Agilent_1260_HPLC_工作原理及简单操作

1、Agilent 1260 HPLC 工作原理工作原理及简单操作及简单操作 10-12-2012Agilent 1260 HPLC 工作原理及简单操作工作原理及简单操作 培训目的： 1.了解HPLC各模块的原理； 2. 掌握HPLC各模块日常维护的要点； 3. 掌握开机，关机。Agilent 1260 HPLC 工作原理及简单操作工作原理及简单操作 内容： 一、 HPLC各模块的原理及维护； 二、开机/关机操作； 三、讨论； 四、评估。一一 、 HPLC各模块工作原理及维护各模块工作原理及维护 HPLC： 高效液相色谱仪（High Performances Liquid Chromatograp

2、hy）。 由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几个部分组成。 工作时储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经样品进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱（固定相）内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中做相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。关于溶剂关于溶剂HPLC各模块的工作原理及维护所有溶剂应为HPLC级，水应为二次超纯水；所有溶剂应经过过滤。过滤水应使用水相滤膜，过滤有机相应使用有机相滤膜，不能混用。每一次滤

3、膜只能用一次，不能重复使用；如果没有在线脱气机，所有溶剂应经过超声脱气；水易滋生藻类，避免直接照射，过滤水最好使用不要超过两天；如果条件允许可向溶剂中加入0.001-0.0001M的叠氮化钠；注意溶剂的相容性，避免使用不相容的溶剂；避免使用强酸、强碱或有机氯等腐蚀性溶剂；在溶剂瓶中的溶剂过滤头可能会堵塞，必要时小心拿下用强酸（35%硝酸）浸泡时，用水冲洗，但不要使用超声处理。关于在线真空脱气机关于在线真空脱气机在线真空脱气机的管路容量为12ml，压力范围为110Torr-190Torr。为保证脱气机的良好使用性能，在下述情况下需要用注射器抽洗脱气机管路，每个通道使用不低于30ml的异丙醇。1，

4、新的脱气机或新的管路；2，更换了溶剂，尤其是缓冲盐与有机相之间、两个不相容流动相之间的互换时；3，输液泵关闭了一段时间，或使用挥发性溶剂混合物。HPLC各模块的工作原理及维护关于泵：（四元泵）关于泵：（四元泵）HPLC各模块的工作原理及维护关于泵（泵头组件）关于泵（泵头组件）出口球阀BOV清洗阀Purge Valve柱塞杆Piston主动输入阀AVHPLC各模块的工作原理及维护活塞外框架Seal Wash组件泵头密封垫泵腔更换过滤白头更换过滤白头在清洗阀中的过滤白头需要更换，在清洗状态下，设置流量为5ml/min，此时系统压力如果超过10bar，则需更换过滤白头。更换步骤：1，关闭泵电源；2，

5、用扳手去掉通往进样器上的毛细管，拔掉废液管；3，用专用扳手小心把清洗阀卸下来；4，轻轻去掉聚四氟乙烯密封垫和金密封垫，将过滤白头拿出；5，更换新的过滤白头，装上聚四氟乙烯密封垫和金密封垫；6，装上清洗阀；7，连接管路。过滤白头聚四氟乙烯密封垫金密封垫清洗阀PurgeValveHPLC各模块的工作原理及维护更换过滤白头更换过滤白头1，去掉毛细管，废液管2，卸掉清洗阀3，更换过滤白头4，更换白头，装好清洗阀HPLC各模块的工作原理及维护泵的注意事项泵的注意事项1，溶剂的过滤、脱气；2，避免使用腐蚀性溶剂；3，在满足分析的前提下，尽可能使用较低的流速较低的系统压力。4，更换过滤白头；5，考虑溶剂的相

6、容性；6，尽可能使用新鲜的水；7，使用0.01M以上浓度的缓冲溶液要选配柱塞清洗组件，清洗液不能干涸。8，使用正相溶剂比如环己烷时，建议使用聚乙烯密封垫，部件号为0905-1420，在0200Bar下使用聚乙烯密封垫比标准密封垫更耐磨损。四元泵： 四元泵多通道比例阀MCGV使用时注意，缓冲溶液要放在A、D通道，以避免盐颗粒析出。建议A通道：水；B、C通道：有机溶剂；D通道：缓冲溶液。HPLC各模块的工作原理及维护样品准备样品完全溶解在流动相中样品没有完全溶解过滤样品，确保样品中不含固体颗粒用流动相或比流动相弱的溶剂溶解样品进样量尽量小关于进样器HPLC各模块的工作原理及维护关于进样器准备位置准

7、备位置调用样品瓶调用样品瓶吸样品吸样品进样和运行位置进样和运行位置标准进样过程标准进样过程 .HPLC各模块的工作原理及维护自动进样器自动进样器样品要干净、经过过滤。样品要干净、经过过滤。l洗针：把样品残留降低到最洗针：把样品残留降低到最小限度，可降低进样的记忆小限度，可降低进样的记忆效应，洗针瓶最好不要加瓶效应，洗针瓶最好不要加瓶垫。垫。l多次吸液多次吸液用于进样量大于用于进样量大于100100ululHPLC各模块的工作原理及维护关于恒温柱箱关于恒温柱箱控制范围：最高80C，低温低于室温10C。预热块体积左面为3ul，右面为6ul，除非有特殊要求，左右温度应保持一致。一定要关闭前面板。HP

8、LC各模块的工作原理及维护关于原理关于原理HPLC各模块的工作原理及维护关于色谱柱保护关于色谱柱保护 过滤所有的溶剂和样品过滤所有的溶剂和样品 使用保护柱使用保护柱 仪器在使用完毕，要冲洗整个系统，移走系统中的缓冲液。仪器在使用完毕，要冲洗整个系统，移走系统中的缓冲液。 柱子在不使用时，两端密封保存柱子在不使用时，两端密封保存 在适当的溶剂中保存柱子在适当的溶剂中保存柱子 注意色谱柱的注意色谱柱的pHpH值使用范围值使用范围 不要高压冲洗柱子不要高压冲洗柱子 不要高温下过长时间使用硅胶键合相不要高温下过长时间使用硅胶键合相HPLC各模块的工作原理及维护检测器检测器DADDAD (Diode A

9、rray Detector)二极管阵列检测器，是以光电二极管阵列作为检测元件的UV-VIS检测器.DAD的光源氘灯有一定的半衰期，一般为1000小时左右，所以在没有样品分析任务时要关闭氘灯，以延长氘灯的使用寿命,但是也不要频繁的开关,这样也会影响寿命。同时，打开灯需要预热10min 左右，灯使用时间越长，预热的时间也要越长。流动池污染后，会造成灵敏度下降、噪声加大，应避免脏的样品进入流动池。定期使用异丙醇冲洗系统对保持流动池性能有一定好处。HPLC各模块的工作原理及维护检测器检测器DADHPLC各模块的工作原理及维护检测器检测器FLDHPLC各模块的工作原理及维护FLD(Fluorescenc

10、e Detector) 荧光检测器：是利用某些溶质在受到紫外光激发后，能发射可见光（荧光）的性质来检测的。FLD是一款具有高度灵敏度和高度选择性的检测器。其激发光源是氙灯，此灯不需要预热。其流通池和DAD的一样，也要定期用异丙醇冲洗，以保证性能。检测器检测器RIDHPLC各模块的工作原理及维护二、二、 开机开机/关机操作关机操作Seal washComputerPowerChemstationPurge开机操作：1，打开计算机。2，打开LC各模块的电源，等待仪器自检完毕，1-2min。3，双击桌面上“Instrument 1 Online”图标，进入化学工作站,在工作站打开各工作模块。4，打开

11、Seal Wash清洗液开关，清洗10min。5，打开清洗阀，排除系统中的气泡，平衡差不多30min.6, 拧上清洗阀，将流量设为所需流速，平衡30min即可以打样。关机操作：1，如果使用了缓冲溶液流动相应先用水冲洗系统30min。2，用纯有机相冲洗系统30min。3，在工作站上关闭各个模块。4，退出工作站，关闭计算机。5，关闭LC各个模块的电源。二、二、 开机开机/关机操作关机操作指示灯状态指示灯状态每个部件接通电源后LED灯显示绿色关机 power off准备进样 power on没准备好Not Ready运行Run故障Error驻留ResidentBlink仪器LED状态显示电源开关显示

12、黑Black黑Black黄Yellow绿Green红Red黄闪烁Yellow blinking6种LED仪器状态：开机/关机操作逆时针旋转打开清洗阀，清洗阀打开时，液体从废液管中流出，为清洗状态。更换溶剂后，打开清洗阀，设置流量5ml/min，冲洗5-10 min.顺时针旋紧清洗阀为关闭状态,此时流动相由毛细管流向进样器.逆时针打开清洗阀顺时针关闭清洗阀毛细管出口,流向进样器废液管,清洗阀打开时溶剂由此流向废液瓶.开机/关机操作清洗阀清洗阀Purge Valve每次用过仪器后必须做每次用过仪器后必须做! !整台液相色谱仪的维护整台液相色谱仪的维护1. 在使用过含盐缓冲液后必须清水冲洗泵15分钟，此时 必须打开排放阀，不能使废液进入色谱柱。2. 关上排放阀，用90%+10%的水、甲醇溶液冲