加味散结镇痛方对实验性子宫内膜异位症大鼠腹腔液IL8IL13含量的影响

1、加味散结镇痛方对实验性子宫内膜异位症大鼠腹腔液IL-8、IL-13含量的影响【摘要】 目的：探讨加味散结镇痛方治疗子宫内膜异位症（EM）的作用机理。方法：将造模后的EM大鼠随机分成模型组、加味散结镇痛方高中低剂量组、达那唑组5组，每组10只，正常对照组10只。正常对照组、模型组灌服双蒸水；高、中、低剂量组分别灌服110%、55%、27.5%加味散结镇痛方；达那唑组每只以0.036 g/（g·d）达那唑混悬液灌胃。各组给药均为1次/d，共28 d。各组大鼠于末次给药24 h后处死，打开腹腔，生理盐水2 mL3 mL冲洗腹腔，收集腹腔液，置于肝素化无菌离心管中，以2 000/min离心1

2、0 min，收集上清液待测。按照ELISA试剂盒说明检测IL-8、IL-13含量。结果：与正常对照组比较，模型组大鼠腹腔液IL-8含量明显升高，IL-13含量明显降低（P0.01）；与模型组比较，达那唑组、加味散结镇痛方中低剂量各组IL- 8含量降低，IL-13含量升高；加味散结镇痛方高剂量组IL- 8、IL-13含量与正常对照组比较差异无统计学意义（P0.05）。结论：加味散结镇痛方的作用机制可能是通过改善免疫状况，调节细胞因子水平而抑制子宫内膜异位症的发展。 【关键词】 子宫内膜异位症；中药；加味散结镇痛方；白介素-8；白介素-13 Abstract Objective：To invest

3、igate the mechanism of modified Sanjie Zhentong prescription on rats with endometriosis （EM）.Methods：60 rats were randomly divided into normal control group，model group，danazol group，modified Sanjie Zhentong group 1（low dosage），group 2（middle dosage）and group 3（high dosage）.Abdominal cavity of each

4、rat was opened via midline laparotomy.Then abdominal cavity of rats was washed with 2 mL3 mL 0.9%NS and abdominal cavity fluid was collected.At last，the levels of IL-8 and IL-13 in abdominal cavity fluid of rats were detected on the fourth week after model establishment.Results：Compared with model g

5、roup，the content of IL-8 in danazol group，modified Sanjie Zhentong group 1，group 2 and group 3 were significantly decreased and the content of IL-13 were significantly increased（P0.05，P0.01）.There was no statistically significant difference between normal control group and modified Sanjie Zhentong g

6、roup 3 regarding the contents of IL-8 and IL-13.Conclusion：Modified Sanjie Zhentong prescription could restrain progression of EM through adjusting cytokine level and improving immune function. Key words endometriosis，traditional Chinese medicine，modified Sanjie Zhentong prescription，IL-8，IL-13 子宫内膜

7、异位症（简称内异症，EM）是妇科常见病和疑难病，近年来在我国的发病率有逐年上升的趋势。目前认为其发病多与免疫因素有关，患者常伴有局部及全身细胞免疫和体液免疫功能异常，主要表现为免疫抑制与免疫刺激不平衡状态。有研究报道，EM患者腹腔液中某些细胞因子的含量较非内异症者多，而另一些细胞因子含量较少，而异位病灶多发生在腹腔液存在的部位，提示细胞因子在内膜细胞腹膜上种植、黏附等方面可能具有重要的作用 1。对于本病的治疗，多以手术、药物为主，但效果欠佳。为此，我们观察了具有活血化瘀、软坚散结、益气化痰作用的加味散结镇痛方对EM大鼠免疫功能的影响，拟从免疫学角度探讨中药治疗EM的作用机制。 1 材料与方法

8、1.1 实验材料 1.1.1 实验动物 SD大鼠70只，雌性未孕，清洁级，体重（230±20）g，华中科技大学同济医学院实验动物中心提供，健康动物字号：SCXK（鄂）2004-0007。 1.1.2 实验药物 加味散结镇痛方为血竭、浙贝母、三七、薏苡仁、丹参、乌药、黄芪等药物浓煎为110的中药混悬液（每毫升含生药1.10 g）；达那唑：200 mg/粒，江苏联环药业股份有限公司生产，批号：20041001，药物配成每毫升含生药3 mg的混悬液。实验药物均于4 冰箱保存备用。 1.1.3 试剂与仪器 大鼠白介素-8（IL-8）、白介素-13（IL-13）定量ELISA试剂盒由上海森雄科

9、技实业有限公司提供，XYJ-801型离心机；TECAN A-5002型酶联免疫检测仪。 1.2 实验方法 1.2.1 造模 所有SD大鼠均自由饮食，饮水，同等条件下饲养。每日上午900做阴道脱落细胞涂片检查。观察动情周期，随机选择SD大鼠58只，在动情期4 d5 d，并连续有2个以上正常动情周期，在第3个动情周期时（阴道涂片为大量无核角化细胞时）将大鼠分别进行造模，术前6 h禁食不禁水。无菌条件下，用1%戊巴比妥钠（40 mg/kg）腹腔麻醉，固定大鼠四肢及头部于鼠板上；腹部剪毛，常规消毒皮肤，于下腹部正中靠左上方做一长约1.5 cm的切口；挑出左侧子宫角，结扎子宫系膜上的血管，再结扎需要切除

10、的子宫的两端，切取1.5 cm长的一段子宫组织；将切下的子宫组织迅速放入装有灭菌生理盐水的玻璃皿中，再将其纵向剖开；将剖开的子宫黏膜层贴于右侧腹壁内侧大血管处，对角缝合于腹壁，尽量使腹部大血管穿行于子宫黏膜之下，缝针穿过腹壁肌层；检查腹腔内无出血，缝合腹壁及皮肤，常规消毒；术后用4万U青霉素腹腔注射，局部皮肤碘伏消毒，2次/d，连续3 d，常规饲养。其余大鼠作为正常对照组，常规饲养。 1.2.2 分组与给药 造模4 w后，经病理组织学检查，异位内膜已成活。将造模后的EM大鼠随机分成模型组、加味散结镇痛方高剂量组（高剂量组）、加味散结镇痛方中剂量组（中剂量组）、加味散结镇痛方低剂量组（低剂量组）

11、、达那唑组5组，每组10只，正常对照组10只。正常对照组、模型组每只灌服双蒸水0.01 mL/（g·d）；高剂量组每只灌服110%加味散结镇痛方0.01 mL/（g·d）；中剂量组每只灌服55%加味散结镇痛方0.01 mL/（g·d）；低剂量组每只灌服27.5%加味散结镇痛方0.01 mL/（g·d）；达那唑组每只以0.036 g/（g·d）达那唑混悬液灌胃。各组给药均为1次/d，共28 d。各组大鼠于末次给药24 h后处死，打开腹腔，生理盐水2 mL3 mL冲洗腹腔，收集腹腔液，置于肝素化无菌离心管中，以2 000 /min离心10 min，

12、收集上清液待测。按照ELISA试剂盒说明书检测IL-8、IL-13含量。 1.3 统计学方法 所有数据采用统计软件包SPSS11.5进行分析，结果以均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用方差分析。 2 结 果 各组大鼠腹腔液中IL-8、IL-13含量比较，结果见表1。由表1可以看出，与正常对照组比较，模型组、低剂量组、中剂量组、达达那唑组大鼠腹腔液IL-8含量升高，IL-13降低；与模型组比较，低剂量组、中剂量组、高剂量组、达那唑组大鼠腹腔液IL-8含量降低，IL-13含量升高。 3 讨 论 EM发病机理至今尚不清楚，已有的种植学说、化生学说、转移学说等对病因均不能做出全

13、面的解释。近年来随着现代免疫学说的迅速发展，越来越多的学者证实了EM患者病人存在免疫系统的功能变化，其中包括细胞免疫功能的缺陷和体液免疫功能的变化。认为EM是一种自身免疫性疾病，不仅可以产生多种自身抗体，而且还表现为体内多种细胞因子活性增强。也有研究认为EM患者腹腔液中众多细胞因子含量发生变化，如IL-1、IL-6、IL-8等含量增加，IL-13含量降低 2。其中IL-8具有前炎性、促进生长、生成血管的特性；IL-13具有抑制单核/巨噬细胞促进炎细胞因子分泌的功能。作为细胞间信号传导重要介质的白介素类细胞因子之异常调节和在腹腔液中的含量改变，或许是EM导致盆腔纤维化和粘连的重要原因之一。为此我

14、们测定了实验性EM大鼠腹腔液IL-8、IL-13含量，结果发现造模后大鼠腹腔液中IL-8含量明显增加，IL-13含量明显降低，灌服加味散结镇痛方和达那唑后IL-8含量明显降低，IL-13含量明显提高，两组相比其差异无统计学意义，说明EM动物模型亦存在免疫功能失常，而加味散结镇痛方可调节其免疫功能恢复至正常水平。加味散结镇痛方是在原散结镇痛方（血竭、三七、浙贝、苡仁）的基础上，加黄芪、丹参、乌药等组成。方中血竭活血化瘀、祛腐生肌、止血收敛、消肿止痛，为君药，在本草纲目中，李时珍称之为“活血圣药”，临床用之，屡屡效验。三七散瘀止血、活血消肿定痛；丹参活血化瘀，“一味代四物”，能凉血消痈止痛、养血安神，有化瘀而不伤气血之特点，二药合用，相辅相成，使活血化瘀、通络止痛（下转第20页）（上接第17页）之力倍增，共为臣药；乌药温中散寒、行气止痛，薏苡仁利湿化痰，浙贝母化痰积、消结，加黄芪补益元气，使气旺而促血行，祛瘀而不伤正为佐使。诸药合用，共奏活血化瘀、软坚散结、益气化痰之功。现代药理研究证实，活血化瘀、软坚散结、益气化痰药具有改善微循环、抑制组织异常增生及免疫调节功能，方中