可溶性补体受体2在风湿免疫病患者血清中的变化及意义

1、可溶性补体受体2在风湿免疫病患者血清中的变化及意义 作者：李宁宁, 侯平, 王晓非, 蒋莉, 肖卫国, 郭韵, 闫其军【摘要】 目的: 探讨风湿免疫病患者血清中可溶性补体受体2(sCR2)的变化及意义。方法: 采用ELISA法检测31例类风湿性关节炎(RA)、 18例系统性红斑狼疮(SLE)和20例健康体检者血清中可溶性补体受体2的浓度。结果: RA和SLE患者sCR2水平均明显低于健康体检者(P<0.01), RA和SLE患者间无统计学意义(P>0.05)。sCR2与年龄和性别无关, 在RA中与RF无关, 在SLE中与C3无关, 在RA 活动期明显低于非活动期(P

2、<0.05)。结论: 在自身免疫病中由于疾病本身导致了血清中sCR2的减少, 疾病的活动程度可能与sCR2血清水平有一定关系。 【关键词】 类风湿性关节炎; 系统性红斑狼疮; 可溶性补体受体2类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis, RA)和系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus, SLE) 是与人类白细胞特异性抗原相关的、 具有大量免疫复合物和抗体存在的自身免疫病, 严重危害人类健康1。可溶性补体受体2(soluble complement receptor 2, sCR2)是C3a 片段的终末产物C3d、 C3dg 的细胞受

3、体, 也是B 细胞上的EB 病毒受体, 是一种单链表面糖蛋白2。sCR2具有抑制补体经典途径和旁路途径的活化, 协助清除体内的免疫复合物, 调节B 细胞功能的作用。因此, sCR2可以对抗过度的炎症和免疫反应。sCR2在风湿免疫病患者血清中的变化及其意义, 目前国内尚无相关报道。我们用ELISA法检测了49例风湿免疫性疾病患者及20例健康体检者血清中sCR2的浓度, 探讨风湿免疫病患者血清中sCR2的变化及意义。1 材料和方法1.1 材料 49例风湿免疫病患者(观察组), 均为2007-03/2007-11在中国医科大学附属第一医院风湿免疫科住院患者。其中男5例、 女44例, 平均年龄为(47

4、.4±15.2)岁。其中RA患者31例, 男5例、 女26例; SLE患者18例, 全部为女性。所有患者均符合美国风湿病协会(ARA)1987年提出的RA的诊断标准及1982年修订的SLE的诊断标准。依据RA病情活动标准RA患者中活动期21例, 非活动组10例; 对照组20例均为健康体检者, 男3例、 女17例, 平均年龄为(32.4±9.4)岁。两组性别、 年龄差异无统计学意义(P>0.05), 具有可比性。Rainbow型酶标仪购自瑞士帝肯公司; sCR2 ELISA试剂盒购自美国RapidBio Lab公司。1.2 方法1.2.1 观察指标及实验方法 (

5、1)观察指标: 所有患者及正常对照均于清晨空腹时采静脉血, 以所测的血清sCR2浓度为观察指标。 (2)实验方法: 以固相的双抗体夹心酶联免疫吸附实验法(ELISA)为本实验研究方法。1.2.2 A值检测 将抽取的所有患者及正常对照的3 mL静脉血, 离心后取血清放入血清管中, -80冰箱冻存。试验前先将试剂盒及冻存的血清标本平衡至室温。从sCR2试剂盒中, 取出已包被抗体的酶标板, 每孔加入20 L sCR2标准品和血清, 每孔加入100 L抗人sCR2抗体工作液, 室温30 min甩干液体后洗涤5次; 每孔加入150 L抗人sCR2 POD, 室温温育30 min后洗涤5次; 每孔依次加入

6、100 L TMB显色液, 室温温育20 min; 每孔依次加50 L Stop Solution终止液, 450 nm 波长酶标仪测A值, 计算浓度。1.2.3 资料分析 以A值为纵坐标, sCR2的标准品浓度为横坐标, 做出标准曲线(已知两者之间为多项式关系) , 见图1。根据多项式方程及各样本的A值得出sCR2的水平。图1 sCR2水平变化的曲线示意图1.2.4 统计学分析 所得数据以x±s表示, 采用SPSS13.0统计软件统计, 统计方法采用方差分析, 两组间比较行t检验。P<0.05为差异有统计学意义。2 结果2.1 观察组与对照组之间血清sCR2水平比较

7、观察组RA患者血清sCR2水平为(162±21) g/L, SLE为(131±27) g/L, 对照组为(315±61) g/L。由表1可以看出, 观察组均明显低于对照组(P<0.01); RA 和SLE患者间无统计学意义。2.2 RA及SLE患者血清sCR2水平与相关指标的相关性 将RA患者血清sCR2水平与RA患者血清中RF的浓度进行相关分析, 发现RA患者血清sCR2水平与其RF无相关性; 将SLE患者血清sCR2水平与SLE患者血清中C3浓度进行相关分析, 发现SLE患者血清sCR2水平与其C3无相关性。2.3 RA患者活动期和非活动期中sC

8、R2水平的关系 21例RA活动期患者血清sCR2水平为(129±43)g/L, 10例RA非活动期患者血清sCR2水平为(231±21)g/L, 活动期RA患者血清sCR2水平低于其非活动期的sCR2, 具有统计学意义(P<0.05)。3 讨论补体受体2型(complement receptor 2, CR2, 又称CD21)主要分布于所有成熟B细胞和滤泡树突状细胞上, 也存在于某些上皮细胞和T细胞系的原始细胞3。CR2 有两种形式, 一种是膜型CR2 , 一种是可溶型CR2。后者只具有膜型CR2 胞外的活性部位, 可与膜型CR2 竞争配体4。SLE和RA是一

9、种以 B 细胞和 T 细胞功能障碍、 细胞因子失调以及免疫复合物沉积等为特点的自身免疫性疾病, T淋巴细胞对B淋巴细胞的调控失常是B淋巴细胞高度活化产生自身抗体导致自身免疫病的重要因素之一5。本研究中我们发现, RA和SLE患者血清sCR2水平明显低于正常对照组, RA和SLE患者间的sCR2血清水平无统计学意义, 在RA和SLE患者中, sCR2与年龄和性别无关。由此本实验得出结论血清sCR2的减少与疾病本身有关, 不仅会导致sCR2的低水平, 而且排除了不同年龄组及性别之间的差异。B细胞受体和被免疫复合物吞噬的C3d激活B细胞从而减少了B细胞表面的CR2的浓度。因此, 德国Konstanz

10、大学的Masilamani博士推测血清中sCR2水平的减少是由两方面引起: B细胞的激活; 通过循环免疫复合物吞噬的C3d来增加血浆sCR2的清除6。他们指出, sCR2是CR2糖蛋白的细胞外部分, 是由细胞的表面脱落到细胞质中的。他们收集健康受试者和类风湿性关节炎患者外周血中的B细胞和T细胞进行细胞培养, 然后分析CR2的脱落, 最后指出RA中sCR2的减少主要是由于通过免疫复合物对sCR2不断的清除。同时, sCR2的减少导致它的协助清除体内免疫复合物, 调节B 细胞功能的作用的减弱, 从而加速了自身免疫病的发展, 可见sCR2在自身免疫病的发生发展中起了重要作用。sCR2可与膜型CR2

11、竞争配体, 从而阻断抗原与膜型CR2结合, 对抗过度的炎症和免疫反应, 避免机体受到损害4。曾有动物实验研究表明重组sCR2 既保留了CR的功能与活性结构, 也能在较低的浓度下发挥有效作用7。提示sCR2在自身免疫病的临床治疗中可能发挥积极作用。本研究还发现, sCR2在RA中与RF无关, 在SLE中与C3无关, 但在RA活动期明显低于非活动期。证实血清sCR2水平与RA的活动度有关。患者病情活动期, sCR2的浓度明显减少, 不足以对抗炎症及免疫反应, 使得病情加重。因此, 我们推测自身免疫病的活动程度可能与sCR2血清水平有一定关系。【参考文献】 1 Van Roon JAG, Bijls

12、ma JWJ. TH2 mediated regulation in RA and the spondyloarthropathiesJ. Annals Rhenmatic Diseases, 2002, 61(7): 951-954.2 Fizazi K, Oldenburg J, Dunant J, et al. Assessing prognosis and optimizing treatment in patients with postchemotherapy viable nonseminomatous germcell tumors (NSGCT): results of th

13、e sCR2 international studyJ. Annals of Oncology, 2008, 19(2): 259-264.3 Keying Li, Azubuike I, Okemefuna, et al. Solution Structure of the Complex Formed between Human Complement C3d and Fulllength Complement Receptor Type 2J. J Mol Biol, 2008, 384(1): 137-150.4 苗江永, 张祥建, 刘瑞春, 等. 帕金森病患者外周血清可溶性补体受体2的变化及意义J. 临床荟萃, 2004, 19(21): 1232-1235.5 崔 嵬, 李永哲. 狼疮脑病自身抗体谱研究进展J. 中华风湿病学杂志, 2007, (9): 556-558.6 Masilamani M, von Kempis J, Illges H. Decreased levels of serum soluble complement receptorII (CR2/CD21