土壤中分解尿素纤维素的细菌的分离与计数

1、脲酶脲酶第1页/共42页 该去哪里取样该去哪里取样? 该配置怎样的培养基该配置怎样的培养基?2 2、方法：方法：造成有利于目的菌株生长的环境造成有利于目的菌株生长的环境同时抑制大多数其他类型微生物同时抑制大多数其他类型微生物阅读阅读P21 筛选菌株筛选菌株1、土壤中取样。怎样分离能分解尿素的土壤中取样。怎样分离能分解尿素的细菌？细菌？第2页/共42页脲酶脲酶氮源是尿素，只允许能以氮源是尿素，只允许能以尿素作为氮源的微生物生尿素作为氮源的微生物生长。长。第3页/共42页在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂（红指示剂（P26）第4页/共42页以尿素为以尿素为

2、唯一氮源唯一氮源的培养基的培养基牛肉膏牛肉膏蛋白胨蛋白胨培养基培养基是是分离分离尿素尿素细菌细菌判断该判断该培养基培养基有无选有无选择性择性实验组实验组对照组对照组培养基类型培养基类型是否是否接种接种 目的目的 结果结果只生长尿只生长尿素细菌素细菌生长多种生长多种微生物微生物（菌落数（菌落数明显多于明显多于实验组）实验组）是是第5页/共42页第6页/共42页1.1.显微镜直接计数法：这种方法是利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。此法的缺点是不能区分死菌和活菌。第7页/共42页第8页/共42页第9页/共42页某同学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌

3、落数的平均数为234，那么每克样品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1ml）()A.2.34108B.2.34109C.234D.23.4B第10页/共42页关键：恰当的稀释度关键：恰当的稀释度第11页/共42页第12页/共42页10106 6第一天结束时第一天结束时1 1号培养皿号培养皿37372 2号培养皿号培养皿40403 3号培养皿号培养皿3232P22统计菌落数统计菌落数第13页/共42页第14页/共42页第15页/共42页实验设计实验设计第16页/共42页取土样用的小铁铲和盛土样的的信封灭菌。取土样用的小铁铲和盛土样的的信封灭菌。准备准备牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培

4、养基和和选择培养基。选择培养基。每个稀释度每个稀释度下需要下需要3 3个选择培养基，个选择培养基，1 1个牛肉膏蛋白胨培养基。还需个牛肉膏蛋白胨培养基。还需要要8 8个灭菌试管和个灭菌试管和1 1个灭菌移液管个灭菌移液管 。 稀释相同倍数的菌液，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长稀释相同倍数的菌液，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显的菌落数目应明显多于多于选择培养基上的数目，因此，选择培养基上的数目，因此，牛牛肉膏蛋白胨培养基可以作为对照，用来判断选择培养基肉膏蛋白胨培养基可以作为对照，用来判断选择培养基是否起到了是否起到了选择选择作用。作用。 第17页/共42页第18页/共42页第19页/共

5、42页某细菌固体培养基的组成成分是某细菌固体培养基的组成成分是KHKH2 2POPO4 4、NaNa2 2HPOHPO4 4、MgSOMgSO4 4、葡萄糖、尿素、琼脂和蒸馏、葡萄糖、尿素、琼脂和蒸馏水，其中凝固剂是，碳源是水，其中凝固剂是，碳源是，氮源是。已知只有能合，氮源是。已知只有能合成脲酶的细菌才能在该培养基上生长，故该培养基成脲酶的细菌才能在该培养基上生长，故该培养基属于培养基。从同化作用类型上看，用该属于培养基。从同化作用类型上看，用该培养基培养的细菌属于。培养基培养的细菌属于。琼脂琼脂 葡萄糖葡萄糖尿素尿素选择选择异养型异养型第20页/共42页在微生物群体生长规律的测定中，种内斗

6、争在微生物群体生长规律的测定中，种内斗争最显著最激烈的时期是最显著最激烈的时期是A A调整期调整期 B B对数期对数期 C C稳定期稳定期 DD衰亡期衰亡期答案：答案：C C第21页/共42页1.1.对细菌群体生长规律测定的正确的表述是（对细菌群体生长规律测定的正确的表述是（ ） A. A.在液体培养基上进行在液体培养基上进行 B. B.至少接种一种细菌至少接种一种细菌 C. C.接种一个细菌接种一个细菌 D. D.及时补充消耗的营养物质及时补充消耗的营养物质 2.2.使用选择培养基的目的是（使用选择培养基的目的是（ ） A. A.培养细菌培养细菌 B. B.培养真菌培养真菌 C. C.使需要

7、的微生物大量繁殖使需要的微生物大量繁殖 D. D.表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别别3.3.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是是( )( ) A.CO A.CO2 2和和N N2 2 B. B.葡萄糖和葡萄糖和NHNH3 3 C.CO C.CO2 2和尿素和尿素 D. D.葡萄糖和尿素葡萄糖和尿素A AC CDD第22页/共42页4.4.下列说法不正确的是（下列说法不正确的是（ ） A. A.科学家从科学家从70708080度热泉中分离到耐高温的度热泉中分离到耐高温的TaqDNATaqDNA聚合酶

8、聚合酶 B. B.统计某一稀释度的统计某一稀释度的5 5个平板的菌落数依次为个平板的菌落数依次为M1M1、M2M2、M3M3、M4M4、M5M5，以，以M3M3作为该样品菌落数的作为该样品菌落数的估计值估计值 C. C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度 D. D.同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，种类最多。大，种类最多。B B第23页/共42页5.5.为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培为培养和分离出酵母菌并

9、淘汰杂菌，常在培养基中加入养基中加入A.A.较多的氮源物质较多的氮源物质 B.B.较多的碳源物质较多的碳源物质C.C.青霉素类药物青霉素类药物 D.D.高浓度食盐高浓度食盐C C第24页/共42页常见选择培养的方法 1、在培养基中加入某种物质 （1）青霉素 分离酵母菌和霉菌 (2)高浓度食盐 金黄色葡萄球菌 2、改变培养基的营养成分 （1）缺乏氮源 固氮微生物 （2）含无机碳源 自养微生物 (3)石油作为唯一碳源 能消除石油污染的微生物 3、改变微生物的培养条件 （1）高温 耐高温微生物 （2）无氧 厌氧型、兼性厌氧型第25页/共42页第26页/共42页 是自然界中纤维素含量最高的天然产物。是

10、自然界中纤维素含量最高的天然产物。纤维素是地球上含量最丰富的纤维素是地球上含量最丰富的 。 纤维素酶是一种纤维素酶是一种复合酶复合酶，一般认为它至少包括三，一般认为它至少包括三种组分，即种组分，即C C1 1酶、酶、 C CX X酶和葡萄糖苷酶酶和葡萄糖苷酶，前两种酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。解成葡萄糖。纤维素纤维素纤维二糖纤维二糖葡萄糖葡萄糖C C1 1酶酶CxCx酶酶葡萄糖苷酶葡萄糖苷酶第27页/共42页第28页/共42页2.2.纤维素分解菌的筛选纤维素分解菌的筛选 筛选纤维素分解菌的方法是筛选纤维素分解菌

11、的方法是_。该方法可以通过该方法可以通过_反应直接筛选。反应直接筛选。刚果红染色法刚果红染色法颜色颜色其原理是：刚果红可以与纤维素形其原理是：刚果红可以与纤维素形成成_，当纤维素被，当纤维素被 _分解后，红色复合物分解后，红色复合物 无无法形成，出现以法形成，出现以_为中心为中心的的_，我们可以通过，我们可以通过_来筛选纤维素分解菌。来筛选纤维素分解菌。红色复合物红色复合物纤维素酶纤维素酶纤维素分解菌纤维素分解菌 透明圈透明圈是否产生透明圈是否产生透明圈第29页/共42页刚果红能与哪项物质形成红色复合物刚果红能与哪项物质形成红色复合物A A纤维二糖纤维二糖 B B纤维素纤维素 C C葡萄糖葡萄

12、糖 D D麦芽糖麦芽糖第30页/共42页1.1.下列关于纤维素酶的说法，错误的是下列关于纤维素酶的说法，错误的是A.A.纤维素酶是一种复合酶，至少包括三种纤维素酶是一种复合酶，至少包括三种B.B.纤维素酶可把纤维素分解成葡萄糖纤维素酶可把纤维素分解成葡萄糖C.C.纤维素酶可用于去掉植物的细胞壁纤维素酶可用于去掉植物的细胞壁D.D.葡萄糖苷酶可把纤维素分解成葡萄糖葡萄糖苷酶可把纤维素分解成葡萄糖2.2.利用刚果红法可以筛选出纤维素分解菌，下利用刚果红法可以筛选出纤维素分解菌，下列说法错误的是列说法错误的是A.A.刚果红能与纤维素形成红色复合物刚果红能与纤维素形成红色复合物 B.B.刚果红能与纤维

13、二糖形成红色复合物刚果红能与纤维二糖形成红色复合物 C.C.刚果红不能与葡萄糖形成红色复合物刚果红不能与葡萄糖形成红色复合物D.D.若培养基上产生了透明圈，则说明已筛选若培养基上产生了透明圈，则说明已筛选出了纤维素分解菌出了纤维素分解菌第31页/共42页第32页/共42页选择培养1.1.选择培养的目的：选择培养的目的：2.2.制备选择培养基制备选择培养基参照课本参照课本2929页旁栏页旁栏a.a.旁栏中的配方是液体培养基还是固体培养基？旁栏中的配方是液体培养基还是固体培养基？为什么？为什么？b.b.这个培养基对微生物是否具有选择作用？这个培养基对微生物是否具有选择作用？如果具有，是如何进行选择

14、的？如果具有，是如何进行选择的？c.c.你能否设计一个对照实验，说明选择培养基你能否设计一个对照实验，说明选择培养基的作用的作用选择培养时应将锥形瓶固定在选择培养时应将锥形瓶固定在A A桌子上桌子上 B B温箱里温箱里 C C窗台上窗台上 D D摇床摇床第33页/共42页二、实验操作第34页/共42页C第35页/共42页练一练C第36页/共42页2.2.从土壤中分离获得某种微生物的步骤是从土壤中分离获得某种微生物的步骤是 土壤取样土壤取样 梯度稀释梯度稀释 选择培养选择培养 菌悬液涂布平板菌悬液涂布平板 挑选出单个菌落挑选出单个菌落A.A. B.B.C.C. D.D.B第37页/共42页A第38页/共42页 【练一练】 有些微生物能合成纤维素酶，通过对这些微生物的研究和作用，使人们能够利用秸秆等废弃物生产酒精，用纤维素酶处理服装面料等。研究人员用化合物A、硝酸盐、磷酸盐以及微量元素配制的培养基，成功的筛选到能产生纤维素酶的微生物。分析回答问题。 (1)培养基中加入的化合物A是_，为微生物的生长提供_，这种培养基属于_培养基。 (2)为了筛选出能产生纤维素酶的微生物，向培养基中加入_。纤维素纤维素碳源碳