土壤中有机磷的测定

1、土壤中有机磷的测定 实验方案设计土壤中磷知识总结、土壤中磷的来源及分布：土壤中的磷素来源于成土矿物、有机物质和含磷化学肥料。土壤全磷量不能作为当季作物的土壤供磷的水平指标，但可作为表示土壤潜在肥力的一项指标。土壤磷素分为无机形态和有机形态。无机形态的磷约占全磷的5090，主要包括磷酸钙类化合物（ca-p）、磷酸铁类化合物（fe-p）、磷酸铝类化合物（al-p）和表面为氧化铁胶膜所封闭的闭蓄态磷（o-p）。风化程度较高的土壤，如红壤以o-p和fe-p为主，风化程度较低的土壤以ca-p和al-p为主。有机形态的磷约占全磷1050，主要以磷脂、植素、核酸和核蛋白形式存在。土壤有机磷含量与土壤有机质含

2、量密切相关。土壤有效磷是指当季作物所能吸收的磷。土壤中磷移动性很小。作物吸收的磷主要是土壤溶液中的h2po- 4和hpo2 4-。、磷的营养功能：1、磷是植物体内重要化合物的组成元素；2、磷能加强光合作用和碳水化合物的合成与运转；3、促进氮素代谢；4、磷能促进脂肪代谢；5、提高作物对外界环境的适应性、作物磷素营养失调的症状    缺磷时，各种代谢过程受到抑制，植株生长迟缓、矮小、瘦弱、直立、根系不发达，成熟延迟、籽实细小、植株叶小、叶色暗绿或灰绿、缺乏光泽，主要是细胞发育不良致使叶绿素密度相对提高，同时，fe的吸收间接地促进叶绿素合成，使叶色暗，严重缺磷时，在不少

3、作物茎叶上明显地呈现紫红色的条纹或斑点（花青苷）甚至叶片枯死脱落，症状一般从基部老叶开始。逐渐向上部发展。    缺磷造成玉米果穗秃顶，油菜脱荚，棉花和果树落蕾、落花，甘薯及马铃薯薯块变小，耐贮性变差。 磷素过剩，谷类无效分蘖，秕粒增加，叶肥厚而密，植株早衰。由于磷过多，而引起的病症，通常以缺zn、fe、mg等的失绿症表现出来。土壤中磷的测定方法: 测定土壤速效磷的方法选择，酸性土壤一般采用盐酸氟化铵或氢氧化钠一草酸钠法来提取，石灰性土壤或中性土壤采用碳酸氢钠来提取。用 nahco 3 溶液 (ph8.5) 提取土壤速效磷，在石灰性土壤中提取液中的 hco 3 -

4、 可和土壤溶液中的 ca 2+ 形成 caco 3 沉淀，从而降低了 ca 2+ 的活度而使某些活性较大的 cap 被提取出来。在酸性土壤中因 ph 提高而使 fe-p ， a1-p 水解而部分被提取。实验部分一、实验目的1、了解光度法测定土壤中有效磷的原理及方法2、熟悉分光光度计的使用二、实验原理1、土壤中的磷大部分不能被植物直接吸收利用，易被吸收利用的有效磷通常含量很低。土壤中的有效磷是指能为当季作物吸收的磷量。2.土壤中有效磷的测定方法有：生物方法、同位素方法、阴离子交换树脂方法及化学方法等。其中应用最普遍的是化学方法。它是用浸取剂提取土壤中的一部分有效磷。浸取剂种类很多，它的选择主要根

5、据各种土壤的性质而定。酸性土壤中磷酸铁和磷酸铝形态的有效磷可用酸性氟化铵提取，形成氟铝化铵和氟铁化铵配合物，少量的钙离子形成氟化钙沉淀，磷酸根离子被提取到溶液中来，石灰性土壤则采用碳酸氢钠溶液浸取。3.在含磷的溶液中，加入钼酸铵，在一定酸度条件下，溶液中的磷酸与钼酸络合形成黄色的磷钼杂合酸磷钼黄。h3po4+12h2moo4=h3pmo12o40+12h2o三、主要仪器和试剂 1、 仪器：723分光光度计，10ml吸量管，振荡机，漏斗，滤纸。 2个滴瓶，50ml带塞比色管4个，50ml三角瓶4个，50ml容量瓶6个,25ml容量瓶4个。2、  试剂：（1）  &#

6、160;hcl溶液（0.5mol/l）50ml ：4.5ml浓盐酸+100ml水（2）   nh4f溶液（1mol/l）30ml：称取3.7g氟化铵，溶于100ml蒸馏水中（3）  提取剂：分别移取15ml 1mol/lnh4f溶液和25ml 0.5mol/lhcl溶液，假如460ml蒸馏水中，配制成0.03mol/l nh4f-0.025mol/l hcl溶液（500ml）。（4）   h3bo3溶液（100g/l）100ml ：10g硼酸溶解于水中，稀释至100ml.（5） 15g/l钼酸铵-3.5mol/l盐酸溶液：溶

7、解15g钼酸铵于300ml蒸馏水中，加热至60左右，如有沉淀，将溶液过滤，待溶液冷却之后，慢慢加入350ml 10mol/l hcl溶液，并用玻璃棒迅速搅动，待溶液冷却至室温，用蒸馏水稀释至1l，充分摇匀，储存于棕色瓶中。放置时间不得超过两个月。（6）氯化亚锡溶液（25g/l）：称取氯化亚锡2.5 g溶于10ml浓盐酸中，溶解后加入90ml蒸馏水，混合均匀置于棕色瓶中，此溶液现配现用。（7）磷标准溶液（50g/ml）：准确称取105烘干的kh2po4（a.r）0.2195g，溶解于400ml水中加浓h2so45ml(防止溶液长霉菌)，转入1l容量瓶中，加水稀释至刻度，要匀。准确移取上述磷标准溶

8、液25.00ml于250ml容量瓶中，稀释至刻度，摇匀，即为5g·/m l-1（此溶液不宜久存）。 四、    实验步骤1、吸收池配套性检验 用拇指和食指捏住洗手池毛面，分别在4个吸收池内注入蒸馏水3/4，用滤纸吸干池外壁的水滴，再用擦镜纸擦拭光面至无痕迹，垂直放在吸收池架上，盖上样品室盖，将在参比位置上的吸收池推入光路调零调百。拉动样品槽拉杆，依次将被测溶液推入光路，读取相应的透射比或吸光度。若所测得各吸收池透射比偏差小于0.5%，则这些吸收池可以配套使用编号1234透射比2、在不同波长 条件下测定标准溶液的吸光度：用吸量管吸取磷标准溶液（5µ

9、;g·ml-1）5.0 ml分别放入25 ml容量瓶中，加入0.03mol·l-1nh4f-0.025mol·l-1hcl溶液5-10 ml（按所取滤液毫升数而定），用吸量管加钼酸铵-盐酸溶液5ml，加蒸馏水至瓶颈刻度，并滴加25g·l-1氯化亚锡3滴，摇动后，至溶液有深蓝色出现，用水稀释至刻度，摇匀，放置15分钟，与土样溶液同时显色，用1cm比色皿，以试剂溶液为参比液，于722e型分光光度计中，在440700nm波长范围内分别测定其吸光度a值。当临近最大吸收波长附近时应间隔波长10nm测a值，其他各处可间隔波长20nm测定。然后以波长为横坐 标，所测a

10、值为纵坐标，绘制吸收曲线，并找出最大吸收峰的波长。波长/nm440460480500520540a波长/nm560580600620640660a波长/nm680700670675685690a3、在不同显色剂用量 条件下测定标准溶液的吸光度：按步骤2进行操作，加入不同量的显色剂0、1,00、3.0ml、4.0ml、5.0ml、7.0ml、9.00ml摇匀。用1cm吸收池，以试剂空白为参比溶液，在选定的波长下测吸光度。记录各吸光度。在最大吸光度附近每隔0.10ml测吸光度。氯化亚锡v/ml0.001.003.004.005.007.009.00a4、有色配合物稳定性试验 取两个洁净的容量瓶，用

11、步骤（2）方法配制氯化亚锡有色溶液和试剂空白溶液，放置约2min，立即用1cm吸收池，以试剂空白溶液为参比溶液，在选定的波长下测定吸光度。以后隔10min、20min、30min、60min、120min测定一次吸光度，并记录吸光度和时间。t/min210203060120a5、工作曲线的制作     分别准确移取5µg·ml-1磷标准溶液0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0ml于6个25ml容量瓶中，加入0.03mol·l-1nh4f-0.025mol·l-1hcl溶液5-10 ml（按所取滤液毫升数而定）

12、，用吸量管加钼酸铵-盐酸溶液5ml，加蒸馏水至瓶颈刻度，并滴加25g·l-1氯化亚锡3滴，摇动后，至溶液有深蓝色出现，用水稀释至刻度，摇匀，放置15分钟，与土样溶液同时显色，测其吸光度。v/ml0.001.002.03.004.005.00ac ug/ml 以磷的微克数为横坐标，相应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，6、土壤样品预处理  称取风干土壤样品1g（精确至0.01g）,放入50100ml小塑料瓶（或50ml带塞比色管）中，加入0.03mol·l-1nh4f-0.25mol·l-1hcl溶液20ml，稍摇匀，立即放在振荡机上，振荡30分钟。用无磷干

13、滤纸过滤，滤纸承接于盛有100g·l-1h3bo3溶液15滴的50ml 三角瓶中，摇动瓶内溶液（加h3bo3防止f-1对显色的干扰和腐蚀玻璃仪器）。 7、土壤中有效磷的测定     准确移取上述土壤滤液510ml容量瓶中，用吸量管加入15g·l-1钼酸铵-盐酸溶液5ml，摇匀，加入蒸馏水至瓶颈刻度，滴加25g·l-1.氯化亚锡3滴后，再用水稀释至刻度，充分摇匀。显色15min后，再分光光度计上，以试剂为空白，用1cm比色皿在680nm处测其吸光度值。 测定次数123吸光度a质量浓度g/ml平均质量浓度g/ml相对极差%五、注

14、意事项 用氯化亚锡作还原剂作还原剂生成磷钼盐，溶液的颜色不够稳定，必须严格控制比色时间，一般在显色后的15-20分钟内颜色较为稳定，显色后应准确放置15min后，立即比色，并在5min内完成比色操作。  六、数据处理 七、实验评议与讨论所需仪器与试剂清单1、 仪器723分光光度计，10ml吸量管，振荡机，漏斗滤纸。2个滴瓶，50ml带塞比色管4个，50ml三角瓶4个，50ml容量瓶6个,25ml25ml容量瓶4个。2、 试剂（1）   hcl溶液（0.5mol/l）：4.2ml浓盐酸+100ml水（2）   nh4

15、f溶液（1mol/l）： 称取3.7g氟化铵，溶于100ml蒸馏水中（3）  提取剂：分别移取15ml 1mol/lnh4f溶液和25ml 0.5mol/lhcl溶液，假如460ml蒸馏水中，配制成0.03mol/l nh4f-0.025mol/l hcl溶液（500ml）。（4）   h3bo3溶液（100g/l）100ml ：10g硼酸溶解于水中，稀释至100ml.（5） 15g/l钼酸铵-3.5mol/l盐酸溶液：溶解15g钼酸铵于300ml蒸馏水中，加热至60左右，如有沉淀，将溶液过滤，待溶液冷却之后，慢慢加入350ml 10mol/l hcl溶液，并用玻璃棒迅速搅动，待溶液冷却至室温，用蒸馏水稀释至1l，充分摇匀，储存于棕色瓶中。放置时间不得超过两个月。（6）氯化亚锡溶液（25g/l）：称取氯化亚锡2.5 g溶于10ml浓盐酸中，溶解后加入90ml蒸馏水，混合均匀置于棕色瓶中，此溶液现配现用。（7）磷标准溶液（50g/ml）：准确称取105烘干的kh2po4（a.r）0.2195g，溶解于400ml水中加浓h2so45ml(防止溶液长霉菌)，转入1l容量瓶中，加水稀释至