碱性磷酸酶的分离提取课件_第1页
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1、碱性磷酸酶的分离提取1实验 碱性磷酸酶的分离提取及比活力的测定碱性磷酸酶的分离提取2碱性磷酸酶的分离提取3碱性磷酸酶的分离提取4碱性磷酸酶的分离提取5碱性磷酸酶的分离提取6碱性磷酸酶的分离提取7碱性磷酸酶的分离提取8匀浆液上清液沉淀粗酶液碱性磷酸酶的分离提取9以对硝基苯酚的绝对量(mol数)为横坐标，od405nm值为纵坐标，绘制标准曲线。求出pnp的克分子消光系数()值。8.80103( mol/l)-1cm-1碱性磷酸酶的分离提取102.2.2 酶活力的测定酶活力的测定以0号管调零点，测定各管的od405nm值，从对照标准曲线求出产物的mol数，算出酶活力。碱性磷酸酶的分离提取11碱性磷酸

2、酶的分离提取12碱性磷酸酶的分离提取13avc= (mg/ml)vtb=(u/ml) 21蛋白浓度酶活力计算：式中：a为稀释倍数，b为由标准曲线查得的pnp mol数，t为反应时间，c为由标准曲线查得的蛋白mg数，v1为测定酶活力所用的酶量(ml数) v2为测定酶活力所用的酶量(ml数)酶的比活力（u/mg） 纯化倍数=各步比活力/第一步比活力得率%=各步总活力*100/第一步总活力 酶活力（u/ml）蛋白浓度（mg/ml）碱性磷酸酶的分离提取14步骤总体积 ml蛋白mg/ml总蛋白mg酶活力u/ml总活力u比活力u/mg纯化倍数得率%匀浆过滤液4007.24 20.3 正丁醇处理上清液470 33.8 0.35饱和(nh4)2so4上清液440 35.3 0.7饱和(nh4)2so4沉淀溶解透析上清液40.3 314.7 deae-32酶液9.63.82 1002.2 sephadex g75酶液13.20.49 451.5 sep

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