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文档简介

1、pcr反应原理及其操作反应原理及其操作pcr原理及其操作(高中) pcr原理及其操作(高中)pcr原理及其操作(高中) 4 4种种dntpdntp混合物混合物 各各200umol/l200umol/l（datp,dgtp,dctp,dttp） 引物引物 各各1010100pmol100pmol 模板模板dna dna 0.10.12ug2ug taq dnataq dna聚合酶聚合酶 2.5u2.5u mgmg2+ 2+ 1.5mmol/l1.5mmol/lpcr原理及其操作(高中) 1. dna变性变性（90-96）：双链）：双链dna模板在热作用模板在热作用下，下， 氢键断裂，形成单链氢键

2、断裂，形成单链dna。2. 退火（复性）退火（复性）（25-65）：系统温度降低，引物与）：系统温度降低，引物与dna模板结合，形成局部双链。模板结合，形成局部双链。3. 延伸延伸（70-75）：在）：在taq酶（在酶（在72左右，左右，活性最佳）的作用下，以活性最佳）的作用下，以dntp为原料，为原料，从引物的从引物的5端端3端延伸，合成与模板互端延伸，合成与模板互补的补的dna链。链。pcr原理及其操作(高中)pcr原理及其操作(高中)pcr原理及其操作(高中)pcr原理及其操作(高中)pcr原理及其操作(高中)pcr原理及其操作(高中)pcr原理及其操作(高中)pcr原理及其操作(高中) 在引物作在引物作用下，用下，taq酶酶从从引物引物3端端开开始延伸始延伸dna链，链，即即dna的合成的合成方向是从子链方向是从子链的的5端自端自3端端延伸的延伸的。实际。实际上就是在体外上就是在体外模拟细胞内模拟细胞内dna的复制过的复制过程。程。dna的复的复制需要引物，制需要引物，其主要原因是其主要原因是dna聚合酶只聚合酶只能从能从3端延伸端延伸dna链。链。pcr原理及其操作(高中)pcr原理及

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