超敏PCR宣讲张忠新课件

1、高灵敏度病毒载量检测在肝炎高灵敏度病毒载量检测在肝炎诊疗中的意义诊疗中的意义张忠新张忠新1超敏超敏pcr宣讲张忠新宣讲张忠新hbv hbv 感染是全球性卫生问题感染是全球性卫生问题 33% 的人在一生中会感染hbv; 成年感染者中5%-10%会转为慢性乙肝, 全球约有3.5亿慢性hbv感染者; 每年,有100万人死于与乙型肝炎相关的肝硬化或者肝癌; = 每30s 夺走一个生命 感染率最高的区域在亚洲,非洲.lavanchy. j viral hepat 2004; world health organization, 2008; elgouhari, cleve clin j med 2008

2、不同的标志物提供不同的诊断以及治疗监控的信息不同的标志物提供不同的诊断以及治疗监控的信息诊断诊断启动治疗启动治疗鉴别鉴别初始应答初始应答预测预测治疗应答治疗应答监测耐药监测耐药证明证明持续应答持续应答hbsaghbsaghbsaghbsag定量定量抗抗-hbs-hbshbeaghbeag抗抗-hbe-hbe抗抗-hbc-hbchbv dnahbv dnaaltaltmodified from pawlotsky et al. gastroenterol 20083超敏超敏pcr宣讲张忠新宣讲张忠新慢性乙型肝炎慢性乙型肝炎干干扰扰素或素或口服核苷（酸）口服核苷（酸）类类似物似物口服核苷（酸）口服

3、核苷（酸）类类似物或似物或干干扰扰素素观观察，如察，如altalt升高，升高，或肝或肝组织组织炎症坏死炎症坏死g2,g2,或或纤维纤维化化s2s2无肝硬化无肝硬化有肝硬化有肝硬化hbeag+hbeag+hbv dnahbv dna20000 iu/ml20000 iu/mlhbeag-hbeag-hbv dnahbv dna2000 iu/ml2000 iu/mlaltalt2uln2ulnaltalt2uln2ulnaltalt2uln2uln失代失代偿偿期期代代偿偿期期hbeag+hbeag+hbv dnahbv dna2000 iu/ml2000 iu/mlhbeag-hbeag-hbv

4、 dnahbv dna200 iu/ml200 iu/mlhbv dnahbv dna可可检测检测到到口服核苷（酸）口服核苷（酸）类类似物似物中国慢性乙型肝炎防治指南（中国慢性乙型肝炎防治指南（2010版）版） 高灵敏度高灵敏度hbv dna检测能更准确判断检测能更准确判断治疗起点治疗起点启启动动治治疗疗 2000 iu2000 iu/ml/ml不充分应答不充分应答60-2000 iu60-2000 iu/ml/ml部分部分应应答答week 12: week 12: 鉴别鉴别原原发发性无性无应应答答week 24: week 24: 疗疗效早期效早期预测预测keeffe et al clin

5、gastroenterol hepatol 2007高灵敏度高灵敏度hbv dna检测检测能更准确判断能更准确判断应答情况应答情况ql=检测下限检测下限 (聚合酶链反应聚合酶链反应 (pcr)-检测不到检测不到 4 logql 3003 log 34 log 4 log203146576383791071656868606025255 588887878636320200204060801001781571820162410202 年年时时pcr阴阴性性（%）高精准高精准hbv dna检测检测能更准确能更准确预测远期疗效预测远期疗效高灵敏度高灵敏度hbv dna检测比检测比普通试剂普通试剂能更

6、准确能更准确判定判定病毒学突破病毒学突破hbv dna (log10 iu/ml) 5.04.03.02.01.06.0病毒学突破病毒学突破antiviral drugantiviral drugmonths60121816普通试剂普通试剂cobas taqman检测灵敏度检测灵敏度南方医院用67例治疗前为hbv dna强阳性样本，治疗24周后采用cobas taqman hbv检测与普通检测试剂结果对比67例患者: hbeag(+)，alt2uln，hbv dna 6.0 log10 iu/ml-治疗前用cobas检测结果为7.900.73 log10 iu/ml-治疗前用普通试剂检测结果为

7、7.110.44 log10 iu/ml检测试剂检测试剂病例数病例数hbv dnahbv dna分布范围分布范围普通hbv3434例例33例未检测到，100 iu/ml300-105 iu/mlcap/ctm hbv8 8例例2626例例 33例target not detected274.5e3 iu/ml104106 iu/ml普通pcr法 “假阴性”率高达44% (26/59)44% (26/59)cobas高灵敏度高灵敏度hbv dna检测能更准确判断检测能更准确判断治疗终点，治疗终点，有有效效防漏检防漏检（实例（实例1 1）cobas hbv430430例血浆例血浆realtime

8、pcrrealtime pcrhbv1000 copies/mlhbv20 20 iu/mliu/ml208/430(48.4%)208/430(48.4%)20 iu/ml 1000 copies/mlcobas ampliprep/cobas taqman hbv病毒载量系统对慢性乙型肝炎抗病毒治疗监测的意义李敏伟 沃健儿 倪淑君 王 静 李兰娟浙江大学附属第一医院传染病诊治国家重点实验室data on filecobas高灵敏度高灵敏度hbv dna检测能更准确判断检测能更准确判断治疗终点，治疗终点，有有效效防漏检防漏检（实例（实例 2 2）高灵敏度高灵敏度hbv dna检测的检测的意义

9、意义更准确判断更准确判断治疗起点治疗起点更准确判断更准确判断应答情况应答情况更准确更准确预测远期疗效预测远期疗效更早发现更早发现病毒学突破病毒学突破更准确更准确预测耐药发生预测耐药发生更准确判断更准确判断治疗终点治疗终点正确的临床决策正确的临床决策 全球有2亿人感染hcv 流行率2.23.0%13 1.7亿慢性携带者2 hcv相关的肝脏疾病每年夺取超过25万人的生命 1 80% 的感染者没有任何的临床症状5,6 4085% 的感染着未得到诊断712hcvhcv临床背景临床背景1chevaliez. clin microbiol infect 2011; 2who 2003; 3lavanchy

10、. liver int 2009; 4wiessing et al. eurosurveillance 2008; 5hoofnagle. hepatology 2002; 6lemon et al. fields virology 2007; 7; 8schlosser et al. easl 2009; 9vermehren et al. dgvs 2010; 10gane. new zealand doctor 2007; 11wild. gastroenterology and endoscopy news 2010; 12. 国际指南国际指南明确提出明确提出高高检测灵敏度要求检测灵敏

11、度要求hcv rna检测应使用高灵敏度的试剂（最低检出限（最低检出限15 iu/ml15 iu/ml）持续病毒学应答持续病毒学应答(svr)无应答无应答基线基线治疗治疗复发复发部分应答部分应答undetectablehcv rnahcv rna反弹反弹hcv rna hcv rna 检测限检测限疗效判定时间点疗效判定时间点高灵敏度高灵敏度hcv rna检测能更有效执行检测能更有效执行rgt策略策略病毒学反应病毒学反应定义定义rvr rvr 治疗治疗4 4周时，周时，hcv rna hcv rna 转阴转阴evr / cevrevr / cevr治疗治疗4 4周时，周时，hcv rna hcv

12、rna 阳性阳性但但1212周时周时转阴转阴dvr/pevrdvr/pevr治疗治疗1212周时，周时，hcv rna hcv rna 阳性，但相对于治阳性，但相对于治疗前基线下降疗前基线下降 2 log2 log1010，在治疗在治疗2424周时周时转阴转阴nrnr治疗治疗1212周时，周时，hcv rna hcv rna 下降下降 2 log (2 log1010) )peg-ifn/rbvpeg-ifn/rbv治疗治疗4848周周peg-ifn/rbvpeg-ifn/rbv治疗治疗4848周周停止治疗停止治疗基线基线wk 4wk 12wk 24hcv rna hcv rna 阳性阳性pe

13、g-ifn/rbvpeg-ifn/rbv治疗治疗7272周周hcv rna hcv rna 阴性阴性hcv rna hcv rna 阳性阳性 (2 log (2 log (2 log1010) ) 此后阴此后阴性性停止治疗停止治疗基线基线wk 4wk 12peg-ifn/rbv peg-ifn/rbv for 48 weeksfor 48 weekshcv rna hcv rna 阳性阳性 (2 log (2 log10 (iu/ml)72周周 (svr) 终止治疗终止治疗 复发复发 由于由于pevrpevr被误判为被误判为cevrcevr，未延长疗程，导致出现所谓，未延长疗程，导致出现所谓的

14、的“复发复发”cobas taqman检测下限检测下限 (15 iu/ml)普通试剂检测下限普通试剂检测下限 (1000 iu/ml)cobascobas普通检测普通检测魏来、陈新月等 ，传染病信息 2012年第25卷第3期223223例例hcvhcv患者患者非非rvr 33.63%rvr 33.63%(75/223)(75/223)rvr 66.37%rvr 66.37%(148/223)(148/223)4 4周周阳性 62.67%（47/75）假阴性假阴性 37.33%37.33%（2828/75）cobascobascevr 89.24%cevr 89.24%(199/223) (19

15、9/223) 非非cevr 89.24%cevr 89.24%(24/223) (24/223) 普通检测普通检测阳性 79.17%（19/24）假阴性假阴性 20.83%20.83%（5 5/24）高灵敏度高灵敏度hcv rna检测指导检测指导正确正确的的临床决策临床决策灵敏度较差的检测可能导致不正确的治疗决策灵敏度较差的检测可能导致不正确的治疗决策普通检测试剂可能导致不当的缩短疗程，增加复发可能普通检测试剂可能导致不当的缩短疗程，增加复发可能1212周周cobas高灵敏度高灵敏度hcv rna检测的检测的意义意义更有效执行更有效执行rgtrgt策略策略更准确判断更准确判断应答模式应答模式有

16、效防止有效防止pevrpevr与与cevrcevr的的误判，误判，正确指导用药正确指导用药正确的临床决策正确的临床决策罗氏罗氏cobas taqman病毒载量检测系统病毒载量检测系统+全自动全自动病毒载量平台病毒载量平台, sample-in, result-out 专利的内部标准品定量专利的内部标准品定量，保障结果的准确度和精密度，保障结果的准确度和精密度流程灵活方便：流程灵活方便：试剂即拿即用，实验中随时添加样本、试剂及耗材试剂即拿即用，实验中随时添加样本、试剂及耗材实验实验条码条码自动扫描设计自动扫描设计,方便实验记录及方便实验记录及追踪追踪有效有效避免污染避免污染罗氏罗氏cobas t

17、aqman病毒载量卓越的检测性能病毒载量卓越的检测性能hbv dnahcv rnahcv rna, v2(已上市已上市)灵敏度灵敏度 (lod)20 iu/ml 15 iu/ml15 iu/ml线性范围线性范围20 - 1.7e8 iu/ml43 6.9e7 iu/ml15 1.0e8 iu/ml特异性特异性100%100%100%亚型亚型a-h; pre-core mutantsgt 1-6gt 1-6样本量样本量650 l1 ml650 ul1.2 x 101.2 x 108 8 iu/ml hbv iu/ml hbvnclpchpc- -+ +- - -+ +- -阴性质控品低浓度阳性质

18、控品高浓度阳性质控品正常人血浆sk24rack 1nclpchpc+ +- -+ + +- -+ +sk24rack 2nclpchpc- -+ +- - -+ +- -sk24rack 3nclpchpc+ +- -+ + +- -+ +sk24rack 4每批4架重复检测5批样本棋盘放置研究显示零交叉污染样本棋盘放置研究显示零交叉污染结果:全部阴性质控品及正常人血浆结果报告均为“target not detected”*roche internal studies data on file罗氏罗氏cobas taqman 病毒载量有效病毒载量有效防交叉污染防交叉污染who who 标准品标

19、准品00.51.01.5-0.5-1.0-1.5602x1032x1042x105li j., et al. (2011). poster presentation at the asian pacific association for the study of the liver annual meeting.mean log differencemean log differencecobas taqman hbv dna 普通试剂 1普通试剂 2病毒学应答治疗起始浓度expected level (iu/ml)expected level (iu/ml)多中心评估多中心评估: who标准品标准品溯源性溯源性对比对比正确的临床决策需要可靠的实验室结果正