式固态发酵出出 料料 过过 程程车阵式固态发酵车阵式固态发酵卸卸 料料 过过 程程车阵式固态发酵车阵式固态发酵感观感观常规常规非常规非常规生物生物颜色颜色气味气味粒度粒度水分水分灰分灰分粗蛋白质粗蛋白质ps酸溶蛋白酸溶蛋白vbnph乳酸乳酸抗原抗原寡糖寡糖活菌数活菌数酶活酶活益生肽产品控制指标益生肽产品控制指标发酵豆粕：蛋白质体外消化预处理发酵豆粕：蛋白质体外消化预处理产品批次之间的稳定性产品批次之间的稳定性发酵、烘干过程的均匀性发酵、烘干过程的均匀性5 5、完善质量控制体系、完善质量控制体系 水分和蛋白每水分

11、和蛋白每6 6吨取样检测，其他指标为分原料批次检测。吨取样检测，其他指标为分原料批次检测。 每批发货产品均进行全面检测，并附检验报告单。每批发货产品均进行全面检测，并附检验报告单。生物原料生产车间研发中心研发中心发酵豆粕的评估发酵豆粕的评估菌种菌种菌种：自产？外购？菌种生产的稳定性。菌种的有益性能。发酵豆粕的评估发酵豆粕的评估 根据蛋白质的溶解性，大豆蛋白可分为两类：清蛋白（非酸沉蛋白根据蛋白质的溶解性，大豆蛋白可分为两类：清蛋白（非酸沉蛋白5%5%）和球蛋白（酸沉蛋白）和球蛋白（酸沉蛋白90%90%） 根据超速离心分析，大豆蛋白主要为根据超速离心分析，大豆蛋白主要为11s11s（大豆球蛋白）

12、和（大豆球蛋白）和7s7s（-伴伴大豆球蛋白）组分大豆球蛋白）组分 大豆球蛋白占大豆籽实蛋白的大豆球蛋白占大豆籽实蛋白的19.5-23.1%19.5-23.1%（25-30%25-30%），占总球蛋白的），占总球蛋白的40%40%，由酸性多肽（，由酸性多肽（34-44ku34-44ku）和碱性多肽（）和碱性多肽（20ku20ku）。）。 -伴大豆球蛋白占大豆籽实蛋白的伴大豆球蛋白占大豆籽实蛋白的10-12.7%10-12.7%，占总球蛋白的，占总球蛋白的30%,30%,由由（58-77ku58-77ku）、）、（58-83ku58-83ku）和）和（42-53ku42-53ku）三种亚基组成。

13、）三种亚基组成。 其它球蛋白含量低，抗原性也弱。其它球蛋白含量低，抗原性也弱。大豆抗原蛋白占豆粕总蛋白比例大豆抗原蛋白占豆粕总蛋白比例大豆抗原与检测大豆抗原与检测 由酸性亚基和碱性亚基组成由酸性亚基和碱性亚基组成 elisaelisa测定的是碱性亚基的含量测定的是碱性亚基的含量 大多数大多数acidacid肽链与肽链与igeige、igmigm、iga iga 有很强的结合活性，能引起致敏反有很强的结合活性，能引起致敏反应，结合区域位于酸性多肽应，结合区域位于酸性多肽192-192-306 306 残基处，碱性肽链则没有残基处，碱性肽链则没有. .adachi m. crystal struc

14、ture of soybean 11s globulin : glycinin homohexamerj. plant biology,2003(12): 7 395- 7 400. 11s 11s 抗原蛋白抗原蛋白大豆抗原与检测大豆抗原与检测7s7s伴大豆球蛋白伴大豆球蛋白 由由、和和三种亚基组成。三种亚基组成。elisaelisa测测定的是定的是-亚基。亚基。 亚基有很强的结合亚基有很强的结合igeige、igmigm、iga iga 的的活性，结合区域位于活性，结合区域位于亚基多肽链的亚基多肽链的232-383 232-383 碳原子处，碳原子处， 与与亚基则没亚基则没有。有。 具有抗原

15、性的关键在于内源性消化酶不具有抗原性的关键在于内源性消化酶不能够对进行有效消化。能够对进行有效消化。maruyama n, adachi m, takahashi k, et al. crystal structures of recombinant and native soybean - conglycinin homotrimers j. european journal of biochemistry, 2001,268(12):3 595- 3 604.大豆抗原与检测大豆抗原与检测 sds-pagesds-page大豆抗原检测方法大豆抗原检测方法优点：结果直观优点：结果直观缺点：难以

16、准确定量缺点：难以准确定量发酵豆粕抗原检测（发酵豆粕抗原检测（sds-pagesds-page法）法）豆粕豆粕 1 2 3 4 5 6 7 8 9 样品样品1-9分别分别为不同企业的发为不同企业的发酵豆粕产品酵豆粕产品蛋白哪去了？蛋白哪去了？ sds-pagesds-page结果显示了从豆粕（或发酵豆粕）中提取的结果显示了从豆粕（或发酵豆粕）中提取的可溶性蛋白的检测结果，蛋白的分子量范围可溶性蛋白的检测结果，蛋白的分子量范围10k-200kda10k-200kda。都变成小肽了？都变成小肽了？抗原与抗体之间的特异性结合抗原与抗体之间的特异性结合抗原或抗体的固相化抗原或抗体的固相化抗体或抗原的酶

17、标记，催化底抗体或抗原的酶标记，催化底物显色来进行抗原或抗体的定物显色来进行抗原或抗体的定性以及定量检测性以及定量检测elisaelisa的优点：可准确定量的优点：可准确定量elisaelisa检测不同工艺产品会出现较大误差检测不同工艺产品会出现较大误差试剂盒提取液浸提蛋白的sds-page0.6%koh溶液浸提蛋白的sds-page大豆球蛋白大豆球蛋白mg/gb-b-伴大豆球蛋白伴大豆球蛋白mg/g1148.85132.47 234.5122.79 346.0838.72 451.1589.83 5103.7186.74 666.6851.82 723.476.34 810.434.33 9

18、4.015.26 elisa方法检测对象方法检测对象大豆球蛋白：大豆球蛋白：base亚基亚基伴大豆球蛋白：伴大豆球蛋白：-亚基亚基根源产品致敏亚基消除得最好根源产品致敏亚基消除得最好 分析：a、b elisa检测结果显示-伴大豆球蛋白和我们益生肽产品相差不大，大豆球蛋白益生肽产品比a样的高。但是0.6%koh-sds-page条带a、b样的大豆球蛋白条带都比益生肽深，而且和条带位置下面多了两条很明显的条带，且和豆粕原料不对应。我们的三个样品elisa检测结果和0.6%koh-sds-page处理sds条带基本相同，而且相对应。4.检测方法抗原蛋白抗原蛋白-0.6%koh-sds-page-0.

19、6%koh-sds-page样品名称样品名称水分水分（% %）粗蛋白粗蛋白（% %）小肽小肽( (占粗蛋占粗蛋白，白，%)%)kohkoh溶解溶解度，度，% %）可溶性蛋白可溶性蛋白 mg/g (mg/g (右列为干级右列为干级) )抗原蛋白抗原蛋白mg/g (mg/g (右列为干级右列为干级) )测定值测定值 干级干级0.6%koh0.6%koh处理处理大豆球蛋白提大豆球蛋白提取液取液大豆球蛋白大豆球蛋白-伴球蛋伴球蛋白白 140 140 5min5min8.308.3052.0452.04 56.7556.75 20.1820.1882.0382.03208.01 208.01 226.8

20、4 226.84 84.53 84.53 92.18 92.18 51.56 51.56 56.23 56.23 109.00 109.00 150 150 5min5min6.686.6853.1853.18 56.9956.99 19.9319.9379.2079.20191.94 191.94 205.68 205.68 98.20 98.20 105.23 105.23 46.63 46.63 49.96 49.96 73.71 73.71 160 160 5min5min6.916.9152.9252.92 56.8556.85 17.6517.6575.2675.26158.86

21、158.86 170.65 170.65 131.01 131.01 140.74 140.74 37.51 37.51 40.30 40.30 81.94 81.94 170 170 5min5min3.393.3955.6055.60 57.5557.55 17.7917.7960.5060.50165.95 165.95 171.77 171.77 70.31 70.31 72.77 72.77 12.16 12.16 12.59 12.59 22.65 22.65 180 180 5min5min2.442.4456.0556.05 57.4557.45 15.3415.3443.71

22、43.71112.54 112.54 115.36 115.36 83.43 83.43 85.52 85.52 2.82 2.82 2.89 2.89 7.74 7.74 温度对抗原的影响温度对抗原的影响elisaelisa和和sds-pagesds-page的检测流程和存在问题的检测流程和存在问题称量样品浸泡提取离心取上清离心取上清作为样品作为样品sds-pageelisa存在问题：存在问题： 发酵豆粕不同样品发酵豆粕不同样品的蛋白含量基本相同的蛋白含量基本相同（48-50%），但在），但在同一浸提条件下，提同一浸提条件下，提取的蛋白含量存在取的蛋白含量存在巨巨大差异大差异！根源产品评价体

23、系与优势根源产品评价体系与优势1 1、标准、标准1.1.粗蛋白质：粗蛋白质： 48.0% 48.0%，50.0%50.0%2.2.水分：水分：12.0%12.0%，10.0% 10.0% 3.3.灰分：灰分：7.0% 7.0% 4.ph4.ph： 5.5 5.5 5.vbn5.vbn： 70mg/100g 70mg/100g 6.6.酸溶蛋白（大豆肽或小肽）：酸溶蛋白（大豆肽或小肽）： 9%9%，14%14%7.7.氢氧化钾蛋白质溶解度：氢氧化钾蛋白质溶解度： 70%70%8 8. .l-l-乳酸：乳酸： 2.5%2.5%8.8.总酸（有机酸）：总酸（有机酸）： 3% 3%9.9.抗原：定性抗

24、原：定性0.6%koh-sds-page0.6%koh-sds-page 电泳，定量电泳，定量elisa elisa 10.10.寡糖寡糖 大豆低聚糖（水苏糖、棉子糖、蔗糖）：大豆低聚糖（水苏糖、棉子糖、蔗糖）： 定性：定性：tlctlc薄层层析薄层层析 定量：行业标准定量：行业标准ny/t 2218-2012 ny/t 2218-2012 附录附录a a发酵豆粕水苏糖的含量发酵豆粕水苏糖的含量测定方法测定方法其它：符合其它：符合饲料卫生标准饲料卫生标准2 2、均衡的产品发酵指标、均衡的产品发酵指标 微生物检测3 3、评估方法、评估方法例：如何判断无籽西瓜？例：如何判断无籽西瓜？隔皮猜瓜隔皮猜

25、瓜？不靠谱！不靠谱！为什么不为什么不直接切开直接切开？一目了然一目了然！有些靠谱有些靠谱了了这样呢这样呢？切一小片切一小片？不准确！不准确！ tlctlc薄层层析，寡糖定性检测，豆粕经过我们所筛选的微生物发酵后，薄层层析，寡糖定性检测，豆粕经过我们所筛选的微生物发酵后，不良寡糖蔗糖、棉籽糖、水苏糖都能够有效去除。不良寡糖蔗糖、棉籽糖、水苏糖都能够有效去除。 水苏糖水苏糖3%3%降到降到0.1-0.3%0.1-0.3%，棉籽糖，棉籽糖1%1%降到降到0.4-0.6%0.4-0.6%定性和定量（寡糖tlc检测图和水苏糖高效液相色谱） 4 4、寡糖的检测、寡糖的检测棉籽糖的检测4 4、寡糖的检测、寡

26、糖的检测样品名称样品名称水分水分（% %）粗蛋白粗蛋白（% %）灰分灰分（% %）phphvbn(mgvbn(mg/100g)/100g)小肽，小肽，占蛋白占蛋白(%)(%)l-l-乳酸乳酸（% %）kohkoh溶解溶解度（度（% %）a a11.38 11.38 49.51 49.51 6.57 6.57 4.51 4.51 82.05 82.05 15.12 15.12 3.103.1071.40 71.40 b b8.74 8.74 51.07 51.07 6.34 6.34 4.61 4.61 118.80 118.80 16.44 16.44 3.203.2066.43 66.43

27、c c6.90 6.90 48.04 48.04 6.51 6.51 5.44 5.44 56.58 56.58 17.14 17.14 1.901.9075.89 75.89 根源益生肽根源益生肽8.218.2151.3151.316.256.255.125.1226.2326.2315.3515.353.503.5075.2575.25根源益生肽根源益生肽10.9110.9148.8248.826.236.234.884.8825.2525.2512.1912.193.203.2071.4571.45 分析：a、b样品的ph比益生肽的低，乳酸含量比较高，但是，vbn指标也比益生肽的高，尤其是b特别高，说明产品游离氨或非蛋白氮特别高，根据我们的数据，即时延长发酵周期也不会到82或118mg/g，koh蛋白质溶解度b比a低，在70%以下，说明b的烘干温度过高，美拉德反应比较严重。c水分和粗蛋白数据差异比较大，水分很低，可以断定对方