酶的生产与分离纯化瑶瑶课件

1、酶的生产与分离纯化瑶瑶1酶的生产与分离纯化酶的生产与分离纯化 酶的生产与分离纯化瑶瑶2 组织提取组织提取 发酵生产发酵生产 化学及生物合成化学及生物合成酶的生产与分离纯化瑶瑶3集中垄断，市场全球化集中垄断，市场全球化： 丹麦诺和诺得公司（诺维信novozymes）美国杰能科（genencor）、芬兰科特和丹麦丹尼斯克酶的生产与分离纯化瑶瑶4 国际以液体、颗粒为主。 国内糖化酶、-淀粉酶、蛋白酶三大类 重要产品系列果胶酶、低温碱性蛋白酶，国内尚未投入生产; 我国7家。 应用领域不断扩大应用领域不断扩大 食品工业占62%酶的生产与分离纯化瑶瑶5 酶的发酵生产：酶的发酵生产： 经过预先设计，通过人工

2、操作控制，利用经过预先设计，通过人工操作控制，利用细胞的生命活动，产生人们所需要酶的过细胞的生命活动，产生人们所需要酶的过程程酶的生产与分离纯化瑶瑶6 能用于酶发酵生产的细胞需能用于酶发酵生产的细胞需具备如下几个具备如下几个条件条件： （1）产酶量高）产酶量高 （2）容易培养和管理）容易培养和管理 （3）产酶稳定性好）产酶稳定性好 （4）利于酶的分离纯化）利于酶的分离纯化 （5）安全可靠）安全可靠酶的生产与分离纯化瑶瑶7 为什么利用微生物产酶？为什么利用微生物产酶？ (1) 种类多、酶种丰富，且菌株易诱变，菌种多样。种类多、酶种丰富，且菌株易诱变，菌种多样。 (2) 生长繁殖快，易提取酶生长繁

3、殖快，易提取酶. (3) 培养基来源广泛、价格便宜。培养基来源广泛、价格便宜。 (4) 微电脑，连续化、自动化，经济效益高。微电脑，连续化、自动化，经济效益高。 (5) 利用以基因工程为主的现代分子生物学技术，利用以基因工程为主的现代分子生物学技术，酶的生产与分离纯化瑶瑶8 产酶种类、产量、发酵条件、工艺。产酶种类、产量、发酵条件、工艺。 主要包括细菌、放线菌、酵母菌、霉菌。主要包括细菌、放线菌、酵母菌、霉菌。酶的生产与分离纯化瑶瑶9 （1）枯草芽孢杆菌）枯草芽孢杆菌 细菌属细菌属 菌落粗糙，不透明菌落粗糙，不透明 生产生产-淀粉酶、蛋白酶、淀粉酶、蛋白酶、-葡聚糖酶，碱性磷酸葡聚糖酶，碱性磷

4、酸酶等。酶等。酶的生产与分离纯化瑶瑶10 （2） 大肠杆菌大肠杆菌 阴性，无芽孢阴性，无芽孢 菌落光滑菌落光滑 用于谷氨酸脱羧酶，天用于谷氨酸脱羧酶，天门冬氨酸酶等门冬氨酸酶等胞内酶胞内酶酶的生产与分离纯化瑶瑶11 （3）黑曲霉）黑曲霉 属于真菌属属于真菌属 糖化酶、淀粉酶、酸糖化酶、淀粉酶、酸性蛋白酶、果胶酶等。性蛋白酶、果胶酶等。酶的生产与分离纯化瑶瑶12 （4） 米曲霉米曲霉 糖化酶、蛋白酶糖化酶、蛋白酶酶的生产与分离纯化瑶瑶13 （5）根霉）根霉 主要用于糖化酶、淀主要用于糖化酶、淀粉酶、转化酶等生产粉酶、转化酶等生产酶的生产与分离纯化瑶瑶14 （6）毛霉）毛霉 蛋白酶、糖化酶、淀蛋白

5、酶、糖化酶、淀粉酶、脂肪酶等。粉酶、脂肪酶等。酶的生产与分离纯化瑶瑶15 （7）链霉菌）链霉菌 葡萄糖异构酶、青葡萄糖异构酶、青霉素酰化酶、纤维霉素酰化酶、纤维素酶、几丁质酶等素酶、几丁质酶等酶的生产与分离纯化瑶瑶16 （8）啤酒酵母）啤酒酵母 转化酶转化酶 丙酮酸脱羧酶丙酮酸脱羧酶酶的生产与分离纯化瑶瑶17 产酶菌株的选育产酶菌株的选育 主要依据主要依据酶催化的反应性质酶催化的反应性质、作用底物的特异作用底物的特异性性、底物和产物的特性底物和产物的特性以及以及酶在细胞中所处的位酶在细胞中所处的位置置。 胞外酶胞外酶：菌落周围的：菌落周围的透明圈、颜色变化来筛选透明圈、颜色变化来筛选。 胞内酶

6、胞内酶：若酶作用底物分子量小可透过细胞膜，：若酶作用底物分子量小可透过细胞膜，将酶反应的产物作为底物，加在培养基中，根据将酶反应的产物作为底物，加在培养基中，根据菌落颜色变化菌落颜色变化。 而多数胞内酶产生菌的筛选：细胞破碎物做酶源，而多数胞内酶产生菌的筛选：细胞破碎物做酶源，经酶反应后，根据经酶反应后，根据酶反应产物的特点来筛选酶反应产物的特点来筛选（辅（辅酶酶nadnad）。酶的生产与分离纯化瑶瑶18 选择性能优良的产酶微生物选择性能优良的产酶微生物 培养基设计培养基设计 选择合适的发酵方式选择合适的发酵方式 发酵过程的各种参数控制发酵过程的各种参数控制酶的生产与分离纯化瑶瑶19保藏细胞保

7、藏细胞细胞活化细胞活化细胞扩大培养细胞扩大培养原生质体原生质体固定化细胞固定化细胞固定化原生质体固定化原生质体预培养预培养发酵发酵发酵发酵分离纯化分离纯化酶酶酶的生产与分离纯化瑶瑶20 主要是碳源、氮源，其次是无机盐、生长因子主要是碳源、氮源，其次是无机盐、生长因子和产酶促进剂等。和产酶促进剂等。酶的生产与分离纯化瑶瑶21（1）碳源）碳源 当前酶制剂生产上使用的菌种大都是只能当前酶制剂生产上使用的菌种大都是只能利用利用有机碳有机碳的异养型微生物。的异养型微生物。吃点啥？吃点啥？酶的生产与分离纯化瑶瑶22 有机碳的主要来源有：一是农副产品中有机碳的主要来源有：一是农副产品中 二是野生的原料二是野

8、生的原料 以石油产品中以石油产品中1216碳的成分碳的成分酶的生产与分离纯化瑶瑶23考虑考虑营养要求营养要求、诱导作用诱导作用、分解代谢分解代谢物阻遏作用物阻遏作用。淀粉酶生产用淀粉酶生产用淀粉淀粉不用不用果糖果糖酶的生产与分离纯化瑶瑶24 （2）氮源）氮源有机氮源和无机氮源有机氮源和无机氮源一般来说，动物细胞、植物细胞、一般来说，动物细胞、植物细胞、异养型微生物、自养型微生物。异养型微生物、自养型微生物。有机氮源和无机氮源配合有机氮源和无机氮源配合我有我要求我有我要求酶的生产与分离纯化瑶瑶25 只用铵盐或硝酸盐为氮源时，酶产量仅为有胨时只用铵盐或硝酸盐为氮源时，酶产量仅为有胨时的的30% 只

9、用有机氮源而不用无机氮源时产量也低只用有机氮源而不用无机氮源时产量也低 使用高浓度有机氮源外尚需添加使用高浓度有机氮源外尚需添加1%3%的无机氮的无机氮源。源。酶的生产与分离纯化瑶瑶26 （3） 碳氮比碳氮比一般蛋白酶 (包括酸性、中性和碱性蛋白酶)低;淀粉酶(包括淀粉酶、糖化酶、淀粉酶等) 高, 在糖化酶生产培养基的碳氮比是最高的。酶的生产与分离纯化瑶瑶27 （4） 无机盐无机盐常以磷酸二氢钾、磷酸氢二钾等磷酸盐常以磷酸二氢钾、磷酸氢二钾等磷酸盐作为作为磷源磷源，以硫酸镁为硫源和，以硫酸镁为硫源和镁源镁源。钙钙 灰色链霉菌中性蛋白酶灰色链霉菌中性蛋白酶 ph77.5 ph57。酶的生产与分离

10、纯化瑶瑶28 钠离子钠离子 控制细胞渗透压酶产量增加，以磷酸氢二钠及控制细胞渗透压酶产量增加，以磷酸氢二钠及硝酸钠等形式，例如米曲霉硝酸钠等形式，例如米曲霉淀粉酶淀粉酶酶的生产与分离纯化瑶瑶29 （5）生长因子）生长因子 微量的物质，或生长素。微量的物质，或生长素。 某些氨基酸、维生素、嘌呤或嘧啶。某些氨基酸、维生素、嘌呤或嘧啶。有你才有你才健康！健康！酶的生产与分离纯化瑶瑶30 （6） 产酶促进剂产酶促进剂 产酶促进剂产酶促进剂 一是诱导物，二是表面活性剂。一是诱导物，二是表面活性剂。表面活性剂能表面活性剂能增加细胞的通透性，改善氧的传递速度，保护增加细胞的通透性，改善氧的传递速度，保护酶的

11、活性。酶的活性。酶的生产与分离纯化瑶瑶31 发酵方式的选择发酵方式的选择 固态发酵法固态发酵法 液体深层发酵法液体深层发酵法酶的生产与分离纯化瑶瑶32 一般来说，培养基成分中碳一般来说，培养基成分中碳/氮氮(c/n)比高，比高，发酵液，发酵液，ph低；低；c/n低，低，ph高。高。 添加缓冲液；调节通风量添加缓冲液；调节通风量.调节培养基的初调节培养基的初始始ph；ph过高糖或淀粉来调节，过高糖或淀粉来调节，ph过低氮过低氮调节。调节。 酶的生产与分离纯化瑶瑶33 一般细菌为一般细菌为37 ，霉菌和放线菌为，霉菌和放线菌为2830 ，而生，而生产糖化酶的最适温度为产糖化酶的最适温度为3740

12、。 微生物代谢反应、发酵中通风、搅拌速度微生物代谢反应、发酵中通风、搅拌速度发酵初期发酵初期菌体繁殖旺盛时菌体繁殖旺盛时酶的生产与分离纯化瑶瑶34 溶解氧而定。目前用于酶制剂生产的微生溶解氧而定。目前用于酶制剂生产的微生物都为好气性微生物，采用自动测定和记物都为好气性微生物，采用自动测定和记录溶解氧的仪表。录溶解氧的仪表。酶的生产与分离纯化瑶瑶35 有利于热交换、营养物质与菌体均匀接触，有利于热交换、营养物质与菌体均匀接触，提高新陈代谢。打破空气气泡，使发酵液形成提高新陈代谢。打破空气气泡，使发酵液形成湍流，提高溶氧量，增加空气利用。湍流，提高溶氧量，增加空气利用。酶的生产与分离纯化瑶瑶36泡

13、沫阻碍了泡沫阻碍了co2的排除，影响溶氧量的排除，影响溶氧量机械消泡，消泡剂机械消泡，消泡剂酶的生产与分离纯化瑶瑶37 1、-淀粉酶的生产淀粉酶的生产 生产菌种：细菌和曲霉，如枯草芽孢杆菌、生产菌种：细菌和曲霉，如枯草芽孢杆菌、黑曲霉等。黑曲霉等。 发酵方法：霉菌，固体曲法；细菌，液体发酵方法：霉菌，固体曲法；细菌，液体深层发酵。深层发酵。 回收方法：盐析、有机溶剂沉淀和淀粉吸回收方法：盐析、有机溶剂沉淀和淀粉吸附等。附等。酶的生产与分离纯化瑶瑶38 2、果胶酶的生产、果胶酶的生产 生产菌种：真菌如曲霉菌、青霉菌，细菌生产菌种：真菌如曲霉菌、青霉菌，细菌如枯草芽孢杆菌、欧氏杆菌。如枯草芽孢杆菌

14、、欧氏杆菌。 发酵：固体曲法和液体深层发酵发酵：固体曲法和液体深层发酵 回收：水提后加入乙醇沉淀。回收：水提后加入乙醇沉淀。酶的生产与分离纯化瑶瑶39酶的生产与分离纯化瑶瑶40 酶的纯化酶的纯化 特定的一种酶在细胞中的含量很少 酶可以通过测定活力加以跟踪酶的生产与分离纯化瑶瑶41 1、可靠和快速的测活方法；、可靠和快速的测活方法； 2、酶原料的选择；、酶原料的选择； 3、酶的提取；、酶的提取； 4、酶的提纯；、酶的提纯； 5、酶的纯度检验。、酶的纯度检验。酶的生产与分离纯化瑶瑶42酶酶提提取取分分离离纯纯化化技技术术路路线线发酵培养发酵培养动物器官动物器官植物组织植物组织微生物微生物提取提取胞

15、内酶胞内酶胞外酶胞外酶细胞破碎细胞破碎研磨研磨酶分离纯化酶分离纯化离心分离，过滤分离，沉淀分离心分离，过滤分离，沉淀分离，层析分离，电泳分离，萃离，层析分离，电泳分离，萃取分离，结晶分离等。取分离，结晶分离等。酶浓缩酶浓缩酶贮存酶贮存酶的生产与分离纯化瑶瑶43机械破碎机械破碎捣碎法捣碎法研磨法研磨法匀浆法匀浆法 物理破碎物理破碎温度差破碎法温度差破碎法压力差破碎法压力差破碎法超声波破碎法超声波破碎法 化学破碎化学破碎有机溶剂：有机溶剂：甲苯、丙酮甲苯、丙酮丁醇、氯仿丁醇、氯仿表面活性剂：表面活性剂：triton、tween酶促破碎酶促破碎自溶法自溶法外加酶制剂法外加酶制剂法通过机械运动产生的剪

16、切通过机械运动产生的剪切力，使组织、细胞破碎。力，使组织、细胞破碎。使组织、细胞的外层结构破使组织、细胞的外层结构破坏坏对细胞膜的作用对细胞膜的作用通过细胞本身的酶系或外通过细胞本身的酶系或外加酶制剂的催化作用，使加酶制剂的催化作用，使细胞外层结构受到破坏，细胞外层结构受到破坏，细胞破碎方法及其原理细胞破碎方法及其原理酶的生产与分离纯化瑶瑶44 (1) 机械 (匀浆) 法 (2) 超声波法 处理的主要问题是超声空穴局部过热引起酶活性丧失，时间应尽可能短，容器周围以冰浴冷却处理。生物组织的破碎酶的生产与分离纯化瑶瑶45 (3) 冻融法 生物组织冰冻后，胞液结成冰晶，使细胞壁胀破。 加入蛋白酶抑制

17、剂，如pmsf(苯甲基磺酰氟)络合剂edta、还原剂dtt (二硫苏糖醇)。(4) 渗透压法(5) 酶消化法酶的生产与分离纯化瑶瑶46 有机溶剂处理 表面活性剂处理 与细胞膜中的磷脂及脂蛋白相互作用使细胞膜结构破坏，增加膜的透过性。酶的生产与分离纯化瑶瑶47盐溶液提取酸溶液提取碱溶液提取有机溶剂提取酶的生产与分离纯化瑶瑶48 温度：一般在00c100c。 ph：在酶的稳定范围内，远离等电点远离等电点ph。 缓冲液：0.15mol/l氯化钠、 0.020.05mol/l磷酸 提取液体积：一般为原料体积的1-5倍。 保护剂：底物、辅酶、某些抗氧化剂、底物、辅酶、某些抗氧化剂、 表面活性剂表面活性剂

18、等。酶的生产与分离纯化瑶瑶49酶的主要提取方法酶的主要提取方法提取方法提取方法使用的溶剂或溶液使用的溶剂或溶液提取对象提取对象盐溶液提取盐溶液提取0.020.020.5mol/l0.5mol/l的的盐溶液盐溶液在低浓度盐溶液中溶在低浓度盐溶液中溶解度较大的酶解度较大的酶酸溶液提取酸溶液提取ph2ph26 6的水溶液的水溶液在稀酸溶液中溶解度在稀酸溶液中溶解度大，且稳定性较好的大，且稳定性较好的酶酶碱溶液提取碱溶液提取ph8ph81212的水溶液的水溶液稀碱溶液中溶解度大稀碱溶液中溶解度大且稳定性较好的酶且稳定性较好的酶有机溶剂提取有机溶剂提取可与水混溶的有机可与水混溶的有机溶剂溶剂与脂质结合牢

19、固或含与脂质结合牢固或含有较多非极性基团的有较多非极性基团的酶酶酶的生产与分离纯化瑶瑶501 1、沉淀分离、沉淀分离2 2、离心分离、离心分离3 3、萃取分离萃取分离4 4、层析分离、层析分离gogogogo5 5、电泳分离、电泳分离go6 6、过滤与膜分离过滤与膜分离go酶的生产与分离纯化瑶瑶511 1、沉淀分离、沉淀分离溶解度降低溶解度降低从溶液中沉淀析出沉淀析出 沉淀分离方法沉淀分离方法 分离原理分离原理 盐析沉淀法盐析沉淀法蛋白质在不同的盐浓度条件下溶解度不同，在酶液中添加一定浓度的中性盐等电点沉淀法等电点沉淀法等电点时溶解度最低，不同的两性电解质有不同的等电点 有机溶剂有机溶剂 沉淀

20、法沉淀法有机溶剂中的溶解度不同 复合沉淀法复合沉淀法在酶液中加入某些物质，使它与酶形成复合物而沉淀下来，选择性变性选择性变性 沉淀法沉淀法选择一定的条件使酶液中存在的某些杂质变性沉淀，而不影响所需的酶酶的生产与分离纯化瑶瑶52p介电常数降低介电常数降低、使酶蛋白脱水酶蛋白脱水 有机溶剂法有机溶剂法酶的生产与分离纯化瑶瑶53 温度 ph 离子强度 蛋白质浓度p 常用于酶的沉淀分离的有机溶剂有乙醇、丙酮、乙醇、丙酮、 异丙醇、甲醇等异丙醇、甲醇等 。 必须与水完全混溶; 不与蛋白质发生反应； 要有较好的沉淀效应； 溶剂蒸汽要无毒，且不易燃。酶的生产与分离纯化瑶瑶54阴阴 极极阳阳 极极ph=pip

21、hpi带正电荷带正电荷带负电荷带负电荷净电荷为零净电荷为零导电率导电率溶解度溶解度渗透压渗透压粘度粘度达到最低达到最低等电点沉淀法等电点沉淀法原因原因:在等电点时，蛋白质分子以双极离子存在，总净在等电点时，蛋白质分子以双极离子存在，总净电荷为零电荷为零, 颗粒无电荷间的排斥作用颗粒无电荷间的排斥作用,易凝集成大颗粒，易凝集成大颗粒，因而最不稳定，溶解度最小，易沉淀析出。因而最不稳定，溶解度最小，易沉淀析出。 电泳分电泳分离离沉淀分离沉淀分离酶的生产与分离纯化瑶瑶55 ph=pi 溶解度最小溶解度最小 等电点沉淀与分离等电点沉淀与分离大部或全部沉淀下来大部或全部沉淀下来phpi蛋白质的分离蛋白质

22、的分离沉淀出来的蛋白质可保持天然构象，能再溶解沉淀出来的蛋白质可保持天然构象，能再溶解于水并具有生物活性。于水并具有生物活性。酶的生产与分离纯化瑶瑶56 离心分离离心分离离心力离心力使不同大小、不同密度的物质分离。颗粒大小、密度和特性的不同颗粒大小、密度和特性的不同离心的形式离心的形式：p 离心沉降p 离心过滤p 离心分离和超离心酶的生产与分离纯化瑶瑶57超速离心机超速离心机高速离心机高速离心机沉降离心机沉降离心机酶的生产与分离纯化瑶瑶58萃取分离萃取分离利用物质在两相中的溶解度不同。两相中的溶解度不同。两相一般互互不相溶不相溶 有机溶剂萃取有机溶剂萃取双水相萃取双水相萃取超临界萃取超临界萃取

23、反胶束萃取反胶束萃取 酶的生产与分离纯化瑶瑶59 常用的溶剂：醇、酮、丁醇、苯酚等。常用的溶剂：醇、酮、丁醇、苯酚等。 萃取条件：萃取条件：00c100c。接触时间尽可能短。接触时间尽可能短。酶的生产与分离纯化瑶瑶60p利用生物物质在双水相体系中的利用生物物质在双水相体系中的选择性分配选择性分配。 p影响分配的因素：影响分配的因素： 双水相的性质、分离物质的性质、双水相的性质、分离物质的性质、 离子性质、环境因素离子性质、环境因素 酶的生产与分离纯化瑶瑶61利用混合物中各组分的利用混合物中各组分的物理化学性质的差别物理化学性质的差别，使，使各组分以不同程度分布在两个相中，并以不同速各组分以不同

24、程度分布在两个相中，并以不同速度移动。度移动。酶的生产与分离纯化瑶瑶62欲分离的混合溶液自柱顶欲分离的混合溶液自柱顶加入加入 洗脱剂。洗脱剂。解吸、吸附、再解吸、再解吸、吸附、再解吸、再吸附吸附 吸附层析酶的生产与分离纯化瑶瑶63 洗脱剂的选择洗脱剂的选择 极性种类有：醇、酮、酚等醇、酮、酚等。洗脱剂的选择要注意下列各点：洗脱剂的选择要注意下列各点：洗脱剂不会与吸附剂起化学反应，不会使吸附剂洗脱剂不会与吸附剂起化学反应，不会使吸附剂溶解；溶解；洗脱剂对混合液中的各组分的溶解度大，粘度小，洗脱剂对混合液中的各组分的溶解度大，粘度小，流动性好流动性好纯度纯度酶的生产与分离纯化瑶瑶64离子交换剂上的

25、可解离基可解离基团（活性基团）对各种离团（活性基团）对各种离子的亲和力不同子的亲和力不同阳离子交换剂阳离子交换剂阴离子交换剂阴离子交换剂 离子交换层析离子交换层析酶的生产与分离纯化瑶瑶65凝胶过滤凝胶过滤分子筛层析分子筛层析以各种多孔凝胶为固定相，利用流动相中所含各种组分的相对分子质量不同 凝胶层凝胶层析析酶的生产与分离纯化瑶瑶66 溶质分子的大小 操作方便，不会使物质变性，反复使用 凝胶层析剂的容量比较低酶的生产与分离纯化瑶瑶67酶的生产与分离纯化瑶瑶68 葡聚糖凝胶葡聚糖凝胶 琼脂糖凝胶琼脂糖凝胶 聚丙烯酰胺凝胶聚丙烯酰胺凝胶 酶的生产与分离纯化瑶瑶69生物分子与配基之间所具有的专一而又可

26、逆专一而又可逆的亲和力酶与底物酶与底物酶与竞争性抑制剂酶与竞争性抑制剂抗原与抗体抗原与抗体酶酶rnarna与互补的与互补的rnarna分子或分子或片段片段rnarna与互补的与互补的dnadna分子分子或片段或片段 亲和层析酶的生产与分离纯化瑶瑶70根据欲分离组分与配基的结合特性,亲和层析可以分为：共价亲和层析共价亲和层析 疏水层析疏水层析金属离子亲和层析金属离子亲和层析免疫亲和层析免疫亲和层析染料亲和层析染料亲和层析 凝集素亲和层析凝集素亲和层析 酶的生产与分离纯化瑶瑶71分配层析分配层析利用各组分在两相中的分配系数不同固定相、流动相固定相、流动相 在流动相的带动流经固定相 动态分配。 纸上

27、层析纸上层析 分配薄层层析分配薄层层析 分配气相层析分配气相层析酶的生产与分离纯化瑶瑶72电泳分离电泳分离使用的支持体的不同： 薄层电泳薄层电泳 纸层析纸层析 薄膜电泳薄膜电泳 凝胶电泳凝胶电泳 自由电泳自由电泳 等电聚焦电泳等电聚焦电泳 本身所带的净电荷量本身所带的净电荷量、颗粒形颗粒形状颗粒大小状颗粒大小、电场强度电场强度、溶液溶液phph值值、离子强度离子强度、支持体的特支持体的特性性酶的生产与分离纯化瑶瑶73过滤与膜分离过滤与膜分离借助于借助于过滤介质，滤纸、滤布、纤维过滤介质，滤纸、滤布、纤维过滤过滤非膜过滤：采用高分子膜以外的物质作为过滤介质非膜过滤：采用高分子膜以外的物质作为过滤介质 膜过滤：采用各种膜过滤：采用各种高分子膜高分子膜为过滤介质为过滤介质 酶的生产与分离纯化瑶瑶74 膜分离过程中，薄膜的作用是选择性地让选择性地让小于小于其孔径的物质颗粒或分子通过其孔径的物质颗粒或分子通过，而把大于其孔径的颗粒截留。膜分离加压膜分离加压膜分离 微滤微滤超滤超滤反渗透反渗透电场膜分离电场膜分离 电渗析电渗析 离子交换膜电渗析离子交换膜电渗