基因工程的基本操作程序ppt课件

1、1.2 基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序1复习复习1.什么是基因工程？什么是基因工程？2.基因工程的基本工具有哪些？基因工程的基本工具有哪些？3.基因工程的最大优点？基因工程的最大优点？4.“分子手术刀分子手术刀”、“分子缝合针分子缝合针”和和“分子运输车分子运输车” 分别指什么？分别指什么？5.质粒的本质、特点是什么？载体的种类、必须具备的条件？质粒的本质、特点是什么？载体的种类、必须具备的条件？21.目的基因目的基因的获取的获取2.基因表达基因表达载体的构建载体的构建3.将目的基因将目的基因导入受体细胞导入受体细胞4.目的基因的目的基因的检测与鉴定检测与鉴定基因工程的基本操作分

2、四个步骤基因工程的基本操作分四个步骤有了目的基因，我们才能赋予一种生物以另一种生物的遗传特有了目的基因，我们才能赋予一种生物以另一种生物的遗传特性性使目的基因在受体细胞中稳定存在，并可进行遗传、表达和发挥使目的基因在受体细胞中稳定存在，并可进行遗传、表达和发挥作用作用 载体进入受体细胞稳定表达，才能实现一种生物的基因在另一载体进入受体细胞稳定表达，才能实现一种生物的基因在另一种生物体内的转化种生物体内的转化才能确定目的基因是否真正在受体细胞中稳定遗传和正确表达才能确定目的基因是否真正在受体细胞中稳定遗传和正确表达3一、目的基因的获取一、目的基因的获取（一）目的基因的概念：（一）目的基因的概念：

3、 编码蛋白质的结构基因编码蛋白质的结构基因,也可以是一些具有调控作用的因子也可以是一些具有调控作用的因子（二）获取目的基因的常用方法有哪些（二）获取目的基因的常用方法有哪些?1.从基因文库中获取从基因文库中获取2.利用利用PCR技术扩增技术扩增3.人工合成人工合成41.从基因文库中直接获取从基因文库中直接获取（1）基因文库的概念：）基因文库的概念：（2）基因文库的分类）基因文库的分类:种类种类基因组文库：含有一种生物的全部基因基因组文库：含有一种生物的全部基因部分基因文库：只包含了一种生物的部分基因，如：部分基因文库：只包含了一种生物的部分基因，如：cDNA文库文库（3）获取目的基因的依据：）

4、获取目的基因的依据：5某生物体内全部某生物体内全部DNA 许多许多DNA片段片段受体菌群体受体菌群体（4）基因文库的构建方法）基因文库的构建方法限制酶限制酶与运载体与运载体连接连接基因组文库基因组文库某种生物某个时期的某种生物某个时期的mRNAcDNA反转录反转录受体菌群体受体菌群体与运载体与运载体连接连接部分基因文库部分基因文库（cDNA文库）文库）导入导入导入导入6基因组文库的构建基因组文库的构建通过对受体菌的培养而通过对受体菌的培养而储存基因储存基因7 cDNA文库的构建文库的构建-反转录法：反转录法： 以目的基因转录成的信使以目的基因转录成的信使RNARNA为模板，反转录为模板，反转录

5、成互补的单链成互补的单链DNADNA，然后在酶的作用下合成双链，然后在酶的作用下合成双链DNADNA，从而获得所需的基因。，从而获得所需的基因。目的基因的目的基因的mRNAmRNA单链单链DNADNA反转录酶反转录酶DNADNA聚合酶聚合酶双链双链DNADNA( (目的基因目的基因) )8 概念：概念：PCR全称为全称为_，是一项在生物，是一项在生物_复制复制_的核酸合成技术。的核酸合成技术。 条件：条件：_、_ 、 _、_原理：原理：_方式：以方式：以_方式扩增，即方式扩增，即_结果：结果：聚合酶链式反应聚合酶链式反应体外体外特定特定DNA片段片段DNA复制复制已知基因的核苷酸序列（前提）已

6、知基因的核苷酸序列（前提）四种脱氧核苷酸四种脱氧核苷酸一对引物一对引物耐热的耐热的DNA聚合酶（聚合酶（Taq酶）酶）指数指数2n使目的基因的片段在短时间内成百使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增万倍地扩增2.利用利用PCR技术扩增目的基因技术扩增目的基因9过程：过程：a.DNA变性变性(90-95):双链双链DNA模板在热作用模板在热作用下，下，_断裂，形成断裂，形成_。b.退火退火(复性复性55-60):系统温度降低，引物与系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部模板结合，形成局部_。 c.延伸延伸(70-75):在在Taq酶的作用下，从引物酶的作用下，从引物处延伸，合成与模板互补

7、的处延伸，合成与模板互补的_。 氢键氢键单链单链DNA双链双链DNA链链10PCR技术扩增与技术扩增与DNA复制的比较复制的比较PCR技术技术DNA复制复制相同相同点点原理原理原料原料条件条件不同不同点点解旋方式解旋方式场所场所酶酶结果结果碱基互补配对碱基互补配对四种脱氧核苷酸四种脱氧核苷酸模板、能量、酶模板、能量、酶DNA在高温下变性解旋在高温下变性解旋解旋酶催化解旋酶催化体外复制体外复制主要在细胞核主要在细胞核热稳定的热稳定的DNA聚合酶聚合酶细胞内的细胞内的DNA聚合酶聚合酶大量的大量的DNA片段片段形成整个形成整个DNA分子分子11目的基因的目的基因的mRNA单链单链DNA (cDNA

8、）双链双链DNA(即目的基因即目的基因)反转录反转录合成合成1）反转录法：）反转录法：以目的基因转录成的信使以目的基因转录成的信使RNA为模板，反转录成互为模板，反转录成互补的单链补的单链DNA，然后在酶的，然后在酶的作用下合成双链作用下合成双链DNA，从而获得所需的基因。，从而获得所需的基因。蛋白质的氨蛋白质的氨基酸序列基酸序列mRNA的核的核苷酸序列苷酸序列结构基因的核苷结构基因的核苷酸序列酸序列目的基因目的基因推测推测化学合成化学合成2）根据已知的氨基酸序列合成）根据已知的氨基酸序列合成DNA法法 ：3.人工合成目的基因人工合成目的基因12 1.下列属于获取目的基因的方法的是下列属于获取

9、目的基因的方法的是 利用利用mRNA反转录形成从基因组文库中提取从受体细胞中提取利用反转录形成从基因组文库中提取从受体细胞中提取利用PCR技术合成技术合成利用利用DNA转录形成转录形成 人工合成人工合成A. B. C. D. D13二、基因表达载体的构建二、基因表达载体的构建基因工程的基因工程的 核心核心1.1.目的：目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。能够表达和发挥作用。启动子启动子插入基因插入基因表达载体表达载体复制原点复制原点抗生素基因抗生素基因终止子终止子基因表

10、达载体模式图基因表达载体模式图142.基因表达载体的组成基因表达载体的组成(1)启动子启动子(2)终止子终止子(3)目的基因目的基因(4)标记基因等标记基因等它们各自的作用是什么它们各自的作用是什么? ?启动子启动子插入基因插入基因表达载体表达载体复制原点复制原点抗生素基因抗生素基因终止子终止子15知识点一知识点一 原核细胞的基因结构原核细胞的基因结构非编码区非编码区非编码区非编码区编码区编码区编码区上游编码区上游 编码区下游编码区下游 与与RNA聚合酶结合位点聚合酶结合位点启动子启动子终止子终止子能转录相应的信使能转录相应的信使RNA，能，能编码蛋白质编码蛋白质 编码区：编码区：非编码区非编

11、码区原核细胞原核细胞的基因结的基因结构构有调控遗传信息表达的核苷酸序列，在该序列中，最重要的有调控遗传信息表达的核苷酸序列，在该序列中，最重要的是位于编码区上游的是位于编码区上游的RNA聚合酶结合位点。聚合酶结合位点。包括启动子和终止子包括启动子和终止子不能转录为信使不能转录为信使RNA，不能编码蛋，不能编码蛋 白质。白质。16非编码区非编码区非编码区非编码区编码区编码区编码区上游编码区上游 编码区下游编码区下游 启动子启动子终止子终止子启动子启动子:位于基因首端的一段能与位于基因首端的一段能与RNA聚合酶结合并能起始聚合酶结合并能起始mRNA合成的序列。没有启动子，基因合成的序列。没有启动子

12、，基因就不能转录。就不能转录。RNA聚合酶聚合酶:能够识别启动子上的结合位点并与其结合的一种蛋白质。能够识别启动子上的结合位点并与其结合的一种蛋白质。(以模板转录然后脱落以模板转录然后脱落)终止子终止子:位于基因尾端的一段特殊的位于基因尾端的一段特殊的DNA片断，它能阻碍片断，它能阻碍RNA聚合酶的移动，并使其从聚合酶的移动，并使其从DNA模板链模板链上脱离下来，使转录终止。上脱离下来，使转录终止。17真核细胞的真核细胞的基因结构基因结构编码区编码区非编码区：非编码区：外显子外显子:能编码蛋白质的序列能编码蛋白质的序列有调控作用的核苷酸序列，包括位于编码区上游的有调控作用的核苷酸序列，包括位于

13、编码区上游的RNA聚合酶结聚合酶结合位点等。合位点等。编码区编码区非编码区非编码区非编码区非编码区与与RNA聚合酶聚合酶结合位点结合位点内含子内含子 外显子外显子 启动子启动子终止子终止子编码区上游编码区上游 编码区下游编码区下游 内含子内含子:不能编码蛋白质的序列不能编码蛋白质的序列知识点二知识点二 真核细胞的基因结构真核细胞的基因结构18原核细胞原核细胞真核细胞真核细胞不同点不同点编码区是编码区是_的的编码区是间隔的、编码区是间隔的、_的的相同点相同点都由能够编码蛋白质的都由能够编码蛋白质的_和具有调控作用的和具有调控作用的_区组成的区组成的原核细胞与真核细胞的基因结构比较原核细胞与真核细

14、胞的基因结构比较连续连续不连续不连续编码区编码区非编码非编码19在细胞质中在细胞质中将将mRNA分离并分离并加入反转录酶加入反转录酶合成第二条合成第二条DNA链链外显子外显子内含子内含子外显子外显子外显子外显子内含子内含子真核细胞的基因真核细胞的基因在细胞核内转录在细胞核内转录RNA在核内内含子在核内内含子被切去，外显子被切去，外显子彼此连接彼此连接在细胞质中将在细胞质中将mRNA分离并分离并加入加入反转录酶反转录酶合成第二条合成第二条DNA链链基因的基因的cDNA不含不含内含子内含子mRNA原核细胞的基因原核细胞的基因在细胞质内转录在细胞质内转录20启动子：位于基因的启动子：位于基因的首端的

15、一段特殊的首端的一段特殊的DNA片断，它是片断，它是RNA聚合酶聚合酶识别和结合的部位，识别和结合的部位，有了它才能驱动基因有了它才能驱动基因转录出转录出mRNA，最终，最终获得蛋白质。获得蛋白质。终止子：位于基因的尾端的一段特殊的终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断，能终止片断，能终止mRNA的转录。的转录。标记基因：为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将有目的基因的细胞筛选出来。标记基因：为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将有目的基因的细胞筛选出来。启动子启动子插入基因插入基因表达载体表达载体复制原点复制原点抗生素基因抗生素基因终止子终止子21质粒质粒DNA分子分子限制酶

16、处理限制酶处理一个切口一个切口两个黏性末端两个黏性末端二个切口二个切口获得目的基因获得目的基因DNA重组重组DNA分子（重组质粒）分子（重组质粒）同一种同一种3.过程过程:连接酶连接酶22切割质粒和目的基因的限制酶必须是同一种酶，以获得相同的粘性末端，利于重组质粒的构切割质粒和目的基因的限制酶必须是同一种酶，以获得相同的粘性末端，利于重组质粒的构建。建。插入的目的基因只是结构基因部分，其表达需要调控序列，因而用作载体的质粒的插入部位插入的目的基因只是结构基因部分，其表达需要调控序列，因而用作载体的质粒的插入部位前须有启动子，后须有终止子。前须有启动子，后须有终止子。注意：注意：23资资料料科学

17、家在培育抗虫棉时，科学家在培育抗虫棉时，起初把苏云金芽孢杆菌的起初把苏云金芽孢杆菌的抗虫基因插入载体质粒中，抗虫基因插入载体质粒中，然后导入棉花的受精卵中，然后导入棉花的受精卵中，结果抗虫基因在棉花体内结果抗虫基因在棉花体内没有表达。没有表达。 启动子启动子插入基因插入基因表达载体表达载体复制原点复制原点抗生素基因抗生素基因终止子终止子然后在插入抗虫基因的质粒中插入抗虫基因然后在插入抗虫基因的质粒中插入抗虫基因启动子，导入棉花受精卵，长成的棉花植株启动子，导入棉花受精卵，长成的棉花植株还是没有抗虫能力。科学家又在有启动子、还是没有抗虫能力。科学家又在有启动子、抗虫基因的质粒中插入抗虫基因终止子

18、，抗虫基因的质粒中插入抗虫基因终止子，导入棉花受精卵，结果成长的植株，有了导入棉花受精卵，结果成长的植株，有了抗虫能力。抗虫能力。 资料证明：载体构建组成要完整资料证明：载体构建组成要完整载体与表达载体的区别：二者都有标记基因和复制原点两部分载体与表达载体的区别：二者都有标记基因和复制原点两部分DNA片段。表达载体在载体基础片段。表达载体在载体基础上增加了目的基因、启动子、终止子三部分结构上增加了目的基因、启动子、终止子三部分结构用到的工具酶：既用到限制酶切割载体，又用到用到的工具酶：既用到限制酶切割载体，又用到DNA连接酶将目的基因和载体拼接，两种酶作连接酶将目的基因和载体拼接，两种酶作用的

19、化学键都是磷酸二酯键用的化学键都是磷酸二酯键启动子、终止子对于目的基因表达必不可少启动子、终止子对于目的基因表达必不可少目的基因不能单独进入受体细胞，必需以目的基因不能单独进入受体细胞，必需以表达载体的方式携带进去。表达载体的方式携带进去。注意注意25三、将目的基因导入受体细胞三、将目的基因导入受体细胞(一一)转化：转化： (二二)转化转化 方法方法将目的基因导入将目的基因导入植物细胞植物细胞将目的基因导入将目的基因导入动物细胞动物细胞将目的基因导入将目的基因导入微生物细胞微生物细胞农杆菌转化法农杆菌转化法基因枪法基因枪法花粉管通道法花粉管通道法显微注射法显微注射法感受态细胞感受态细胞目的基因

20、进入目的基因进入_内，并且在受体细胞内维持内，并且在受体细胞内维持_和和_的过程的过程受体细胞受体细胞稳定稳定表达表达261.将目的基因导入植物细胞的方法：将目的基因导入植物细胞的方法：易感染双子叶植物和裸子植物，对易感染双子叶植物和裸子植物，对大多数单子叶植物没有感染能力大多数单子叶植物没有感染能力 农杆菌特点：农杆菌特点：（1）农杆菌转化法）农杆菌转化法2728原理：原理：Ti质粒上的质粒上的T-DNA可以转移到可以转移到受体细胞，并整合到受体细胞染色体的受体细胞，并整合到受体细胞染色体的DNA上。上。293031过程：过程：优点：比较经济和有效优点：比较经济和有效Ti质粒质粒T-DNA携

21、带外源携带外源基因的基因的DNA构建表达载体构建表达载体转入转入农杆菌农杆菌含目的基因的含目的基因的重组重组Ti质粒质粒导入植物细胞导入植物细胞植物细胞植物细胞将目的基因插入将目的基因插入染色体的染色体的DNA中中表现出新性状表现出新性状的植株的植株农杆菌转化法示意图农杆菌转化法示意图32Hind限制性酶限制性酶HindIIIHindIII目的目的DNATi质粒质粒苏云金杆菌苏云金杆菌构建表达载体构建表达载体Bt毒素毒素蛋白基因蛋白基因 苏云金杆苏云金杆菌菌T-DNA(可转移可转移-DNA) 农杆菌转化法的过程：农杆菌转化法的过程：目的目的DNAamp黏性末端黏性末端在质粒的在质粒的tet基因

22、内切开基因内切开目的目的DNA质粒和外源质粒和外源DNA的的Hind限制性酶切示意限制性酶切示意图图DNA连接酶连接酶33脱分化脱分化导入植物细胞通过组织培养产生新个体导入植物细胞通过组织培养产生新个体再分化再分化移植移植个体生物学个体生物学水平的鉴定水平的鉴定如虫吃后中毒死亡，则说明如虫吃后中毒死亡，则说明摄入了抗虫基因并得到表达摄入了抗虫基因并得到表达导入植物细胞导入植物细胞组织培养组织培养农杆菌农杆菌34（2）基因枪法：适合单子叶植物基因枪法：适合单子叶植物（3）花粉管通道法：如抗虫棉花粉管通道法：如抗虫棉目的目的基因基因子房子房花粉管通道法花粉管通道法352.将目的基因导入动物细胞将目

23、的基因导入动物细胞方法：显微注射法方法：显微注射法程序：程序：目的基因表达载体提纯目的基因表达载体提纯取卵（受精卵）取卵（受精卵） 显微注射显微注射受精卵受精卵 新性状动物新性状动物363.将目的基因导入微生物细胞将目的基因导入微生物细胞原核生物特点：繁殖快、单细胞、遗传原核生物特点：繁殖快、单细胞、遗传物质少物质少方法：方法：用用Ca2+处理细胞处理细胞感受态细胞感受态细胞 表达载体与感受态细胞混合表达载体与感受态细胞混合 细胞吸收细胞吸收DNA分子分子感受态感受态Ca2+处理法处理法37若通过基因过程生产人的糖蛋白若通过基因过程生产人的糖蛋白可以用大肠杆菌作为工程菌吗？可以用大肠杆菌作为工

24、程菌吗？不可以，糖蛋白上的糖链是在内质网不可以，糖蛋白上的糖链是在内质网和高尔基体上加工完成，而内质网和高尔基体存在真核细胞中，大肠杆菌是原核生物，细胞和高尔基体上加工完成，而内质网和高尔基体存在真核细胞中，大肠杆菌是原核生物，细胞中不含这两种细胞器。中不含这两种细胞器。以酵母菌作为工程菌可以吗以酵母菌作为工程菌可以吗?可以，酵母菌为真核生物（真菌类）可以，酵母菌为真核生物（真菌类）38四四. .目的基因的检测与鉴定目的基因的检测与鉴定检查是否成功检查是否成功检测检测(分子分子水平水平)鉴定鉴定（个体水平）（个体水平）检测转基因生物染色体的检测转基因生物染色体的DNA上上是否插入了目的基因是否

25、插入了目的基因检测目的基因是否转录出了检测目的基因是否转录出了mRNA检测目的基因是否翻译出蛋白质检测目的基因是否翻译出蛋白质抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等方法方法方法方法方法方法DNA分子杂交分子杂交分子杂交（注意与上不同之处）分子杂交（注意与上不同之处）抗原抗原-抗体杂交抗体杂交（一）检测（一）检测1.检测转基因生物染色体的检测转基因生物染色体的DNA上是否插上是否插 入了目的基因入了目的基因 (关键步骤关键步骤)首先取出转基因生物的基因组首先取出转基因生物的基因组DNA用含目的基因的用含目的基因的DNA片段用放射性同位片段用放射性同位 素等作标记素等作标记,

26、以此做探针以此做探针使探针和转基因生物的基因组杂交使探针和转基因生物的基因组杂交,若显若显 示出杂交带示出杂交带,表明目的基因已插入染色体表明目的基因已插入染色体 DNA中中（1）方法）方法:DNA分子杂交分子杂交（2）过程）过程:40目的基因片段目的基因片段非目的基因片段非目的基因片段目的基因片段目的基因片段放射性标记放射性标记基因探针基因探针基因探针基因探针目的基因的检测示意图目的基因的检测示意图41DNA分子杂交示意图分子杂交示意图 采用一定的技术手段，将两种生物的采用一定的技术手段，将两种生物的DNA分子分子的单链放在一起，如果这两个单链具有互补的的单链放在一起，如果这两个单链具有互补

27、的碱基序列，那么，互补的碱基序列就会结合在碱基序列，那么，互补的碱基序列就会结合在一起，形成杂合双链区；在没有互补碱基序列一起，形成杂合双链区；在没有互补碱基序列的部位，仍然是两条游离的单链。的部位，仍然是两条游离的单链。 422.检测目的基因是否转录出了检测目的基因是否转录出了mRNA方法方法:分子杂交分子杂交过程过程: 用上述探针和转基因生物的用上述探针和转基因生物的mRNA杂交杂交,若出现杂交带若出现杂交带,表明目的基因转录表明目的基因转录出了出了mRNA43提取提取3.检测目的基因是否翻译成蛋白质检测目的基因是否翻译成蛋白质方法方法抗原抗原-抗体杂交抗体杂交苏云金杆苏云金杆菌菌Bt毒素

28、蛋白毒素蛋白将将Bt毒蛋白毒蛋白注射小鼠体内注射小鼠体内从小鼠血管从小鼠血管抽出血液分离出抗抽出血液分离出抗Bt毒素的抗体毒素的抗体抗体抗体蛋白质蛋白质(抗原抗原) 出现杂交带出现杂交带脱脱分分化化组织培组织培养养证明：提取蛋白质与证明：提取蛋白质与Bt毒素蛋白质一样毒素蛋白质一样44例例: :用棉铃饲喂棉铃虫，用棉铃饲喂棉铃虫，如虫吃后不出现中毒如虫吃后不出现中毒症状，说明未摄入目的症状，说明未摄入目的基因或摄入目的基因基因或摄入目的基因未表达。如虫吃后中毒未表达。如虫吃后中毒死亡，则说明摄入了死亡，则说明摄入了抗虫基因并得到表达。抗虫基因并得到表达。（二）（二）鉴定鉴定个体生物学水平的鉴定

29、个体生物学水平的鉴定抗虫、抗病接种实验，活性比较实验抗虫、抗病接种实验，活性比较实验45 不能，受体细胞必须表现出特定的性状，才能说明目的基因完成了表达。不能，受体细胞必须表现出特定的性状，才能说明目的基因完成了表达。受体细胞摄入受体细胞摄入DNA分子后就说明目的基因完成了表达吗？分子后就说明目的基因完成了表达吗？若不能表达，若不能表达，要对抗虫基因要对抗虫基因再进行修饰。再进行修饰。46归纳归纳: : 基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序1.获取目的基因获取目的基因u从基因文库从基因文库u利用利用PCRu化学方法人工合成化学方法人工合成2.构建基因表达载体构建基因表达载体u目的基因、

30、启动子、终止子、标记基因目的基因、启动子、终止子、标记基因3.将目的基因导入受体细胞将目的基因导入受体细胞u农杆菌转化法、显微注射法农杆菌转化法、显微注射法4.目的基因的检测与鉴定目的基因的检测与鉴定u检测：分子水平；是否插入、转录、翻译检测：分子水平；是否插入、转录、翻译u鉴定：个体生物学水平鉴定：个体生物学水平471.有关基因工程的叙述正确的是有关基因工程的叙述正确的是 A.限制酶只在获得目的基因时才用限制酶只在获得目的基因时才用B.重组质粒的形成在细胞内完成重组质粒的形成在细胞内完成C.质粒都可作为运载体质粒都可作为运载体D.蛋白质的结构可为合成目的基因提供蛋白质的结构可为合成目的基因提

31、供 资料资料D练习练习482.基因工程是在基因工程是在DNA分子水平上进行分子水平上进行设计施工的。在基因操作的基本步骤设计施工的。在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是中，不进行碱基互补配对的步骤是A.人工合成目的基因人工合成目的基因B.目的基因与运载体结合目的基因与运载体结合C.将目的基因导入受体细胞将目的基因导入受体细胞 D.目的基因的检测和表达目的基因的检测和表达C练习练习493.(2008理综山东卷理综山东卷)为扩大可耕地面积，增加为扩大可耕地面积，增加粮食产量，黄河三角洲等盐碱地的开发利用粮食产量，黄河三角洲等盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐基因培育出备受关

32、注。我国科学家应用耐盐基因培育出了耐盐水稻新品系。了耐盐水稻新品系。(1)获得耐盐基因后，构建重组获得耐盐基因后，构建重组DNA分子所用分子所用的限制性内切酶作用于图中的的限制性内切酶作用于图中的 处，处，DNA连接酶作用于连接酶作用于 处。（填处。（填“a”或或“b”）aa50(2)将重组将重组DNA分子导入水稻受体细胞的常用方法有农杆菌转化法和分子导入水稻受体细胞的常用方法有农杆菌转化法和_。(3)由导入目的基因的水稻细胞培养成植株需要利用由导入目的基因的水稻细胞培养成植株需要利用_技术，该技术的核心技术，该技术的核心是是_和和_。基因枪法基因枪法植物组织培养植物组织培养（花粉管通道法）（

33、花粉管通道法）脱分化脱分化再分化再分化51(4)为了确定耐盐转基因水稻是否培育成功，为了确定耐盐转基因水稻是否培育成功，既要用放射性同位素标记的既要用放射性同位素标记的_作探针进行分子杂交检测，又要用作探针进行分子杂交检测，又要用_方法从个体水平鉴定水稻方法从个体水平鉴定水稻植株的耐盐性。植株的耐盐性。耐盐基因耐盐基因浓度盐水浇灌浓度盐水浇灌一定一定52 4. 4.（20092009年天津高考改编）为从根本上解决水稻中的高植酸问题，可将植酸酶基因导入水稻，培年天津高考改编）为从根本上解决水稻中的高植酸问题，可将植酸酶基因导入水稻，培育低植酸转基因水稻品种。如图是获取植酸酶基因的流程。育低植酸转

34、基因水稻品种。如图是获取植酸酶基因的流程。酵母菌DNAmRNAcDNAcDNA文库基因组文库含目的基因的菌株目的基因含目的基因的菌株目的基因提取提取构建筛选筛选构建ABC分离分离53 据图回答：据图回答：（1 1）图中基因组文库）图中基因组文库 cDNAcDNA文库。文库。（2 2）B B过程需要的酶是过程需要的酶是 （3 3）目的基因和除可从构建的文库中分离外，还可以分别利用图中）目的基因和除可从构建的文库中分离外，还可以分别利用图中 和和 为模板为模板直接进行直接进行PCRPCR扩增，该过程中所用酶的显著特点是扩增，该过程中所用酶的显著特点是（4 4）A A、C C过程中都是筛选获取目的基因的过程，请说出筛选的依据过程中都是筛选获取目的基因的过程，请说出筛选的依据大于逆转录酶DNAcDNA耐高温可依据基因的相关信息（基因的核苷酸序列、基因的功能、基因在染色体上的位置、基因的转录产物及基因的表达产物等）获取目的基因。545.下列有关基因工程的叙述下列有关基因工程的叙述,正确的是正确的是()。A.载体上的标记基因有利于促进目的基因在受体细载体上的标记基因有利于促进目的基因在受体细 胞中表达胞中表达B.用逆转录法合成胰岛素基因时只能从胰岛用逆转录法合成胰岛素基因时只能从胰岛B细胞细胞 中提取相关的模板中提取相关的模板C.目的